| 摘要 | 第9-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 引言 | 第14-16页 |
| 上篇 文献综述 | 第16-51页 |
| 第一章 小麦赤霉病的研究概况 | 第17-27页 |
| 1. 小麦赤霉病及其致病菌研究概况 | 第17-23页 |
| 1.1 小麦赤霉病研究概述 | 第17-18页 |
| 1.2 小麦赤霉病病原生物学特征 | 第18-19页 |
| 1.3 禾谷镰孢菌的生理生化特征及其寄主范围 | 第19页 |
| 1.4 禾谷镰孢菌的侵染病害循环 | 第19-20页 |
| 1.5 小麦赤霉病的病害防治 | 第20-21页 |
| 1.6 禾谷镰孢菌侵染小麦的致病机制研究进展 | 第21-23页 |
| 参考文献 | 第23-27页 |
| 第二章 囊泡运输相关基因在禾谷镰孢菌中研究概况 | 第27-51页 |
| 1 囊泡的形成 | 第29-31页 |
| 1.1 网格蛋白囊泡 | 第30页 |
| 1.2 COPⅠ小囊泡 | 第30页 |
| 1.3 COPⅡ小囊泡 | 第30-31页 |
| 2 囊泡在细胞内的定向运输机制 | 第31页 |
| 3 内涵体(Endosomes)在囊泡运输过程中的作用 | 第31-33页 |
| 4 Rab蛋白家族在囊泡运输过程中的研究 | 第33-35页 |
| 5 CORVET复合物和HOPS复合物在囊泡运输过程中的研究 | 第35-37页 |
| 5.1 CORVET复合物在囊泡运输过程中的研究 | 第36-37页 |
| 5.2 HOPS复合物在囊泡运输过程中的研究 | 第37页 |
| 6 其它蛋白家族在囊泡运输过程中的研究 | 第37-40页 |
| 6.1 SNARE蛋白在囊泡运输过程中的研究 | 第37-39页 |
| 6.2 SM蛋白在囊泡运输过程中的研究 | 第39-40页 |
| 7 囊泡运输基因与细胞自噬之间相互作用的研究 | 第40-42页 |
| 7.1 细胞自噬及其分类 | 第40页 |
| 7.2 囊泡运输基因调控细胞自噬的分子机制研究 | 第40-42页 |
| 8 本研究的目的和意义 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-51页 |
| 下篇 研究内容 | 第51-165页 |
| 第一章 FgVam7结合蛋白的鉴定 | 第53-69页 |
| 1 材料和方法 | 第55-58页 |
| 1.1 供试菌株、载体和保存条件 | 第55页 |
| 1.2 FgVAM7融合表达3 x Flag载体的构建 | 第55页 |
| 1.3 禾谷镰孢菌菌丝阶段蛋白质的提取 | 第55-56页 |
| 1.4 FgVam7-3 X Flag融合蛋白免疫共沉淀 | 第56页 |
| 1.5 蛋白免疫印迹(Western blot) | 第56-57页 |
| 1.6 蛋白质谱分析 | 第57页 |
| 1.7 蛋白质谱结果分析 | 第57页 |
| 1.8 酵母双杂交(Y2H)验证蛋白质谱筛选的结果 | 第57-58页 |
| 2 结果分析 | 第58-64页 |
| 2.1 FgVAM7-3 X Flag转化子筛选的结果 | 第58页 |
| 2.2 亲和纯化FgVam7-3 x Flag蛋白 | 第58-59页 |
| 2.3 蛋白质谱鉴定结果分析 | 第59-63页 |
| 2.4 酵母双杂交一对一验证FgVam7和其候选结合蛋白的相互作用关系 | 第63-64页 |
| 3 讨论 | 第64-67页 |
| 参考文献 | 第67-69页 |
| 第二章 FgVps39通过参与囊泡运输过程调控禾谷镰孢菌生长发育和致病性 | 第69-103页 |
| 1 材料和方法 | 第71-79页 |
| 1.1 供试菌株和保存条件 | 第71页 |
| 1.2 禾谷镰孢菌菌丝体DNA、RNA的抽提及cDNA的合成 | 第71页 |
| 1.3 FgVPS39基因序列的克隆及功能域分析 | 第71-72页 |
| 1.4 禾谷镰孢菌FgVPS39的敲除,互补及转化子验证 | 第72-74页 |
| 1.5 酵母双杂交(Y2H)和GST pull-down载体构建 | 第74页 |
| 1.6 蛋白质的提取和Western blot | 第74-75页 |
| 1.7 FgVPS39敲除突变体表型分析 | 第75页 |
| 1.8 FgVPS39敲除突变体对氧化胁迫和盐胁迫应答分析 | 第75-76页 |
| 1.9 FgVPS39敲除突变体致病性测定 | 第76页 |
| 1.10 FgVps39亚细胞定位观察 | 第76-77页 |
| 1.11 FgVPS39敲除突变体毒素的抽提 | 第77-78页 |
| 1.12 FgVPS39敲除突变体参与黄色镰孢菌色素形成分析 | 第78页 |
| 1.13 FgVPS39敲除突变体胞吞作用分析 | 第78页 |
| 1.14 FgVPS39敲除突变体细胞自噬分析 | 第78-79页 |
| 1.15 实时荧光定量PCR | 第79页 |
| 2 结果分析 | 第79-96页 |
| 2.1 FgVps39蛋白和FgVam7、FgSso1相互作用 | 第79-81页 |
| 2.2 FgVPS39亚细胞定位在早/晚期内涵体和液泡 | 第81-84页 |
| 2.3 FgVPS39敲除突变体及互补菌株的获得 | 第84-85页 |
| 2.4 FgVPS39参与调控禾谷镰孢菌的营养生长 | 第85-86页 |
| 2.5 FgVPS39敲除突变体产孢能力下降和孢子形态异常 | 第86-87页 |
| 2.6 FgVPS39敲除突变体有性生殖能力丧失 | 第87-88页 |
| 2.7 FgVPS39对禾谷镰孢菌的全毒力是必需的 | 第88-89页 |
| 2.8 FgVPS39敲除突变体侵染能力丧失和DON毒素的含量下降 | 第89-90页 |
| 2.9 FgVPS39敲除突变体胞吞作用延迟 | 第90-91页 |
| 2.10 FgVPS39能够竞争性结合激活态的Rab7 | 第91-92页 |
| 2.11 FgVPS39对外界胁迫的分析 | 第92-93页 |
| 2.12 FgVPS39和FgSSO1参与到黄色镰孢菌色素的形成过程 | 第93-94页 |
| 2.13 FgVps39-FgVam7-FgSso1复合物参与调控细胞自噬的过程 | 第94-96页 |
| 3 讨论 | 第96-99页 |
| 参考文献 | 第99-103页 |
| 第三章 FgVps41通过调控膜融合和蛋白质的转运影响禾谷镰孢菌生长发育及致病性 | 第103-139页 |
| 1 材料和方法 | 第105-111页 |
| 1.1 菌株和培养条件 | 第105页 |
| 1.2 禾谷镰孢菌菌丝体DNA、RNA的抽提及cDNA的合成 | 第105页 |
| 1.3 FgVPS41和FgYCK3基因序列的克隆及功能域分析 | 第105页 |
| 1.4 禾谷镰孢菌FgVPS41和FgYCK3的敲除,互补及转化子验证 | 第105-107页 |
| 1.5 酵母双杂交(Y2H)和BiFC载体构建 | 第107-108页 |
| 1.6 FgVps41功能域缺失载体的构建及转化子的获得 | 第108页 |
| 1.7 禾谷镰孢菌菌丝体蛋白质的提取和Western blot | 第108页 |
| 1.8 禾谷镰孢菌菌丝体FM4-64、CMAC以及Nile Red染色 | 第108-109页 |
| 1.9 FgVPS41和FgYCK3敲除突变体生物学表型分析 | 第109页 |
| 1.10 FgVPS41和FgYCK3敲除突变体致病能力分析 | 第109-110页 |
| 1.11 FgVps41磷酸化分析 | 第110页 |
| 1.12 FgVPS41和FgYCK3敲除突变体DON毒素的分析 | 第110页 |
| 1.13 FgVps41和FgYck3亚细胞定位观察 | 第110页 |
| 1.14 FgVPS41敲除突变体对自然界胁迫因子的应答 | 第110-111页 |
| 1.15 实时荧光定量PCR | 第111页 |
| 2 结果分析 | 第111-131页 |
| 2.1 FgVam7和FgVps41相互作用 | 第111-112页 |
| 2.2 FgVps41的亚细胞定位在内涵体和液泡膜 | 第112-113页 |
| 2.3 FgVPS41敲除突变体及互补菌株的获得 | 第113-114页 |
| 2.4 FgVPS41参与调控禾谷镰孢菌的营养生长和菌丝分支 | 第114-115页 |
| 2.5 FgVPS41参与调控禾谷镰孢菌有性生殖和无性繁殖的过程 | 第115-117页 |
| 2.6 FgVPS41参与调控禾谷镰孢菌的致病性 | 第117-118页 |
| 2.7 FgVPS41敲除突变体DON毒素的测定 | 第118-119页 |
| 2.8 FgVPS41敲除突变体穿透能力下降 | 第119-120页 |
| 2.9 FgVps41对外界渗透压胁迫和环境因子胁迫敏感性分析 | 第120-122页 |
| 2.10 FgVps41中WD40功能域、CLH功能域和Zinc finger功能域分析 | 第122-124页 |
| 2.11 FgVPS41参与调控禾谷镰孢菌内涵体向液泡运输的过程 | 第124-126页 |
| 2.12 FgVps41作为支架蛋白与FgRab7和FgYck3相互作用 | 第126-128页 |
| 2.13 FgRab7和FgYck3参与调控FgVps41的亚细胞定位,并且FgYck3能够磷酸化FgVps41 | 第128-130页 |
| 2.14 FgYCK3参与调控禾谷镰孢菌极性生长、致病性、无性繁殖和有性生殖 | 第130-131页 |
| 3 讨论 | 第131-134页 |
| 参考文献 | 第134-139页 |
| 第四章 T-SNARE蛋白FgPep12在禾谷镰孢菌中的生物学功能分析 | 第139-165页 |
| 1 材料和方法 | 第140-145页 |
| 1.1 菌株和培养条件 | 第140-141页 |
| 1.2 禾谷镰孢菌菌丝体DNA、RNA的抽提及cDNA的合成 | 第141页 |
| 1.3 FgPEP12基因序列的克隆及功能域分析 | 第141页 |
| 1.4 禾谷镰孢菌FgPEP12的敲除,互补及转化子验证 | 第141-143页 |
| 1.5 酵母双杂交(Y2H)载体构建 | 第143页 |
| 1.6 FgPep12功能域缺失载体的构建及转化子的获得 | 第143页 |
| 1.7 禾谷镰孢菌菌丝体蛋白质的提取 | 第143-144页 |
| 1.8 禾谷镰孢菌菌丝体和孢子FM4-64和CMAC染色 | 第144页 |
| 1.9 FgPEP12敲除突变体生物学表型分析 | 第144页 |
| 1.10 FgPEP12敲除突变体致病性分析 | 第144页 |
| 1.11 FgPEP12敲除突变体孢子萌发分析 | 第144-145页 |
| 1.12 FgPEP12敲除突变体DON毒素的测定 | 第145页 |
| 1.13 FgPep12和功能域缺失菌株的亚细胞定位观察 | 第145页 |
| 1.14 FgPEP12敲除突变体对自然界胁迫因子的应答 | 第145页 |
| 1.15 实时荧光定量PCR | 第145页 |
| 2 结果分析 | 第145-160页 |
| 2.1 FgVam7和FgPep12相互作用 | 第145-146页 |
| 2.2 FgPEP12敲除突变体及互补菌株的获得 | 第146-147页 |
| 2.3 FgPEP12敲除突变体生长速率和菌落形态观察 | 第147-148页 |
| 2.4 FgPEP12参与调控有性生殖和无性繁殖过程 | 第148-150页 |
| 2.5 FgPEP12参与调控禾谷镰孢菌的致病性 | 第150-151页 |
| 2.6 FgPEP12敲除突变体DON毒素的测定 | 第151-152页 |
| 2.7 FgPEP12参与调控分生孢子早期萌发过程 | 第152-153页 |
| 2.8 FgPEP12对外界渗透压胁迫和氧化胁迫因子敏感性分析 | 第153-155页 |
| 2.9 FgPep12参与调控禾谷镰孢菌黄色镰孢菌素形成过程 | 第155页 |
| 2.10 FgPep12亚细胞定位在早/晚期内涵体和液泡 | 第155-157页 |
| 2.11 FgPep12功能域缺失菌株的亚细胞定位及生物学功能分析 | 第157-159页 |
| 2.13 FgPEP12缺失突变体的胞吞不受影响 | 第159-160页 |
| 3 讨论 | 第160-162页 |
| 参考文献 | 第162-165页 |
| 全文总结和创新点 | 第165-167页 |
| 附表 | 第167-185页 |
| 附表1 | 第167-177页 |
| 附表2 | 第177-185页 |
| 攻读博士学位期间发表的研究论文 | 第185-187页 |
| 致谢 | 第187-188页 |
