| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-10页 |
| 缩略词中英文对照表 | 第14-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-25页 |
| 1.1 前言 | 第16页 |
| 1.2 猪生长相关激素及其基因研究现状 | 第16-20页 |
| 1.2.1 生长激素 | 第16-18页 |
| 1.2.2 生长激素受体的研究 | 第18-19页 |
| 1.2.3 胰岛素样生长因子Ⅰ | 第19-20页 |
| 1.3 真核生物启动子的研究 | 第20-21页 |
| 1.4 转录因子与转录因子结合位点 | 第21-24页 |
| 1.4.1 转录因子 | 第21-22页 |
| 1.4.2 转录因子结合位点 | 第22页 |
| 1.4.3 转录因子AP-2α的研究 | 第22-24页 |
| 1.5 本实验研究意义和目的 | 第24-25页 |
| 第二章 猪GHR基因启动子生物信息分析及点突变启动子的活性验证 | 第25-50页 |
| 2.1 实验材料与耗材 | 第25-27页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第25页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第25-26页 |
| 2.1.3 实验仪器和设备 | 第26-27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-39页 |
| 2.2.1 血液基因组DNA的提取 | 第27页 |
| 2.2.2 引物的设计与合成 | 第27-28页 |
| 2.2.3 GHR基因启动子的PCR扩增 | 第28-31页 |
| 2.2.4 突变片段与pMD18-T载体连接 | 第31页 |
| 2.2.5 重组质粒转化到Trans 5α感受态细胞 | 第31-32页 |
| 2.2.6 重组质粒pMD18-T-GHR的PCR鉴定和测序鉴定 | 第32页 |
| 2.2.7 重组质粒pMD18-T-GHR与pGL3-Basic载体的双酶切 | 第32-33页 |
| 2.2.8 酶切后目的片段的T4连接 | 第33页 |
| 2.2.9 pGL3-GHR重组荧光素酶报告载体的转化、筛选、鉴定 | 第33页 |
| 2.2.10 重组荧光素酶报告载体去内毒的提取 | 第33-35页 |
| 2.2.11 C2C12、PK15细胞的培养 | 第35-36页 |
| 2.2.12 pGL3-GHR载体的转染及活性检测 | 第36-38页 |
| 2.2.13 pGL3-GHR载体与超表达载体的共转染及活性检测 | 第38页 |
| 2.2.14 猪GHR基因启动子信息学分析软件 | 第38-39页 |
| 2.2.15 GHR基因启动子活性统计分析 | 第39页 |
| 2.3 结果与分析 | 第39-48页 |
| 2.3.1 基因组DNA的提取 | 第39-40页 |
| 2.3.2 猪GHR基因启动子片断的PCR扩增 | 第40页 |
| 2.3.3 猪GHR基因启动子区上CpG岛和转录因子的预测分析 | 第40-43页 |
| 2.3.4 GHR基因启动子突变片段的扩增 | 第43-44页 |
| 2.3.5 pMD18-T-GHR重组质粒与pGL3-Basic的双酶切结果 | 第44-45页 |
| 2.3.6 pGL3-GHR重组质粒鉴定及测序结果 | 第45-46页 |
| 2.3.7 GHR基因点突变启动子荧光素酶活性检测 | 第46-47页 |
| 2.3.8 GHR基因点突变启动子载体与转录因子共转实验结果 | 第47-48页 |
| 2.4 讨论 | 第48-49页 |
| 2.5 小结 | 第49-50页 |
| 第三章 转录因子的超表达与RNAi干扰 | 第50-63页 |
| 3.1 实验材料 | 第50-51页 |
| 3.1.1 实验样品及细胞 | 第50页 |
| 3.1.2 载体、菌株和试剂 | 第50页 |
| 3.1.3 主要的仪器 | 第50-51页 |
| 3.2 实验方法 | 第51-58页 |
| 3.2.1 广西巴马小型猪的饲养与采样 | 第51页 |
| 3.2.2 广西巴马小型猪各组织Total RNA提取 | 第51页 |
| 3.2.3 各组织cDNA的合成 | 第51-52页 |
| 3.2.4 引物的设计与合成 | 第52-53页 |
| 3.2.5 猪AP-2α基因组织表达谱构建 | 第53页 |
| 3.2.6 猪AP-2α基因超表达载体的构建 | 第53-56页 |
| 3.2.7 RNA干扰 | 第56页 |
| 3.2.8 PK15细胞的复苏、冻存、传代培养 | 第56页 |
| 3.2.9 收集细胞提取总RNA反转录为cDNA | 第56-57页 |
| 3.2.10 实时荧光定量PCR | 第57-58页 |
| 3.3 结果与分析 | 第58-60页 |
| 3.3.1 猪AP-2α基因组织表达谱分析 | 第58页 |
| 3.3.2 转录因子pcDNA3.1-AP-2α超表达结果 | 第58-59页 |
| 3.3.3 RNA干扰结果 | 第59-60页 |
| 3.4 讨论 | 第60-62页 |
| 3.5 小结 | 第62-63页 |
| 第四章 凝胶迁移实验 | 第63-72页 |
| 4.1 实验材料 | 第63页 |
| 4.1.1 实验细胞 | 第63页 |
| 4.1.2 实验试剂 | 第63页 |
| 4.1.3 实验仪器与设备 | 第63页 |
| 4.2 实验方法 | 第63-66页 |
| 4.2.1 细胞的培养与制备 | 第63-64页 |
| 4.2.2 EMSA探针的设计 | 第64页 |
| 4.2.3 核蛋白的抽提 | 第64-66页 |
| 4.3 结合反应 | 第66-69页 |
| 4.3.1 非变性聚丙烯酸氨凝胶电泳 | 第67页 |
| 4.3.2 电转移 | 第67-68页 |
| 4.3.3 紫外交联与洗涤孵育 | 第68-69页 |
| 4.4 曝光成像 | 第69页 |
| 4.5 实验结果 | 第69-70页 |
| 4.6 讨论 | 第70-71页 |
| 4.7 小结 | 第71-72页 |
| 结论 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-80页 |
| 附录 | 第80-85页 |
| 致谢 | 第85-86页 |
| 硕士期间发表论文情况 | 第86页 |
