| 致谢 | 第6-7页 |
| 序言(前言） | 第7-10页 |
| 摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第18-50页 |
| 1.1 神经鞘脂质 | 第18-19页 |
| 1.2 鞘糖脂 | 第19-21页 |
| 1.3 哺乳动物中神经鞘脂质的功能 | 第21-28页 |
| 1.3.1 神经鞘脂质的合成 | 第21-24页 |
| 1.3.2 神经鞘脂质的信号传递功能 | 第24-25页 |
| 1.3.3 神经鞘脂质在细胞凋亡中的作用 | 第25-26页 |
| 1.3.4 神经鞘脂质在细胞增殖和存活中的作用 | 第26-28页 |
| 1.4 酵母中神经鞘脂质的作用 | 第28-32页 |
| 1.4.1 酵母神经鞘脂质的合成 | 第28-29页 |
| 1.4.2 酵母神经鞘脂质的信号传导作用 | 第29-30页 |
| 1.4.3 神经鞘脂质在酵母细胞生长中的作用 | 第30-31页 |
| 1.4.4 酵母神经鞘脂质在与质膜相关生物进程中的作用 | 第31-32页 |
| 1.5 植物神经鞘脂质 | 第32-37页 |
| 1.5.1 植物神经鞘脂质的合成 | 第32-34页 |
| 1.5.2 植物神经鞘脂质的作用 | 第34-37页 |
| 1.6 昆虫神经鞘脂质 | 第37-40页 |
| 1.6.1 昆虫神经鞘脂质的合成 | 第37页 |
| 1.6.2 神经鞘脂质相关酶在果蝇发育中的作用 | 第37-39页 |
| 1.6.3 神经酰胺对神经发育的影响 | 第39页 |
| 1.6.4 鞘糖脂对果蝇发育和神经系统的影响 | 第39-40页 |
| 1.7 神经酰胺酶的研究进展 | 第40-44页 |
| 1.7.1 酸性神经酰胺酶 | 第40-41页 |
| 1.7.2 中性神经酰胺酶 | 第41-43页 |
| 1.7.3 碱性神经酰胺酶 | 第43-44页 |
| 1.8 鞘磷脂酶的研究进展 | 第44-48页 |
| 1.8.1 酸性鞘磷脂酶 | 第44-45页 |
| 1.8.2 中性鞘磷脂酶 | 第45-47页 |
| 1.8.3 碱性鞘磷脂酶 | 第47-48页 |
| 1.9 本研究的目的和意义 | 第48-50页 |
| 第二章 赤拟谷盗中性神经酰胺酶的生化特征及其功能 | 第50-88页 |
| 2.1 材料和方法 | 第51-55页 |
| 2.1.1 赤拟谷盗品系 | 第51页 |
| 2.1.2 菌种,细胞系和真核表达系统 | 第51-52页 |
| 2.1.3 试剂 | 第52页 |
| 2.1.4 仪器设备 | 第52-53页 |
| 2.1.5 试剂配置 | 第53-55页 |
| 2.2 实验方法 | 第55-67页 |
| 2.2.1 总RNA提取 | 第55页 |
| 2.2.2 cDNA第一链合成 | 第55-56页 |
| 2.2.3 PCR扩增 | 第56-57页 |
| 2.2.4 PCR产物回收 | 第57页 |
| 2.2.5 PCR产物平末端加A | 第57页 |
| 2.2.6 感受态细胞的制备(CaCl_2法) | 第57-58页 |
| 2.2.7 连接转化 | 第58页 |
| 2.2.8 阳性克隆检测 | 第58-59页 |
| 2.2.9 大肠杆菌质粒提取 | 第59页 |
| 2.2.10 重组质粒pFast-HTB-LOC657315、pFast-HTB-LOC657468和pFast-HTB-LOC657392的构建 | 第59-60页 |
| 2.2.11 重组杆状病毒质粒的构建 | 第60页 |
| 2.2.12 重组病毒DNA BAC-LOC657315、BAC-LOC657468、BAC-LOC657392、BAC-HTB提取 | 第60页 |
| 2.2.13 重组病毒DNA(BAC-LOC657315、BAC-LOC657468、BAC-LOC657392、BAC-HTB)阳性克隆检测 | 第60-61页 |
| 2.2.14 LOC657315、LOC657468、LOC657392在昆虫细胞中的表达 | 第61页 |
| 2.2.15 SDS-PAGE | 第61-62页 |
| 2.2.16 Western blot分析 | 第62页 |
| 2.2.17 pFAST-HTB-eGFPN/LOC657468、pFAST-HTB-eGFPN/LOC657392融合蛋白表达载体构建 | 第62-63页 |
| 2.2.18 eGFPN/LOC657392和eGFPN/LOC657468融合蛋白在粉纹夜蛾细胞内的表达情况 | 第63页 |
| 2.2.19 microsome提取 | 第63-64页 |
| 2.2.20 用作反应底物的各种Ceramide制备 | 第64页 |
| 2.2.21 酶活力测定 | 第64页 |
| 2.2.22 鞘脂质抽提 | 第64-65页 |
| 2.2.23 高效液相色谱(HPLC)测定酶活 | 第65页 |
| 2.2.24 荧光定量PCR(qRT-PCR) | 第65-66页 |
| 2.2.25 pFAST-HTB-eGFPC/Tncer和pFAST-HTB-eGFPN/Tncer载体构建 | 第66-67页 |
| 2.2.26 Tncer-eGFP融合蛋白在粉纹夜蛾细胞内的亚细胞定位 | 第67页 |
| 2.3 实验结果 | 第67-84页 |
| 2.3.1 LOC657315、LOC657468、LOC657392基因RT-PCR扩增及序列鉴定 | 第67-72页 |
| 2.3.2 LOC657315、LOC657468和LOC657392序列分析 | 第72-76页 |
| 2.3.3 重组杆状病毒质粒的构建 | 第76页 |
| 2.3.4 重组蛋白表达 | 第76-77页 |
| 2.3.5 eGFPN/LOC657468和eGFPN/LOC657392在粉纹夜蛾细胞中的表达情况 | 第77-78页 |
| 2.3.6 LOC657315、LOC657468和LOC657392神经酰胺酶活性分析 | 第78-81页 |
| 2.3.7 Tncer的生化特征分析 | 第81-82页 |
| 2.3.8 Tncer在赤拟谷盗不同发育时期和不同组织中的表达情况 | 第82-83页 |
| 2.3.9 Tncer在粉纹夜蛾中的亚细胞定位 | 第83-84页 |
| 2.4 讨论 | 第84-88页 |
| 第三章 灰飞虱中性神经酰胺酶的生化特征及其对胁迫的反应 | 第88-112页 |
| 3.1 实验材料 | 第88-89页 |
| 3.1.1 灰飞虱品系 | 第88页 |
| 3.1.2 菌种和真核表达系统 | 第88-89页 |
| 3.1.3 试剂 | 第89页 |
| 3.1.4 仪器设备 | 第89页 |
| 3.1.5 试剂配制 | 第89页 |
| 3.2 实验方法 | 第89-94页 |
| 3.2.1 总RNA提取 | 第89页 |
| 3.2.2 cDNA第一链合成 | 第89页 |
| 3.2.3 PCR扩增灰飞虱中性神经酰胺酶(LsnCer)编码阅读框(ORF) | 第89-90页 |
| 3.2.4 PCR产物回收及加A反应 | 第90页 |
| 3.2.5 连接转化构建pGEM-T-LsnCer | 第90页 |
| 3.2.6 重组质粒pFast-HTB-LsnCer的构建 | 第90-91页 |
| 3.2.7 重组杆状病毒转移质粒(Bacmid)BAC-LsnCer的构建 | 第91页 |
| 3.2.8 含LnsCer的重组病毒感染粉纹夜蛾细胞 | 第91页 |
| 3.2.9 SDS-PAGE分析 | 第91页 |
| 3.2.10 Western blot分析 | 第91-92页 |
| 3.2.11 粉纹夜蛾细胞microsome提取 | 第92页 |
| 3.2.12 BCA方法测定蛋白浓度 | 第92页 |
| 3.2.13 酶活力测定 | 第92页 |
| 3.2.14 荧光定量PCR(qRT-PCR) | 第92-93页 |
| 3.2.15 pFAST-HTB-eGFP-LsnCer融合蛋白表达载体构建 | 第93页 |
| 3.2.16 LsnCer亚细胞定位 | 第93页 |
| 3.2.17 灰飞虱虫体膜蛋白(microsome)提取 | 第93-94页 |
| 3.2.18 农药滴定 | 第94页 |
| 3.3 结果与分析 | 第94-107页 |
| 3.3.1 LsnCer基因RT-PCR扩增及序列分析 | 第94-97页 |
| 3.3.2 重组病毒质粒的构建 | 第97-98页 |
| 3.3.3 LsnCer重组蛋白在粉纹夜蛾细胞中的表达 | 第98-99页 |
| 3.3.4 LsnCer神经酰胺酶酶活测定 | 第99页 |
| 3.3.5 LsnCer的生化特征分析 | 第99-101页 |
| 3.3.6 LsnCer在灰飞虱不同组织中的表达情况 | 第101-102页 |
| 3.3.7 LsnCer在粉纹夜蛾细胞中的亚细胞定位 | 第102页 |
| 3.3.8 携带水稻条纹叶枯病病毒(RSV)的灰飞虱有更高的LsnCer表达量 | 第102-105页 |
| 3.3.9 神经鞘氨醇激酶2(sphingosine kinase 2,SK2)的mRNA水平在RSV-infected灰飞虱中也较高 | 第105页 |
| 3.3.10 农药能够刺激LsnCer的mRNA表达并提高灰飞虱体内神经酰胺酶的活性 | 第105-107页 |
| 3.4 讨论 | 第107-112页 |
| 第四章 灰飞虱中性鞘磷脂酶1的生化特征 | 第112-128页 |
| 4.1 实验材料 | 第112-113页 |
| 4.1.1 灰飞虱飞虱品系 | 第112-113页 |
| 4.1.2 菌种、真核表达系统 | 第113页 |
| 4.1.3 实验试剂 | 第113页 |
| 4.1.4 实验仪器 | 第113页 |
| 4.1.5 试剂配制 | 第113页 |
| 4.2 实验方法 | 第113-116页 |
| 4.2.1 灰飞虱总RNA提取及第一链CDNA合成 | 第113页 |
| 4.2.2 灰飞虱中性鞘磷脂酶(LsnSMase)编码阅读框ORF的PCR扩增 | 第113-114页 |
| 4.2.3 pFAST-HTB-LsnSMase质粒构建 | 第114页 |
| 4.2.4 pFAST-HTB-BAC-LsnSMase重组病毒DNA构建 | 第114页 |
| 4.2.5 pFAST-HTB-BAC-LsnSMase重组病毒DNA转染粉纹夜蛾细胞 | 第114页 |
| 4.2.6 SDS-PAGE | 第114页 |
| 4.2.7 Western blot | 第114-115页 |
| 4.2.8 细胞microsome提取 | 第115页 |
| 4.2.9 BCA蛋白浓度测定 | 第115页 |
| 4.2.10 酶活测定 | 第115页 |
| 4.2.11 荧光定量PCR | 第115-116页 |
| 4.3 结果与分析 | 第116-124页 |
| 4.3.1 LsnSMase序列分析 | 第116-120页 |
| 4.3.2 LsnSMase在粉纹夜蛾细胞中的表达 | 第120页 |
| 4.3.3 LsnSMase的酶活测定 | 第120-122页 |
| 4.3.4 LsnSMase的生化特征分析 | 第122-124页 |
| 4.3.5 LsnSMase在不同组织中的表达情况 | 第124页 |
| 4.4 讨论 | 第124-128页 |
| 第五章 总结与讨论 | 第128-134页 |
| 5.1 结论与讨论 | 第128-131页 |
| 5.1.1 昆虫中性神经酰胺酶的结构与生化特征 | 第128-129页 |
| 5.1.2 中性神经酰胺酶对昆虫生理活动的作用 | 第129-130页 |
| 5.1.3 灰飞虱中性鞘磷脂酶的生化特征 | 第130-131页 |
| 5.2 进一步的研究方向 | 第131-134页 |
| 参考文献 | 第134-150页 |
| 作者简历 | 第150页 |
