| 中文摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 缩略语表(序表) | 第12-13页 |
| 1 文献综述 | 第13-31页 |
| 1.1 捻转血矛线虫概述 | 第13-20页 |
| 1.1.1 捻转血矛线虫简介 | 第13页 |
| 1.1.2 捻转血矛线虫各阶段虫体的介绍 | 第13-16页 |
| 1.1.3 捻转血矛线虫的发育及各阶段基因表达的特点 | 第16-17页 |
| 1.1.4 捻转血矛线虫病的致病原因及临床症状 | 第17-18页 |
| 1.1.5 捻转血矛线虫的流行病学研究 | 第18页 |
| 1.1.6 现阶段捻转血矛线虫病的防治 | 第18-20页 |
| 1.2 蛋白酶体的研究 | 第20-28页 |
| 1.2.1 蛋白酶体的简介 | 第20页 |
| 1.2.2 真核生物中蛋白酶体的几种存在形式 | 第20-21页 |
| 1.2.3 细菌、古菌和真核生物中蛋白酶体CP组装的差异 | 第21-23页 |
| 1.2.4 真核生物蛋白酶体β5亚基活性位点 | 第23-25页 |
| 1.2.5 蛋白酶体抑制剂分类及β5亚基特异性抑制剂 | 第25-27页 |
| 1.2.6 蛋白酶调节NF-κB信号通路 | 第27-28页 |
| 1.2.7 蛋白酶体在寄生虫中的研究 | 第28页 |
| 1.3 基因或蛋白定位技术的比较分析 | 第28-31页 |
| 2 研究目的及意义 | 第31-32页 |
| 3 材料与方法 | 第32-59页 |
| 3.1 实验材料 | 第32-33页 |
| 3.1.1 实验动物及实验用菌株、载体 | 第32页 |
| 3.1.2 主要仪器及设备 | 第32页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第32-33页 |
| 3.2 试剂溶液的配制 | 第33-36页 |
| 3.2.1 抗生素和细菌培养基溶液的配制 | 第33页 |
| 3.2.2 琼脂糖凝胶电泳缓冲液的配制 | 第33页 |
| 3.2.3 SDS-聚丙烯凝胶电泳主要溶液的配制 | 第33-34页 |
| 3.2.4 表达纯化包涵体蛋白所需溶液 | 第34页 |
| 3.2.5 Western-blot缓冲液 | 第34页 |
| 3.2.6 ELISA实验的主要溶液 | 第34-35页 |
| 3.2.7 胰凝乳蛋白酶活性实验相关溶液 | 第35页 |
| 3.2.8 捻转血矛线虫的收集溶液及虫体培养液 | 第35-36页 |
| 3.2.9 秀丽隐杆线虫的固体培养基 | 第36页 |
| 3.3 实验方法 | 第36-59页 |
| 3.3.1 实验动物感染模型的建立 | 第36页 |
| 3.3.2 捻转血矛线虫不同发育阶段虫体的收集和纯化 | 第36-37页 |
| 3.3.3 捻转血矛线虫gDNA的提取和ITS-2鉴定 | 第37-39页 |
| 3.3.4 捻转血矛线虫RNA的提取及cDNA的合成 | 第39-41页 |
| 3.3.5 捻转血矛线虫Hc-pbs-5基因的克隆 | 第41-44页 |
| 3.3.6 原核表达质粒的构建 | 第44-46页 |
| 3.3.7 捻转血矛线虫Hc-PBS-5的原核表达 | 第46-49页 |
| 3.3.8 多克隆抗体的制备及Western-blot检测 | 第49-50页 |
| 3.3.9 免疫组化 | 第50-51页 |
| 3.3.10 抑制剂实验 | 第51-52页 |
| 3.3.11 RNA干扰实验 | 第52-55页 |
| 3.3.12 荧光定量实验 | 第55-56页 |
| 3.3.13 RNA干扰后L3期幼虫的发育情况的变化 | 第56-57页 |
| 3.3.14 生物信息学分析 | 第57-59页 |
| 4 结果与分析 | 第59-85页 |
| 4.1 捻转血矛线虫的虫卵和L3期幼虫的收集 | 第59页 |
| 4.2 捻转血矛线虫Hc-PBS-5生物信息学分析 | 第59-64页 |
| 4.2.1 Hc-PBS-5的氨基酸序列的分析及空间结构的预测 | 第59-62页 |
| 4.2.2 Hc-PBS-5的进化分析 | 第62-63页 |
| 4.2.3 捻转血矛线虫Hc-PBS-5理化特性的分析 | 第63-64页 |
| 4.3 Hc-PBS-5重组蛋白的原核表达 | 第64-69页 |
| 4.3.1 构建pE-SUMO-Hc-pbs-5同源重组质粒 | 第64-66页 |
| 4.3.2 Hc-PBS-5蛋白的最佳诱导表达条件的获得 | 第66-68页 |
| 4.3.3 Hc-PBS-5蛋白的纯化和浓缩 | 第68-69页 |
| 4.4 多克隆抗体的纯化及分析 | 第69-70页 |
| 4.4.1 多克隆抗血清效价的检测 | 第69页 |
| 4.4.2 多克隆抗血清的纯化 | 第69-70页 |
| 4.4.3 Western-blot方法检测多克隆抗体的特异性 | 第70页 |
| 4.5 捻转血矛线虫的固定及形态学的观察 | 第70-73页 |
| 4.6 H.contortus中Hc-PBS-5的定位情况 | 第73-75页 |
| 4.7 蛋白酶体外抑制实验 | 第75-78页 |
| 4.7.1 胰凝乳蛋白酶活性抑制实验 | 第75页 |
| 4.7.2 抑制胰凝乳蛋白酶活性阻滞虫卵的孵化 | 第75-76页 |
| 4.7.3 胰凝乳蛋白酶活性降低影响L1向L3的发育 | 第76-78页 |
| 4.7.4 胰凝乳蛋白酶活性降低影响L3向L4的发育 | 第78页 |
| 4.8 Hc-pbs-5基因的RNA干扰 | 第78-85页 |
| 4.8.1 体外转录合成dsRNA | 第79-82页 |
| 4.8.2 Hc-pbs-5基因的体外干扰实验及干扰效率的检测 | 第82-83页 |
| 4.8.3 Hc-pbs-5表达下调导致L3期幼虫发育率降低 | 第83-85页 |
| 5 讨论 | 第85-93页 |
| 5.1 Hc-pbs-5基因序列的保守性和特异性 | 第85-86页 |
| 5.2 Hc-PBS-5具有的理化特性 | 第86-87页 |
| 5.3 浅谈浸泡法在RNAi实验中的应用 | 第87-88页 |
| 5.4 Hc-pbs-5参与捻转血矛线虫的生长和发育 | 第88-89页 |
| 5.5 蛋白酶体活性调节机制 | 第89-91页 |
| 5.6 蛋白酶体调节机制影响捻转血矛线虫的寿命 | 第91-93页 |
| 6 结论 | 第93-94页 |
| 参考文献 | 第94-113页 |
| 附录 | 第113-115页 |
| 致谢 | 第115-116页 |
