| 目录 | 第1-7页 |
| 中文摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-12页 |
| 缩略语表(Abbreviation) | 第12-14页 |
| 1. 文献综述 | 第14-48页 |
| ·弓形虫与弓形虫病的发现及其危害 | 第14-16页 |
| ·弓形虫与弓形虫病的发现 | 第14页 |
| ·弓形虫病的危害 | 第14-16页 |
| ·弓形虫的传播 | 第16-17页 |
| ·弓形虫的免疫应答 | 第17-18页 |
| ·先天免疫 | 第17页 |
| ·获得性免疫 | 第17-18页 |
| ·弓形虫病的疫苗研究进展 | 第18-36页 |
| ·被动免疫 | 第18页 |
| ·弓形虫灭活疫苗 | 第18页 |
| ·弓形虫弱毒苗 | 第18-20页 |
| ·DNA疫苗 | 第20-26页 |
| ·单位疫苗 | 第26-29页 |
| ·基因工程活载体疫苗 | 第29-31页 |
| ·基因缺失疫苗 | 第31页 |
| ·"Coketail"疫苗 | 第31-36页 |
| ·T细胞疫苗 | 第36页 |
| ·弓形虫病的疫苗发展的机会与挑战 | 第36-44页 |
| ·自杀性DNA疫苗表达载体简介 | 第44-45页 |
| ·重组杆状病毒表达载体简介 | 第45-48页 |
| 2. 研究的目的与意义 | 第48-50页 |
| 3. 材料与方法 | 第50-68页 |
| ·试验材料 | 第50-56页 |
| ·菌株、虫株、细胞及实验动物 | 第50页 |
| ·载体与质粒 | 第50-52页 |
| ·主要药品及试剂 | 第52-53页 |
| ·培养基与抗生素及其配制 | 第53-54页 |
| ·缓冲液 | 第54-56页 |
| ·实验方法 | 第56-68页 |
| ·限制性内切酶酶切反应 | 第56页 |
| ·PCR产物或酶切产物的电泳检测 | 第56-57页 |
| ·PCR产物或酶切产物回收与纯化 | 第57页 |
| ·外源DNA片段与质粒载体的连接反应 | 第57-58页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第58页 |
| ·连接产物的转化 | 第58页 |
| ·质粒的制备与鉴定 | 第58-61页 |
| ·质粒转染(脂质体介导转染法) | 第61页 |
| ·构建重组杆状病毒的操作流程及示意图 | 第61-63页 |
| ·重组穿梭载体(Bacmid)的构建 | 第63页 |
| ·重组穿梭载体(Bacmid)的提取 | 第63页 |
| ·重组杆状病毒获得 | 第63页 |
| ·重组杆状病毒转导PK-15细胞 | 第63页 |
| ·间接免疫荧光试验(IFA)检测目的蛋白的体外表达 | 第63-64页 |
| ·ELISA操作步骤 | 第64页 |
| ·细胞免疫的检测 | 第64-66页 |
| ·动物试验 | 第66-67页 |
| ·统计学方法 | 第67-68页 |
| 4. 结果和分析 | 第68-90页 |
| ·表达弓形虫MIC3基因的自杀性DNA疫苗的构建及免疫原性的研究 | 第68-74页 |
| ·弓形虫MIC3基因的PCR扩增 | 第68页 |
| ·重组质粒的构建和鉴定 | 第68-69页 |
| ·基因序列的测定与分析 | 第69-71页 |
| ·间接免疫荧光检测自杀性DNA疫苗pSCA-MIC3中MIC3基因的表达 | 第71页 |
| ·免疫小鼠的抗体水平检测 | 第71-72页 |
| ·免疫小鼠淋巴细胞增殖检测 | 第72-73页 |
| ·Real-time PCR检测免疫小鼠脾细胞中IFN-γ和IL-4 mRNA表达相对定量分析 | 第73-74页 |
| ·自杀性DNA疫苗pSCA-MIC3对小鼠的免疫保护性试验 | 第74页 |
| ·杆状病毒介导的表达弓形虫MIC3、SAG1基因的重组毒疫苗的构建及免疫原性的研究 | 第74-90页 |
| ·pcDNA-MIC3和pcDNA-SAG1真核表达质粒的构建 | 第74-75页 |
| ·pFast-VSVG-CMV-MIC3和pFast-VSVG-CMV-SAG1转移质粒的构建 | 第75-80页 |
| ·重组穿梭载体的构建 | 第80页 |
| ·重组杆状病毒Ac-V-MIC3、Ac-V-SAG1的获得 | 第80-81页 |
| ·重组病毒Ac-V-MIC3、Ac-V-SAG1转导PK-15细胞 | 第81页 |
| ·间接免疫荧光检测重组病毒Ac-V-MIC3、Ac-V-SAG1在PK-15细胞中的表达 | 第81-82页 |
| ·重组病毒Ac-V-MIC3、Ac-V-SAG1的纯化与毒价测定 | 第82页 |
| ·免疫小鼠的抗体水平检测 | 第82-84页 |
| ·重组病毒Ac-V-MIC3、Ac-V-SAG1免疫小鼠淋巴细胞增殖检测 | 第84-86页 |
| ·ELISA检测免疫小鼠脾细胞中IFN-γ、IL-4和IL-10 m表达水平分析 | 第86-88页 |
| ·重组杆状病毒Ac-V-MIC3、Ac-V-SAG1对小鼠的免疫保护性试验 | 第88-90页 |
| 5. 讨论与结论 | 第90-94页 |
| ·讨论 | 第90-93页 |
| ·弓形虫自杀性DNA疫苗pSCA-MIC3的设计与保护力评价 | 第90-91页 |
| ·弓形虫重组杆状病毒实验室构建中的困难 | 第91页 |
| ·弓形虫重组杆状病毒疫苗诱导的免疫应答 | 第91-92页 |
| ·弓形虫重组杆状病毒疫苗联合免疫与单独免疫的保护力比较 | 第92页 |
| ·佐剂、攻毒虫株剂量与实验动物 | 第92-93页 |
| ·结论 | 第93-94页 |
| 参考文献 | 第94-106页 |
| 致谢 | 第106-107页 |
| 附录 | 第107-108页 |
