| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 符号与缩略语说明 | 第12-13页 |
| 前言 | 第13-14页 |
| 文献综述 | 第14-36页 |
| 第一章 石油污染及其生物修复 | 第14-18页 |
| 1 石油的概述 | 第14页 |
| 2 石油的污染及危害 | 第14-15页 |
| 3 石油污染的治理 | 第15-18页 |
| 第二章 微生物降解烷烃的研究进展 | 第18-29页 |
| 1 烷烃的概述 | 第18-19页 |
| 2 烷烃的微生物降解 | 第19-29页 |
| ·降解烷烃的微生物种类 | 第19页 |
| ·微生物降解烷烃的机理 | 第19-20页 |
| ·烷烃羟化酶 | 第20-24页 |
| ·alkB基因的组成、结构和功能 | 第24-25页 |
| ·烷烃羟化酶的不同的调控机制 | 第25-29页 |
| 参考文献 | 第29-36页 |
| 实验部分 | 第36-112页 |
| 第一章 烷烃降解菌株Alcanivorax sp.2B5的分离、鉴定和降解特性研究 | 第36-58页 |
| 1 材料与方法 | 第36-41页 |
| ·菌株、培养基与试剂 | 第36-37页 |
| ·降解菌株的富集和分离 | 第37页 |
| ·降解菌株的16S rDNA序列的鉴定 | 第37-40页 |
| ·降解菌株系统发育地位的确定 | 第40页 |
| ·降解菌株的培养特征及生理生化鉴定 | 第40页 |
| ·分析测定方法 | 第40-41页 |
| 2 结果与分析 | 第41-54页 |
| ·烷烃降解菌株的分离、筛选 | 第41页 |
| ·菌株2B5的菌落形态及生理生化特征 | 第41-42页 |
| ·菌株2B5对抗生素的抗性 | 第42-43页 |
| ·菌株2B5的基因组DNA的提取 | 第43页 |
| ·菌株2B5的16S rDNA的序列分析 | 第43-44页 |
| ·菌株2B5对不同碳氮源的利用 | 第44-45页 |
| ·菌株2B5降解特性的研究 | 第45-54页 |
| 3 讨论 | 第54-56页 |
| 本章小结 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-58页 |
| 第二章 Alcanivorax sp.2B5的烷烃羟化酶基因的克隆与功能分析 | 第58-90页 |
| 第一节 Alcanivorax sp.2B5 alkB基因的克隆与功能分析 | 第58-75页 |
| 1 材料与方法 | 第58-65页 |
| ·菌株与质粒 | 第58页 |
| ·培养基与试剂 | 第58-59页 |
| ·抗生素及使用浓度 | 第59页 |
| ·基因组DNA和质粒DNA的提取 | 第59页 |
| ·alkB基因的PCR扩增 | 第59-62页 |
| ·DNA的酶切反应体系 | 第62-63页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第63页 |
| ·P.fluorescens KOB2Δ1感受态细胞的制备 | 第63-64页 |
| ·电转化过程及重组子的筛选 | 第64页 |
| ·alkB基因的半定量RT-PCR测定 | 第64-65页 |
| 2 结果与分析 | 第65-74页 |
| ·alkB基因保守片段的PCR扩增 | 第65-66页 |
| ·alkB基因全序列的克隆与分析 | 第66-71页 |
| ·alkB基因的功能验证 | 第71-74页 |
| 3 讨论 | 第74-75页 |
| 第二节 Alcanivorax sp.2B5细胞色素P450基因的克隆与表达 | 第75-87页 |
| 1 材料与方法 | 第75-79页 |
| ·培养基与试剂 | 第75页 |
| ·菌株与质粒 | 第75-76页 |
| ·抗生素及使用浓度 | 第76页 |
| ·基因组DNA和质粒DNA的提取 | 第76页 |
| ·P450基因的克隆与表达载体的构建 | 第76-78页 |
| ·SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析 | 第78-79页 |
| ·酶活测定 | 第79页 |
| 2 结果与分析 | 第79-85页 |
| ·P450基因保守片段的PCR扩增 | 第79页 |
| ·P450基因的克隆与序列分析 | 第79-81页 |
| ·多顺反子结构fdx、P450和fdr基因共表达系统的构建及其在E.coli BL21(DE3)中的表达 | 第81-85页 |
| 3 讨论 | 第85-87页 |
| 本章小结 | 第87-88页 |
| 参考文献 | 第88-90页 |
| 第三章 烷烃降解菌株Geobacillus sp.MH-1的分离、鉴定和降解特性研究 | 第90-100页 |
| 1 材料与方法 | 第90-91页 |
| ·菌株、培养基与试剂 | 第90-91页 |
| ·降解菌株的富集和分离 | 第91页 |
| ·降解菌株的16S rDNA序列的鉴定 | 第91页 |
| ·降解菌株系统发育地位的确定 | 第91页 |
| ·降解菌株的培养特征及生理生化鉴定 | 第91页 |
| ·分析测定方法 | 第91页 |
| 2 结果与分析 | 第91-97页 |
| ·烷烃降解菌株的分离、筛选 | 第91页 |
| ·菌株MH-1的菌落形态及生理生化特征 | 第91-92页 |
| ·菌株MH-1对抗生素的抗性 | 第92页 |
| ·菌株MH-1的基因组DNA的提取 | 第92-93页 |
| ·菌株MH-1的16S rDNA的序列分析 | 第93-94页 |
| ·菌株MH-1的降解特性研究 | 第94-97页 |
| 3 讨论 | 第97-98页 |
| 本章小结 | 第98-99页 |
| 参考文献 | 第99-100页 |
| 第四章 Geobacillus sp.MH-1的alkB基因及其基因簇的克隆与分析 | 第100-112页 |
| 1 材料与方法 | 第100-102页 |
| ·培养基与试剂 | 第100页 |
| ·菌株与质粒 | 第100页 |
| ·抗生素及使用浓度 | 第100页 |
| ·菌体基因组DNA和质粒DNA的提取 | 第100-101页 |
| ·alkB基因的PCR扩增 | 第101-102页 |
| 2 结果与分析 | 第102-107页 |
| ·alkB基因保守片段的克隆 | 第102-103页 |
| ·alkB-geo6基因及其基因簇的克隆与序列分析 | 第103-107页 |
| 3 讨论 | 第107-109页 |
| 本章小结 | 第109-110页 |
| 参考文献 | 第110-112页 |
| 全文总结 | 第112-114页 |
| 本论文的主要创新点 | 第114-116页 |
| 附录 | 第116-126页 |
| 攻读博士学位期间发表的论文 | 第126-128页 |
| 致谢 | 第128页 |
