| 摘要 | 第3-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 1 文献综述 | 第13-29页 |
| 1.1 RNA干扰概述 | 第13-19页 |
| 1.1.1 RNAi的研究历史 | 第13-15页 |
| 1.1.2 RNA干扰的分子机制 | 第15-19页 |
| 1.2 siRNA的降解机制 | 第19-20页 |
| 1.3 RNA干扰的非对称现象 | 第20-22页 |
| 1.3.1 链长度非对称性 | 第20页 |
| 1.3.2 单链RNA干扰 | 第20-21页 |
| 1.3.3 链剂量非对称性 | 第21页 |
| 1.3.4 RNA的装载不对称性 | 第21-22页 |
| 1.4 RNA干扰的脱靶效应 | 第22-23页 |
| 1.4.1 碱基非特异性匹配引发的脱靶效应 | 第22页 |
| 1.4.2 碱基过长引发mRNA转录抑制和非特异性降解 | 第22-23页 |
| 1.4.3 sense链RNA引发的RNA干扰效应 | 第23页 |
| 1.5 RNA干扰的应用 | 第23-27页 |
| 1.5.1 RNA干扰与健康 | 第23页 |
| 1.5.2 siRNA的获得方法 | 第23-25页 |
| 1.5.3 siRNA的传递方式 | 第25-27页 |
| 1.6 siRNA研究与第二代高通量测序 | 第27-28页 |
| 1.7 选题内容与研究意义 | 第28-29页 |
| 2 siRNA的非对称结构对RNA干扰的影响研究 | 第29-60页 |
| 2.1 引言 | 第29-32页 |
| 2.2 材料与试剂 | 第32-37页 |
| 2.2.1 仪器 | 第32-33页 |
| 2.2.2 试剂与溶液 | 第33-37页 |
| 2.3 实验方法和步骤 | 第37-45页 |
| 2.3.1 质粒构建 | 第37-40页 |
| 2.3.2 细胞培养和处理 | 第40-41页 |
| 2.3.3 双荧光素酶底物报告实验 | 第41-42页 |
| 2.3.4 Western-Blot蛋白免疫印迹实验 | 第42-45页 |
| 2.4 结果与分析 | 第45-59页 |
| 2.4.1 RNA干扰浓度的探索 | 第45-46页 |
| 2.4.2 非对称RNA干扰活性 | 第46-50页 |
| 2.4.3 asRNA3’端额外增加的碱基可以挽救B类aiRNA干扰活性 | 第50-52页 |
| 2.4.4 asRNA5’端额外增加的碱基或者磷酸化可以挽救A类aiRNA干扰活性 | 第52-55页 |
| 2.4.5 磷酸基团能够挽救部分缩短asRNA的干扰活性 | 第55-57页 |
| 2.4.6 两头缩短的ssRNA在非对称结构中的RNAi活性 | 第57页 |
| 2.4.7 局部互补匹配的siRNA产生的RNA干扰活性 | 第57-59页 |
| 2.5 小结 | 第59-60页 |
| 3 siRNA的非对称结构影响ssRNA与asRNA在细胞内的残留量 | 第60-73页 |
| 3.1 引言 | 第60-61页 |
| 3.2 材料与方法: | 第61-64页 |
| 3.2.1 仪器 | 第61页 |
| 3.2.2 质粒和菌种 | 第61页 |
| 3.2.3 试剂与试剂盒 | 第61-62页 |
| 3.2.4 实验方法 | 第62-64页 |
| 3.3 实验结果与分析 | 第64-71页 |
| 3.3.1 小分子RNA测序质量报告 | 第64-65页 |
| 3.3.2 ssRNA与asRNA的残留量统计 | 第65-67页 |
| 3.3.3 ssRNA与asRNA剂量不对称同样可以引发RNA干扰活性 | 第67-69页 |
| 3.3.4 剂量补足可以挽救A、B两类aiRNA下降的RNAi活性 | 第69-71页 |
| 3.4 小结 | 第71-73页 |
| 4 质粒表达非对称干扰RNA | 第73-84页 |
| 4.1 引言 | 第73-74页 |
| 4.2 材料与方法 | 第74-78页 |
| 4.2.1 材料 | 第74-77页 |
| 4.2.2 实验方法和步骤 | 第77-78页 |
| 4.3 实验结果与分析 | 第78-82页 |
| 4.3.1 短发夹样siRNA表达模式产生的干扰活性与脱靶效应 | 第78-80页 |
| 4.3.2 双载体单链表达模式 | 第80-82页 |
| 4.4 小结 | 第82-84页 |
| 5 全文总结与展望 | 第84-86页 |
| 5.1 本论文总结 | 第84-85页 |
| 5.2 RNA非对称性研究的展望 | 第85-86页 |
| 参考文献 | 第86-96页 |
| 中英文对照表 | 第96-97页 |
| 在校期间发表的论文和获奖 | 第97-98页 |
| 致谢 | 第98-101页 |
