| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8页 |
| 中英文缩略词表(ABBREVIATIONS) | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第10-16页 |
| 1.1 家禽贮精腺研究进展 | 第10-11页 |
| 1.1.1 家禽贮精腺组织结构 | 第10-11页 |
| 1.1.2 家禽贮精腺分泌物以及其作用 | 第11页 |
| 1.2 CA4基因研究进展 | 第11-14页 |
| 1.2.1 CA4基因和蛋白结构 | 第12-13页 |
| 1.2.2 CA4基因的表达与定位 | 第13页 |
| 1.2.3 CA4与精子活力 | 第13-14页 |
| 1.2.4 CA4与家禽贮精能力有关 | 第14页 |
| 1.2.5 CA4与单羧酸转运体的协同作用 | 第14页 |
| 1.3 MCT4基因研究进展 | 第14-15页 |
| 1.3.1 MCT4基因和蛋白结构 | 第14-15页 |
| 1.3.2 MCT4基因的表达与功能 | 第15页 |
| 1.4 实验的目的和意义 | 第15-16页 |
| 2 实验材料 | 第16-19页 |
| 2.1 实验细胞与DNA | 第16页 |
| 2.2 抗体 | 第16页 |
| 2.3 实验仪器 | 第16-17页 |
| 2.4 实验试剂与耗材 | 第17-18页 |
| 2.5 实验试剂的配制 | 第18-19页 |
| 3 实验方法 | 第19-30页 |
| 3.1 鸡CA4基因的序列分析 | 第19-20页 |
| 3.1.1 鸡CA4基因的PCR扩增 | 第19-20页 |
| 3.1.2 CA4基因PCR扩增产物的电泳检测 | 第20页 |
| 3.2 设计并合成siRNA | 第20页 |
| 3.3 DF-1细胞的培养 | 第20-21页 |
| 3.3.1 细胞培养 | 第20页 |
| 3.3.2 细胞传代 | 第20-21页 |
| 3.3.3 细胞冻存与复苏 | 第21页 |
| 3.4 鸡DF-1细胞CA4基因mRNA表达的检测 | 第21-24页 |
| 3.4.1 DF-1细胞RNA提取 | 第21-22页 |
| 3.4.2 cDNA链反转录合成 | 第22-23页 |
| 3.4.3 荧光引物设计 | 第23页 |
| 3.4.4 qRT-PCR | 第23-24页 |
| 3.5 DF-1细胞CA4蛋白表达的检测 | 第24-27页 |
| 3.5.1 CA4的细胞免疫化学 | 第24页 |
| 3.5.2 CA4细胞免疫荧光 | 第24-25页 |
| 3.5.3 DF-1细胞内CA4的表达 | 第25-27页 |
| 3.6 DF-1细胞中MCT4基因mRNA表达的检测 | 第27-28页 |
| 3.6.1 DF-1细胞RNA提取 | 第27页 |
| 3.6.2 cDNA链反转录合成 | 第27页 |
| 3.6.3 荧光引物设计 | 第27页 |
| 3.6.4 qRT-PCR | 第27-28页 |
| 3.7 DF-1细胞上MCT4蛋白表达的检测 | 第28页 |
| 3.8 siRNA的转染 | 第28-29页 |
| 3.9 培养液pH值检测 | 第29页 |
| 3.10 左旋乳酸含量检测 | 第29页 |
| 3.11 数据分析 | 第29-30页 |
| 4 实验结果 | 第30-40页 |
| 4.1 鸡CA4基因序列分析 | 第30-33页 |
| 4.1.1 CA4基因PCR扩增产物的电泳检测 | 第30-32页 |
| 4.1.2 CA4基因测序结果 | 第32-33页 |
| 4.2 CA4基因在DF-1细胞中的表达 | 第33-35页 |
| 4.2.1 DF-1细胞CA4蛋白的表达 | 第33-34页 |
| 4.2.2 DF-1细胞CA4基因mRNA的表达 | 第34-35页 |
| 4.3 RNAi干扰DF-1细胞对CA4表达的影响 | 第35-37页 |
| 4.3.1 RNAi对DF-1细胞CA4mRNA水平的影响 | 第35页 |
| 4.3.2 RNAi对DF-1细胞CA4蛋白水平的影响 | 第35-37页 |
| 4.3.3 RNAi对DF-1细胞培养液CA4蛋白水平的影响 | 第37页 |
| 4.4 MCT4在DF-1细胞上的表达 | 第37-39页 |
| 4.4.1 DF-1细胞MCT4蛋白的表达 | 第37-38页 |
| 4.4.2 DF-1细胞MCT4基因mRNA的表达 | 第38页 |
| 4.4.3 CA4基因干扰对DF-1细胞MCT4基因表达的影响 | 第38-39页 |
| 4.4.4 CA4基因干扰对DF-1细胞MCT4蛋白水平的影响 | 第39页 |
| 4.5 CA4基因干扰对DF-1细胞培养液pH值的影响 | 第39页 |
| 4.6 CA4基因干扰对DF-1细胞培养液左旋乳酸含量的影响 | 第39-40页 |
| 5 讨论 | 第40-43页 |
| 5.1 鸡CA4基因序列分析 | 第40页 |
| 5.2 CA4在DF-1细胞上的表达 | 第40-41页 |
| 5.3 CA4基因干扰与DF-1细胞培养液的pH值 | 第41页 |
| 5.4 MCT4基因在DF-1细胞上表达 | 第41-42页 |
| 5.5 鸡CA4基因影响DF-1细胞培养液中左旋乳酸的含量 | 第42页 |
| 5.6 鸡CA4可能有利于禽类贮精腺的精子贮存 | 第42-43页 |
| 6 全文结论 | 第43页 |
| 7 进一步研究的建议 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-49页 |
| 致谢 | 第49页 |
