| 摘要 | 第6-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 英文缩略表 | 第14-15页 |
| 第一章 引言 | 第15-25页 |
| 1.1 转基因作物发展现状 | 第15-16页 |
| 1.1.1 全球转基因作物发展现状 | 第15页 |
| 1.1.2 我国转基因棉花发展现状 | 第15-16页 |
| 1.2 转基因生物监管及标识制度 | 第16-17页 |
| 1.3 转基因作物检测技术发展 | 第17-20页 |
| 1.3.1 转基因作物外源核酸的PCR检测技术 | 第17-19页 |
| 1.3.1.1 转基因外源核酸PCR检测技术的发展 | 第17-18页 |
| 1.3.1.2 常用的转基因PCR检测技术 | 第18-19页 |
| 1.3.2 转基因作物外源蛋白检测技术及其他检测技术 | 第19-20页 |
| 1.4 转基因整合特点 | 第20-21页 |
| 1.5 转基因植物分子特征 | 第21页 |
| 1.6 转基因作物中杀虫蛋白的表达及其影响因素 | 第21-23页 |
| 1.6.1 转基因棉花杀虫基因表达的研究 | 第21-22页 |
| 1.6.2 其他转基因作物中抗虫基因的表达研究 | 第22页 |
| 1.6.3 影响转基因作物外源蛋白表达的因素 | 第22-23页 |
| 1.7 研究背景、内容及意义 | 第23-25页 |
| 1.7.1 研究背景 | 第23-24页 |
| 1.7.2 研究内容 | 第24页 |
| 1.7.3 研究意义 | 第24-25页 |
| 第二章 MON531~(R7569)插入结构验证及检测方法的建立 | 第25-36页 |
| 2.1 实验试剂及仪器 | 第25-26页 |
| 2.2 样品制备 | 第26-27页 |
| 2.2.1 材料来源 | 第26页 |
| 2.2.2 基因组DNA提取 | 第26-27页 |
| 2.3 引物设计 | 第27-29页 |
| 2.3.1 结构验证引物设计 | 第27页 |
| 2.3.2 外源整合结构验证引物设计 | 第27-28页 |
| 2.3.3 定量检测方法的引物设计 | 第28-29页 |
| 2.4 PCR扩增 | 第29-30页 |
| 2.4.1 MON531~(R7569)的旁侧序列及cry1Ac基因的扩增 | 第29页 |
| 2.4.2 MON531~(R7569)的外源插入结构的扩增 | 第29页 |
| 2.4.3 定量PCR | 第29-30页 |
| 2.4.3.1 定量标准曲线的建立 | 第29页 |
| 2.4.3.2 定量PCR扩增 | 第29页 |
| 2.4.3.3 MON531~(R7569)市场样品的定量检测 | 第29-30页 |
| 2.5 结果与分析 | 第30-34页 |
| 2.5.1 MON531~(R7569)中旁侧序列和cry1Ac基因验证结果 | 第30-31页 |
| 2.5.2 MON531~(R7569)外源插入结构的验证 | 第31-32页 |
| 2.5.3 定量检测方法的建立及应用 | 第32-34页 |
| 2.5.3.1 定量PCR方法的建立 | 第32-33页 |
| 2.5.3.2 市场样品的定量检测 | 第33-34页 |
| 2.6 讨论与分析 | 第34-36页 |
| 第三章 MON531~(R7569)中cry1Ac基因的转录分析 | 第36-47页 |
| 3.1 主要试剂及仪器 | 第36页 |
| 3.2 样品制备及RNA提取 | 第36-37页 |
| 3.2.1 材料来源 | 第36页 |
| 3.2.2 总RNA提取 | 第36-37页 |
| 3.3 RACE分析 | 第37-40页 |
| 3.3.1 RACE引物设计 | 第37-38页 |
| 3.3.2 RACEReadycDNA的合成 | 第38页 |
| 3.3.3 巢式PCR扩增 | 第38页 |
| 3.3.4 PCR产物克隆测序 | 第38-40页 |
| 3.3.4.1 产物回收 | 第38-39页 |
| 3.3.4.2 连接载体并转化感受态细胞 | 第39页 |
| 3.3.4.3 配置LB液体和固态平板培养基 | 第39页 |
| 3.3.4.4 涂板及扩繁 | 第39页 |
| 3.3.4.5 菌液PCR鉴定及测序 | 第39-40页 |
| 3.4 RT-PCR | 第40-41页 |
| 3.4.1 RT-PCR引物设计 | 第40页 |
| 3.4.2 cDNA的合成 | 第40页 |
| 3.4.3 标准曲线的建立 | 第40-41页 |
| 3.4.4 RT-PCR | 第41页 |
| 3.4.5 RT-PCR数据处理 | 第41页 |
| 3.5 结果分析 | 第41-45页 |
| 3.5.1 MON531~(R7569)的cry1Ac基因的转录本分析 | 第41-43页 |
| 3.5.1.1 巢式PCR | 第41页 |
| 3.5.1.2 PCR产物克隆测序 | 第41-42页 |
| 3.5.1.3 cry1Ac基因的转录本分析 | 第42-43页 |
| 3.5.2 MON531~(R7569)的cry1Ac基因转录分析 | 第43-45页 |
| 3.5.2.1 cry1Ac基因的标准曲线 | 第43-45页 |
| 3.5.2.2 转录水平分析 | 第45页 |
| 3.6 结论与讨论 | 第45-47页 |
| 第四章 MON531~(R7569)中Cry1Ac蛋白的表达分析 | 第47-51页 |
| 4.1 实验试剂与仪器 | 第47页 |
| 4.2 样品制备 | 第47-48页 |
| 4.2.1 材料来源 | 第47页 |
| 4.2.2 植物总蛋白的提取 | 第47-48页 |
| 4.3 Cry1Ac蛋白含量测定 | 第48页 |
| 4.4 数据统计数据分析 | 第48页 |
| 4.5 结果分析 | 第48-49页 |
| 4.6 结论与讨论 | 第49-51页 |
| 第五章 转基因棉花MON531~(R7569)室内抗虫性测定 | 第51-56页 |
| 5.1 实验试剂及仪器 | 第51页 |
| 5.2 材料准备 | 第51页 |
| 5.2.1 棉花样品来源 | 第51页 |
| 5.2.2 供试虫源 | 第51页 |
| 5.3 生物测定 | 第51页 |
| 5.4 杀虫蛋白含量测定 | 第51-52页 |
| 5.5 数据处理 | 第52页 |
| 5.6 结果分析 | 第52-54页 |
| 5.6.1 棉铃虫取食棉花叶片情况 | 第52页 |
| 5.6.2 转基因抗虫棉抗虫性测定 | 第52-53页 |
| 5.6.3 Cry1Ac杀虫蛋白含量测定 | 第53-54页 |
| 5.7 结论与讨论 | 第54-56页 |
| 第六章 cry1Ac基因序列的甲基化分析 | 第56-63页 |
| 6.1 主要试剂及仪器 | 第56页 |
| 6.2 样品制备 | 第56-57页 |
| 6.2.1 材料来源 | 第56页 |
| 6.2.2 基因组DNA提取 | 第56-57页 |
| 6.3 引物设计 | 第57页 |
| 6.3.1 MON531~(R7569)的cry1Ac基因MSRE-qPCR引物设计 | 第57页 |
| 6.3.2 亚硫酸盐测序法的PCR引物设计 | 第57页 |
| 6.4 cry1Ac基因的MSRE-qPCR | 第57-58页 |
| 6.4.1 甲基化敏感的限制性内切酶的选择 | 第57-58页 |
| 6.4.2 酶切基因组DNA | 第58页 |
| 6.4.3 RT-PCR | 第58页 |
| 6.5 亚硫酸盐测序分析甲基化区域 | 第58-59页 |
| 6.5.1 基因组DNA的亚硫酸盐处理 | 第58页 |
| 6.5.2 PCR扩增 | 第58页 |
| 6.5.3 产物克隆测序 | 第58-59页 |
| 6.6 数据处理 | 第59页 |
| 6.6.1 cry1Ac基因甲基化区域定量分析 | 第59页 |
| 6.7 结果分析 | 第59-61页 |
| 6.7.1 MON531~(R7569)的cry1Ac基因的甲基化测定 | 第59页 |
| 6.7.2 cry1Ac基因序列甲基化区域不同时期的监测 | 第59-60页 |
| 6.7.3 cry1Ac基因甲基化序列区域亚硫酸盐测序 | 第60-61页 |
| 6.8 结论与讨论 | 第61-63页 |
| 第七章 全文结论 | 第63-65页 |
| 参考文献 | 第65-76页 |
| 附录 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 作者简历 | 第78页 |
