| 摘要 | 第4-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 目录 | 第10-15页 |
| Catalogue | 第15-20页 |
| 第一章 绪论 | 第20-37页 |
| 1.1 血栓性疾病概述 | 第20-21页 |
| 1.2 血栓形成机理 | 第21-24页 |
| 1.2.1 血栓简介 | 第21页 |
| 1.2.2 凝血机制 | 第21-24页 |
| 1.3 人体溶栓机理 | 第24-29页 |
| 1.3.1 纤维蛋白和纤维蛋白原结构 | 第24-26页 |
| 1.3.2 纤维蛋白的降解 | 第26页 |
| 1.3.3 人纤溶酶结构 | 第26-28页 |
| 1.3.4 人纤溶酶的激活物 | 第28-29页 |
| 1.4 溶栓药物研究现状 | 第29-32页 |
| 1.4.1 第一代溶栓药物 | 第29页 |
| 1.4.2 第二代溶栓药 | 第29-31页 |
| 1.4.3 第三代溶栓药 | 第31-32页 |
| 1.4.4 第四代溶栓药 | 第32页 |
| 1.5 地鳖虫和黄粉虫研究现状 | 第32-34页 |
| 1.6 论文研究意义及主要研究内容 | 第34-37页 |
| 1.6.1 研究意义 | 第34-36页 |
| 1.6.2 研究内容 | 第36-37页 |
| 第二章 纤溶活性蛋白检测技术概述 | 第37-46页 |
| 2.1 纤维平板法 | 第37-39页 |
| 2.2 显色底物法 | 第39-42页 |
| 2.3 反相纤维蛋白自显影 | 第42-43页 |
| 2.4 纤维蛋白酶谱法 | 第43-44页 |
| 2.5 小结 | 第44-46页 |
| 第三章 纤维平板法的研究 | 第46-53页 |
| 3.1 实验材料 | 第46-47页 |
| 3.1.1 主要实验材料和试剂 | 第46页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第46-47页 |
| 3.2 实验方法 | 第47-48页 |
| 3.2.1 主要试剂配制 | 第47-48页 |
| 3.2.2 纤维平板的制备和活性检测 | 第48页 |
| 3.2.3 纤溶酶原灭活 | 第48页 |
| 3.3 结果 | 第48-52页 |
| 3.3.1 纤维蛋白浓度对实验结果的影响 | 第48-49页 |
| 3.3.2 尿激酶最佳使用浓度检测 | 第49-50页 |
| 3.3.3 纤维平板中纤溶酶原浓度对试验结果的影响 | 第50-51页 |
| 3.3.4 纤维平板中纤溶酶原的去活 | 第51-52页 |
| 3.4 小结 | 第52-53页 |
| 第四章 纤维蛋白酶谱法的研究 | 第53-62页 |
| 4.1 实验材料 | 第53-54页 |
| 4.1.1 主要实验材料和试剂 | 第53页 |
| 4.1.2 主要仪器 | 第53-54页 |
| 4.2 实验方法 | 第54-56页 |
| 4.2.1 主要试剂配制 | 第54-55页 |
| 4.2.2 纤维蛋白酶谱法分离胶和浓缩胶的配置 | 第55页 |
| 4.2.3 纤维蛋白酶谱的电泳和染色 | 第55-56页 |
| 4.3 实验结果 | 第56-60页 |
| 4.3.1 纤维蛋白原浓度对分辨率的影响 | 第56-57页 |
| 4.3.2 蛋白质Marker在SDS纤维蛋白酶谱法中使用量研究 | 第57-59页 |
| 4.3.3 蛋白质Marker和尿激酶同时在SDS纤维蛋白酶谱法中电泳 | 第59-60页 |
| 4.4 小结 | 第60-62页 |
| 第五章 地鳖虫纤溶活性蛋白的分离纯化及性质研究 | 第62-76页 |
| 5.1 实验材料 | 第62-63页 |
| 5.1.1 主要实验材料和试剂 | 第62页 |
| 5.1.2 主要仪器 | 第62-63页 |
| 5.2 实验方法 | 第63-70页 |
| 5.2.1 地鳖虫材料的处理 | 第63页 |
| 5.2.2 粗蛋白的提取和硫酸铵梯度沉淀 | 第63-64页 |
| 5.2.3 地鳖虫纤溶活性蛋白的分离纯化 | 第64页 |
| 5.2.4 蛋白浓度测定 | 第64-65页 |
| 5.2.5 SDS-PAGE分析蛋白分子量 | 第65-68页 |
| 5.2.6 SDS-fibrin zymography法分析蛋白分子量和活性 | 第68页 |
| 5.2.7 纤维平板法半定量检测蛋白活性 | 第68-69页 |
| 5.2.8 温度和pH值对蛋白活性和稳定性的影响 | 第69页 |
| 5.2.9 蛋白酶抑制剂对酶活的影响 | 第69页 |
| 5.2.10 金属离子对酶活的影响 | 第69页 |
| 5.2.11 数据分析 | 第69-70页 |
| 5.3 实验结果与讨论 | 第70-76页 |
| 5.3.1 地鳖虫纤溶活性蛋白的分离纯化 | 第70-72页 |
| 5.3.2 SDS-PAGE和纤维蛋白酶谱法分析地鳖虫纤溶活性蛋白分子量 | 第72-73页 |
| 5.3.3 温度和pH值对地鳖虫纤溶活性蛋白活性和稳定性的影响 | 第73-74页 |
| 5.3.4 蛋白酶抑制剂和金属离子对ESTL活性的影响 | 第74-76页 |
| 第六章 地鳖虫纤溶活性蛋白三维模型的构建及其基因克隆 | 第76-108页 |
| 6.1 实验材料 | 第76-79页 |
| 6.1.1 常用化学试剂 | 第76页 |
| 6.1.2 特殊生物材料、试剂、酶、载体和菌株 | 第76-77页 |
| 6.1.3 引物 | 第77页 |
| 6.1.4 细菌用培养基 | 第77-78页 |
| 6.1.5 主要仪器 | 第78-79页 |
| 6.2 实验方法 | 第79-96页 |
| 6.2.1 地鳖虫总RNA的提取 | 第79-81页 |
| 6.2.2 核酸浓度测定 | 第81页 |
| 6.2.3 地鳖虫纤溶活性蛋白cDNA 3'端RACE | 第81-86页 |
| 6.2.4 地鳖虫纤溶活性蛋白cDNA 5'端RACE | 第86-95页 |
| 6.2.5 序列分析及三维建模软件 | 第95-96页 |
| 6.3 实验结果 | 第96-108页 |
| 6.3.1 地鳖虫纤溶活性蛋白基因cDNA克隆 | 第96-102页 |
| 6.3.2 地鳖虫纤溶活性蛋白ESTL基因进化树构建 | 第102-105页 |
| 6.3.3 地鳖虫纤溶活性蛋白ESTL蛋白三维模型构建 | 第105-108页 |
| 第七章 黄粉虫纤溶活性蛋白的分离纯化及性质研究 | 第108-123页 |
| 7.1 实验材料 | 第108-109页 |
| 7.1.1 主要实验材料和试剂 | 第108页 |
| 7.1.2 主要仪器 | 第108-109页 |
| 7.2 实验方法 | 第109-116页 |
| 7.2.1 黄粉虫材料的处理 | 第109页 |
| 7.2.2 粗蛋白的提取和硫酸铵梯度沉淀 | 第109-110页 |
| 7.2.3 黄粉虫纤溶活性蛋白的分离纯化 | 第110页 |
| 7.2.4 蛋白浓度测定 | 第110-111页 |
| 7.2.5 SDS-PAGE分析蛋白分子量 | 第111-114页 |
| 7.2.6 SDS-fibrin zymography法分析蛋白分子量和活性 | 第114页 |
| 7.2.7 纤维平板法半定量检测蛋白活性 | 第114-115页 |
| 7.2.8 温度和pH值对蛋白活性和稳定性的影响 | 第115页 |
| 7.2.9 蛋白酶抑制剂对酶活的影响 | 第115页 |
| 7.2.10 金属离子对酶活的影响 | 第115页 |
| 7.2.11 数据分析 | 第115-116页 |
| 7.3 实验结果与讨论 | 第116-123页 |
| 7.3.1 黄粉虫纤溶活性蛋白的分离纯化 | 第116-119页 |
| 7.3.2 SDS-PAGE和纤维蛋白酶谱法分析黄粉虫纤溶活性蛋白分子量 | 第119-120页 |
| 7.3.3 温度和pH值对黄粉虫纤溶活性蛋白活性和稳定性的影响 | 第120-121页 |
| 7.3.4 蛋白酶抑制剂和金属离子对TMTL活性的影响 | 第121-123页 |
| 第八章 黄粉虫纤溶活性蛋白基因克隆及其在大肠杆菌中的表达 | 第123-148页 |
| 8.1 实验材料 | 第123-127页 |
| 8.1.1 常用化学试剂 | 第123页 |
| 8.1.2 特殊生物材料、试剂、酶、载体和菌株 | 第123-124页 |
| 8.1.3 引物 | 第124-125页 |
| 8.1.4 细菌用培养基 | 第125-126页 |
| 8.1.5 主要仪器 | 第126-127页 |
| 8.2 实验方法 | 第127-134页 |
| 8.2.1 黄粉虫总RNA的提取 | 第127-128页 |
| 8.2.2 核酸浓度测定 | 第128-129页 |
| 8.2.3 黄粉虫纤溶活性蛋白cDNA 3'端RACE | 第129-130页 |
| 8.2.4 黄粉虫纤溶活性蛋白cDNA 5'端RACE | 第130页 |
| 8.2.5 序列分析及三维建模软件 | 第130页 |
| 8.2.6 表达载体构建 | 第130-132页 |
| 8.2.7 大肠杆菌JM109及BL21感受态细胞的制备 | 第132页 |
| 8.2.8 表达片段的连接、克隆及鉴定 | 第132页 |
| 8.2.9 TMTL的诱导表达与SDS-PAGE检测 | 第132-133页 |
| 8.2.10 表达产物的Western印记分析 | 第133页 |
| 8.2.11 表达产物可溶性检测 | 第133-134页 |
| 8.2.12 表达产物的变性、复性与纯化 | 第134页 |
| 8.3 实验结果 | 第134-148页 |
| 8.3.1 黄粉虫纤溶活性蛋白基因cDNA克隆 | 第134-139页 |
| 8.3.2 黄粉虫纤溶活性蛋白TMTL基因进化树构建 | 第139-141页 |
| 8.3.3 黄粉虫纤溶活性蛋白TMTL蛋白三维模型构建 | 第141-142页 |
| 8.3.4 黄粉虫纤溶活性蛋白TMTL表达载体构建 | 第142-143页 |
| 8.3.5 黄粉虫TMTL在大肠杆菌中诱导表达 | 第143-145页 |
| 8.3.6 黄粉虫TMTL重组蛋白纯化及复性 | 第145-148页 |
| 结论、创新点及展望 | 第148-150页 |
| 参考文献 | 第150-163页 |
| 攻读博士学位期间发表论文 | 第163-165页 |
| 致谢 | 第165页 |
