| 摘要 | 第1-12页 |
| ABSTRACT | 第12-17页 |
| 第一章 猪繁殖与呼吸综合征病毒研究进展 | 第17-45页 |
| 1 病毒基因组和编码蛋白 | 第17-24页 |
| ·病毒基因组 | 第17-19页 |
| ·病毒蛋白 | 第19-23页 |
| ·病毒变异 | 第23-24页 |
| 2 病毒感染和病毒对宿主基因表达调节 | 第24-27页 |
| 3 病毒免疫特性 | 第27-36页 |
| ·先天性免疫 | 第27-30页 |
| ·获得性免疫 | 第30-36页 |
| 4 疫苗研究 | 第36-40页 |
| ·商品化疫苗免疫效果 | 第36-37页 |
| ·新型疫苗研制 | 第37-39页 |
| ·疫苗研制所面临的挑战 | 第39-40页 |
| 5 病毒净化 | 第40-41页 |
| 6 结束语 | 第41-45页 |
| 第二章 我国猪繁殖与呼吸综合征病毒流行毒株分离与鉴定 | 第45-57页 |
| 1 材料与方法 | 第46-49页 |
| ·病料及细胞 | 第46页 |
| ·试剂 | 第46页 |
| ·Marc-145细胞的复苏与传代 | 第46页 |
| ·PAM细胞的制备和冻存 | 第46-47页 |
| ·病料的处理 | 第47页 |
| ·病毒接种 | 第47页 |
| ·病毒鉴定 | 第47-48页 |
| ·病毒滴度测定 | 第48-49页 |
| 2 结果 | 第49-54页 |
| ·临床流行病学与病理变化观察 | 第49-51页 |
| ·病毒分离与细胞病变观察 | 第51-52页 |
| ·PCR鉴定 | 第52页 |
| ·IFA鉴定 | 第52-53页 |
| ·病毒滴度测定 | 第53-54页 |
| 3 讨论 | 第54-57页 |
| 第三章 2004-2009年猪繁殖与呼吸综合征病毒流行毒株NSP2基因遗传变异分析 | 第57-71页 |
| 1 材料与方法 | 第58-60页 |
| ·病毒 | 第58页 |
| ·试剂 | 第58页 |
| ·病毒RNA提取 | 第58页 |
| ·Nested-RT-PCR扩增NSP2基因 | 第58-59页 |
| ·PCR产物克隆与测序 | 第59页 |
| ·核苷酸序列和推导的氨基酸序列分析及系统进化分析 | 第59-60页 |
| 2 结果 | 第60-66页 |
| ·PCR扩增与克隆 | 第60页 |
| ·NSP2基因序列测定 | 第60-63页 |
| ·基因同源性比较 | 第63-64页 |
| ·NSP2基因缺失分析 | 第64页 |
| ·NSP2基因系统进化树 | 第64-66页 |
| 3 讨论 | 第66-71页 |
| 第四章 猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP2基因不同变异毒株对仔猪致病性研究 | 第71-87页 |
| 1. 材料与方法 | 第72-77页 |
| ·病毒 | 第72-73页 |
| ·试剂 | 第73页 |
| ·实验动物及动物饲养条件 | 第73页 |
| ·病毒培养及病毒滴度测定 | 第73页 |
| ·病毒GP5序列测定和比较 | 第73-74页 |
| ·动物接种 | 第74-75页 |
| ·病毒致病力评价 | 第75页 |
| ·Real time-PCR | 第75-76页 |
| ·病理切片制备与病理变化观察 | 第76-77页 |
| 2. 结果 | 第77-82页 |
| ·病毒滴度 | 第77-78页 |
| ·病毒基因序列比较 | 第78-79页 |
| ·病毒致病力评价 | 第79-82页 |
| 3 讨论 | 第82-87页 |
| 第五章 猪繁殖与呼吸综合征病毒GP3-GP5与猪GM-CSF融合基因重组腺病毒的构建与鉴定 | 第87-107页 |
| 1 材料与方法 | 第88-98页 |
| ·质粒、菌株、病毒与细胞 | 第88页 |
| ·试剂 | 第88页 |
| ·目的基因的扩增、克隆、鉴定和测序分析 | 第88-90页 |
| ·重组穿梭载体的构建 | 第90-92页 |
| ·pSh-GF35质粒Kpn Ⅰ和EcoR Ⅴ酶切鉴定 | 第92页 |
| ·DNA序列分析 | 第92-93页 |
| ·穿梭载体pSh-GF35与腺病毒骨架载体pAdEasy-1在大肠杆菌内同源重组 | 第93-94页 |
| ·重组腺病毒质粒rAd-GF35 Pac Ⅰ酶切鉴定 | 第94页 |
| ·重组腺病毒rAd-GF35的包装 | 第94-95页 |
| ·重组腺病毒的滴度测定 | 第95页 |
| ·目的蛋白表达的鉴定 | 第95-97页 |
| ·集落细胞因子生物活性鉴定 | 第97-98页 |
| 2 结果 | 第98-104页 |
| ·GM-CSF、GP3及GP5基因的扩增 | 第98-99页 |
| ·重组穿梭载体的构建与鉴定 | 第99页 |
| ·重组腺病毒质粒的鉴定 | 第99-100页 |
| ·重组腺病毒的收获 | 第100页 |
| ·重组腺病毒的表达鉴定 | 第100-102页 |
| ·重组腺病毒rAd-GF35滴度 | 第102页 |
| ·集落细胞刺激因子活性检测 | 第102-104页 |
| 3 讨论 | 第104-107页 |
| 第六章 猪繁殖与呼吸综合征病毒GP3-GP5与猪GM-CSF融合基因重组腺病毒小鼠免疫特性研究 | 第107-119页 |
| 1 材料与方法 | 第108-112页 |
| ·病毒与细胞 | 第108页 |
| ·主要试剂 | 第108页 |
| ·病毒处理 | 第108-109页 |
| ·小鼠免疫试验 | 第109页 |
| ·ELISA抗体测定 | 第109-110页 |
| ·病毒中和试验 | 第110-111页 |
| ·淋巴细胞增殖试验 | 第111页 |
| ·细胞因子测定 | 第111页 |
| ·数据统计分析 | 第111-112页 |
| 2 结果 | 第112-115页 |
| ·PRRSV特异性抗体检测 | 第112页 |
| ·PRRSV特异的淋巴细胞增殖检测 | 第112页 |
| ·PRRSV刺激小鼠脾淋巴细胞分泌细胞因子检测 | 第112-115页 |
| 3 讨论 | 第115-119页 |
| 第七章 猪繁殖与呼吸综合征病毒GP3-GP5与猪GM-CSF融合基因重组腺病毒猪体免疫保护效力研究 | 第119-135页 |
| 1 材料与方法 | 第120-125页 |
| ·病毒和细胞 | 第120页 |
| ·试剂 | 第120页 |
| ·实验动物 | 第120-121页 |
| ·猪体免疫保护试验 | 第121页 |
| ·PRRSV抗原制备 | 第121页 |
| ·iELISA | 第121页 |
| ·病毒中和试验 | 第121-122页 |
| ·淋巴细胞增殖试验 | 第122-123页 |
| ·细胞因子测定 | 第123页 |
| ·Real-timePCR检测血清中PRRSVRNA含量 | 第123-124页 |
| ·临床症状及肺脏大体病变统计 | 第124页 |
| ·肺脏组织病理变化观察 | 第124-125页 |
| ·数据统计分析 | 第125页 |
| 2 结果 | 第125-131页 |
| ·PRRSV ELISA与中和抗体测定 | 第125-126页 |
| ·PRRSV特异的淋巴细胞增殖 | 第126页 |
| ·血清中细胞因子的检测 | 第126-127页 |
| ·攻毒猪临床表现及体温变化 | 第127-128页 |
| ·病毒血症检测 | 第128-129页 |
| ·攻毒猪肺脏眼观病理变化观察 | 第129-130页 |
| ·肺脏组织病理变化观察 | 第130-131页 |
| 3 讨论 | 第131-135页 |
| 参考文献 | 第135-167页 |
| 全文总结 | 第167-169页 |
| 致谢 | 第169-171页 |
| 攻读博士学位期间发表的论文 | 第171-172页 |
