| 致谢 | 第4-9页 |
| 摘要 | 第9-11页 |
| 1 绪论 | 第11-23页 |
| 1.1 启动子的概念 | 第11页 |
| 1.2 启动子的结构 | 第11-13页 |
| 1.2.1 真核生物的核心启动子区 | 第11-13页 |
| 1.3 植物启动子分类 | 第13-19页 |
| 1.3.1 组成型启动子 | 第13-14页 |
| 1.3.2 诱导型启动子 | 第14-16页 |
| 1.3.3 组织器官特异型启动子 | 第16-19页 |
| 1.4 植物基因启动子的克隆方法 | 第19-21页 |
| 1.4.1 常规PCR技术克隆启动子 | 第19页 |
| 1.4.2 基因文库筛选法 | 第19页 |
| 1.4.3 探针载体筛选法 | 第19-20页 |
| 1.4.4 反向PCR | 第20页 |
| 1.4.5 TAl L-PCR | 第20-21页 |
| 1.5 内参基因筛选 | 第21页 |
| 1.6 目的和意义 | 第21-23页 |
| 2 Cs FBXL启动子的分离 | 第23-32页 |
| 2.1 试验材料和方法 | 第23-27页 |
| 2.1.1 试验材料 | 第23页 |
| 2.1.1.1 植物材料 | 第23页 |
| 2.1.1.2 试验使用试剂 | 第23页 |
| 2.1.2 试验方法 | 第23-24页 |
| 2.1.2.1 主要仪器 | 第23页 |
| 2.1.2.2 总DNA的提取及浓度测定 | 第23-24页 |
| 2.1.3 Cs FBXL基因启动子片段扩增 | 第24页 |
| 2.1.3.1 PCR引物设计 | 第24页 |
| 2.1.3.2 PCR反应体系 | 第24页 |
| 2.1.4 扩增产物的检测及回收纯化 | 第24-25页 |
| 2.1.5 PGEM-T载体连接 | 第25页 |
| 2.1.6 大肠杆菌感受态准话及阳性克隆鉴定 | 第25-26页 |
| 2.1.6.1 连接产物转化大肠杆菌 | 第25-26页 |
| 2.1.6.2 阳性克隆的验证 | 第26页 |
| 2.1.7 质粒提取 | 第26页 |
| 2.1.8 启动子序列信息学分析 | 第26-27页 |
| 2.2 结果与分析 | 第27-31页 |
| 2.2.1 基因组DNA提取 | 第27页 |
| 2.2.2 启动子片段扩增 | 第27-28页 |
| 2.2.3 启动子全长序列生物信息学分析 | 第28-31页 |
| 2.3 讨论 | 第31-32页 |
| 3 表达载体构建 | 第32-38页 |
| 3.1 试验材料与仪器 | 第32页 |
| 3.2 菌株及载体 | 第32页 |
| 3.3 试验方法 | 第32-35页 |
| 3.3.1 缺失片段克隆引物设计 | 第32-33页 |
| 3.3.2 缺失片段反应体系 | 第33页 |
| 3.3.3 含有目的片段表达载体的构建 | 第33-34页 |
| 3.3.4 各缺失表达载体检测 | 第34-35页 |
| 3.3.5 连接产物转化农杆菌及阳性克隆鉴定 | 第35页 |
| 3.3.5.1 农杆菌感受态转化 | 第35页 |
| 3.3.5.2 农杆菌阳性克隆鉴定 | 第35页 |
| 3.4 结果与分析 | 第35-37页 |
| 3.4.1 缺失目的片段获得 | 第35-36页 |
| 3.4.2 含有目的片段表达载体构建 | 第36-37页 |
| 3.4.3 各缺失表达载体转化农杆菌 | 第37页 |
| 3.5 讨论 | 第37-38页 |
| 4 GUS报告基因瞬时表达体系初步分析启动子功能 | 第38-47页 |
| 4.1 试验材料与仪器 | 第38页 |
| 4.2 试验方法 | 第38-39页 |
| 4.2.1 瞬时表达试验 | 第38-39页 |
| 4.2.2 烟草逆境处理 | 第39页 |
| 4.2.2.1 非生物激素处理 | 第39页 |
| 4.2.2.2 GUS化学组织分析 | 第39页 |
| 4.3 结果与分析 | 第39-45页 |
| 4.3.1 全长启动子表达载体对几种诱导处理应答的分析 | 第39-40页 |
| 4.3.2 缺失启动子表达载体对诱导处理应答的GUS组织化学分析 | 第40-45页 |
| 4.4 讨论 | 第45-47页 |
| 5 黄瓜生长发育实时荧光RT-PCR分析中内标基因的选择 | 第47-59页 |
| 5.1 实验材料与方法 | 第47页 |
| 5.1.1 实验材料 | 第47页 |
| 5.1.1.1 植物材料 | 第47页 |
| 5.1.1.2 实验试剂 | 第47页 |
| 5.2 实验方法 | 第47-51页 |
| 5.2.1 实验仪器 | 第47页 |
| 5.2.2 试验样品采集 | 第47页 |
| 5.2.3 RNA的提取 | 第47-48页 |
| 5.2.4 c DNA反转录 | 第48页 |
| 5.2.5 黄瓜基因片段扩增 | 第48-50页 |
| 5.2.5.1 引物设计及检测 | 第48-50页 |
| 5.2.5.2 PCR反应体系 | 第50页 |
| 5.2.6 荧光定量PCR标准曲线浓度梯度的配置 | 第50页 |
| 5.2.7 荧光定量PCR反应体系 | 第50-51页 |
| 5.2.8 数据处理 | 第51页 |
| 5.3 结果与分析 | 第51-57页 |
| 5.3.1 q RT-PCR扩增溶解曲线分析 | 第51页 |
| 5.3.2 候选基因表达的标准曲线 | 第51-52页 |
| 5.3.3 候选内参基因引物表达模式 | 第52-53页 |
| 5.3.4 内参基因数据分析结果 | 第53-57页 |
| 5.3.4.1 ge Norm-M分析 | 第53-55页 |
| 5.3.4.2 Norm Finder分析 | 第55-56页 |
| 5.3.4.3 Stability Index | 第56-57页 |
| 5.3.4.5 三种算法综合分析 | 第57页 |
| 5.4 讨论 | 第57-59页 |
| 参考文献 | 第59-68页 |
| Abstract | 第68-69页 |
| 附录 1 | 第70-71页 |
| 附录 2 | 第71-73页 |
| 附录 3 | 第73-74页 |
