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家蚕BmICE-2基因克隆及其功能分析

摘要第9-12页
ABSTRACT第12-16页
第一章 文献综述第17-35页
    1.1 Caspase蛋白酶家族与细胞凋亡第17-27页
        1.1.1 细胞凋亡与Caspase概述第17-18页
        1.1.2 Caspase特征及分类第18-19页
        1.1.3 起始Caspase的结构特点与活化特征第19-20页
        1.1.4 效应Caspase结构特点与活化特征第20页
        1.1.5 Caspase与凋亡信号转导途径第20-25页
        1.1.6 Caspase的调控机制第25-27页
        1.1.7 Caspase家族与细胞凋亡研究的生物学意义第27页
    1.2 CASPASE与果蝇细胞凋亡研究进展第27-31页
        1.2.1 果蝇Caspase与细胞凋亡第27-28页
        1.2.2 果蝇Caspase的功能研究进展第28-30页
        1.2.3 果蝇Caspase激活机制研究第30-31页
    1.3 细胞凋亡与昆虫抗病毒免疫应答第31-32页
    1.4 家蚕细胞凋亡与相关Caspase研究进展第32-35页
第二章 引言第35-39页
    2.1 研究背景第35-36页
    2.2 研究的目的意义第36-37页
    2.3 研究内容第37页
    2.4 研究的主要技术路线第37-39页
第三章 家蚕BmICE-2基因的克隆与表达分析第39-61页
    3.1 材料与方法第39-50页
        3.1.1 动物、病毒及细胞系第39页
        3.1.2 主要试剂及仪器第39-44页
        3.1.3 主要方法第44-50页
    3.2 结果与分析第50-56页
        3.2.1 BmICE-2基因克隆与序列特征分析第50页
        3.2.2 BmICE-2结构域预测与功能预测分析第50-53页
        3.2.3 BmICE-2基因mRNA表达分析第53-54页
        3.2.4 凋亡诱导与BmICE-2基因的mRNA表达第54-55页
        3.2.5 BmICE-2基因原核表达与Caspase活性分析第55-56页
    3.3 讨论第56-59页
    3.4 本章小结第59-61页
第四章 BmICE-2蛋白Caspase特征鉴定与分析第61-77页
    4.1 材料与方法第61-65页
        4.1.1 细胞、动物第61页
        4.1.2 所需试剂及溶液配制第61-62页
        4.1.3 BmICE-2瞬时表达载体的构建第62页
        4.1.4 BmICE-2多肽抗体的制备第62页
        4.1.5 基因定点突变(Dpn Ⅰ法)与质粒构建第62-63页
        4.1.6 原核表达与Caspase活性检测第63页
        4.1.7 细胞培养与转染第63页
        4.1.8 SDS-PAGE与Western blot分析第63-64页
        4.1.9 BmICE-2蛋白异位表达与Caspase活性分析第64页
        4.1.10 免疫荧光双染与ER-Tracker(Red)第64-65页
        4.1.11 免疫荧光双染与Mito-Tracker(Green)第65页
    4.2 结果第65-73页
        4.2.1 BmICE-2蛋白瞬时表达与活化特征第65-69页
        4.2.2 定点突变与序列分析特征第69页
        4.2.3 突变质粒原核表达与Caspase活性分析第69-70页
        4.2.4 突变质粒瞬时表达与Caspase活性分析第70-71页
        4.2.5 在Sf-9细胞中BmICE-2蛋白瞬时表达与活化特征第71-72页
        4.2.6 内源性的BmICE-2蛋白的亚细胞定位特征第72-73页
    4.3 讨论第73-76页
    4.4 本章小结第76-77页
第五章 BmICE-2基因在家蚕细胞中的功能分析第77-101页
    5.1 材料与方法第77-83页
        5.1.1 试剂仪器第77页
        5.1.2 BmIAP基因克隆与瞬时表达载体的构建第77-78页
        5.1.3 细胞培养与转染第78页
        5.1.4 BmICE-2基因干涉与凋亡诱导第78-79页
        5.1.5 原位免疫荧光第79-80页
        5.1.6 免疫荧光双染与ER-Tracker(Red)第80页
        5.1.7 免疫荧光双染与Mito-Tracker(Green)第80页
        5.1.8 家蚕细胞线粒体与细胞核蛋白组分提取第80-81页
        5.1.9 RNA提取与qRT-PCR分析第81页
        5.1.10 家蚕抑凋亡相关基因结构域预测及功能分析第81页
        5.1.11 Western blot分析第81-82页
        5.1.12 免疫共沉淀分析第82-83页
    5.2 结果第83-97页
        5.2.1 BmICE-2蛋白瞬时表达诱导家蚕BmN-SWU1细胞凋亡第83-86页
        5.2.2 在BmN-SWU1细胞中凋亡诱导与BmICE-2蛋白活化第86-87页
        5.2.3 在BmE-SWU1细胞中凋亡诱导与BmICE-2蛋白活化第87-88页
        5.2.4 BmIAP瞬时表达抑制BmICE-2激发的细胞凋亡第88-90页
        5.2.5 BmICE-2基因RNA干涉与细胞凋亡第90页
        5.2.6 凋亡诱导与内源性的BmICE-2蛋白的活化第90-95页
        5.2.7 BmICE-2活化与线粒体定位特征第95-97页
    5.3 讨论第97-100页
    5.4 本章小结第100-101页
第六章 全文总结与结论第101-103页
论文创新点第103-105页
参考文献第105-113页
附录第113-115页
博士在读期间发表论文及参加课题第115-117页
致谢第117页

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