| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 第一章 前言 | 第10-25页 |
| 1.1 RNAi的机制及运用 | 第10-13页 |
| 1.1.1 RNAi的机制 | 第10页 |
| 1.1.2 RNAi的传递策略 | 第10-13页 |
| 1.2 跨界基因沉默技术 | 第13-17页 |
| 1.2.1 “跨界基因沉默”技术概述 | 第13-17页 |
| 1.2.2 “跨界基因沉默”技术优势 | 第17页 |
| 1.3 艾滋病及其治疗药物的开发 | 第17-21页 |
| 1.4 利用长dsRNA制备siRNA及其在RNAi中的运用 | 第21-23页 |
| 1.4.1 利用dsDicer制备siRNA | 第21页 |
| 1.4.2 利用大肠杆菌RNaseⅢ产生siRNA | 第21-23页 |
| 1.4.3 利用E.coliHT115 (DE3)表达长双链RNA | 第23页 |
| 1.5 选题意义及研究方案 | 第23-25页 |
| 第二章 嵌合双链RNA跨界基因干扰同时沉默多个基因 | 第25-51页 |
| 2.1 前言 | 第25-26页 |
| 2.2 实验材料与方法 | 第26-42页 |
| 2.2.1 实验仪器 | 第26-27页 |
| 2.2.2 实验材料与试剂 | 第27-30页 |
| 2.2.3 实验方法 | 第30-42页 |
| 2.3 结果与分析 | 第42-50页 |
| 2.3.1 由跨界基因沉默技术介导的长双链干扰 | 第42-48页 |
| 2.3.2 由跨界基因沉默技术介导的嵌合型长双链干扰 | 第48-50页 |
| 2.4 小结 | 第50-51页 |
| 第三章 跨界基因沉默菌株的构建及其对靶标基因干扰能力的检测 | 第51-70页 |
| 3.1 前言 | 第51-52页 |
| 3.2 实验材料及方法 | 第52-58页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第52页 |
| 3.2.2 实验方法 | 第52-58页 |
| 3.3 结果与分析 | 第58-68页 |
| 3.3.1 同源臂扩增及环形跨界整合质粒的构建 | 第58-59页 |
| 3.3.2 C-dstrip构建跨界基因沉默菌株 | 第59-61页 |
| 3.3.3 同源臂扩增及线型跨界基因沉默整合质粒的构建 | 第61-62页 |
| 3.3.4 L-dstrip构建跨界基因沉默菌株 | 第62-64页 |
| 3.3.5 跨界基因沉默菌株的功能检测 | 第64-68页 |
| 3.4 结论 | 第68-70页 |
| 第四章 利用跨界沉默菌株抑制HIV复制关键基因的表达 | 第70-82页 |
| 4.1 前言 | 第70-71页 |
| 4.2 实验材料和方法 | 第71-75页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第71页 |
| 4.2.2 携带长dsRNA的跨界基因沉默质粒对nef和gag进行抑制 | 第71-74页 |
| 4.2.3 嵌合型dsRNA对nef和gag的抑制作用 | 第74页 |
| 4.2.4 靶标nef,gag的跨界基因沉默菌株对nef,gag表达的抑制作用 | 第74-75页 |
| 4.3 结果与分析 | 第75-80页 |
| 4.3.1 pEGFP-c1-nef, pEGFP-c1-gag的构建 | 第75页 |
| 4.3.2 稳定细胞系的检测与鉴定 | 第75-76页 |
| 4.3.3 针对nef和gag跨界基因沉默质粒的构建 | 第76-79页 |
| 4.3.4 跨界基因沉默整合菌株的干扰能力检测 | 第79-80页 |
| 4.4 小结 | 第80-82页 |
| 第五章 总结与进一步研究设想 | 第82-85页 |
| 5.1 主要研究结果 | 第82-83页 |
| 5.2 进一步研究设想 | 第83-85页 |
| 参考文献 | 第85-91页 |
| 中英文缩写表 | 第91-92页 |
| 论文发表情况 | 第92-93页 |
| 致谢 | 第93-95页 |
