| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 第1章 绪论 | 第14-37页 |
| 1.1 引言 | 第14页 |
| 1.2 细胞内吞纳米颗粒的研究 | 第14-17页 |
| 1.2.1 内吞方式的主要分类 | 第14-15页 |
| 1.2.2 纳米颗粒的内吞方式 | 第15-17页 |
| 1.3 影响纳米颗粒内吞效率的因素 | 第17-25页 |
| 1.3.1 颗粒尺寸的影响 | 第17-18页 |
| 1.3.2 颗粒形貌的影响 | 第18-19页 |
| 1.3.3 颗粒表面化学的影响 | 第19-22页 |
| 1.3.4 其他影响颗粒内吞效率的因素 | 第22-25页 |
| 1.4 纳米颗粒的生物医学应用 | 第25-29页 |
| 1.4.1 基因转染方面的应用 | 第25-26页 |
| 1.4.2 药物载体方面的应用 | 第26-28页 |
| 1.4.3 生物医学成像方面的应用 | 第28-29页 |
| 1.5 纳米颗粒内吞过程研究 | 第29-30页 |
| 1.6 细胞膜外基质的成分及作用 | 第30-32页 |
| 1.6.1 细胞膜外基质的主要成分 | 第30页 |
| 1.6.2 细胞膜外基质的生物学功能 | 第30-31页 |
| 1.6.3 细胞膜外基质对细胞内吞外界物质的影响 | 第31-32页 |
| 1.7 纳米颗粒内吞后产生的细胞反应 | 第32-34页 |
| 1.8 本论文的工作设想 | 第34-37页 |
| 第2章 利用暗场显微镜实时研究单个金纳米颗粒在膜外微环境中的受限行为 | 第37-49页 |
| 2.1 前言 | 第37-38页 |
| 2.2 实验部分 | 第38-40页 |
| 2.2.1 金纳米颗粒的制备及表征 | 第38页 |
| 2.2.2 用 PEI 修饰金纳米颗粒 | 第38页 |
| 2.2.3 细胞培养 | 第38页 |
| 2.2.4 颗粒对细胞活性影响 | 第38页 |
| 2.2.5 暗场显微镜装置及样品制备 | 第38-39页 |
| 2.2.6 单颗粒扩散系数计算 | 第39页 |
| 2.2.7 实时示踪颗粒在膜外基质中的扩散行为 | 第39页 |
| 2.2.8 血细胞沉淀实验表征细胞膜外基质 | 第39-40页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第40-48页 |
| 2.3.1 金纳米颗粒的表征结果 | 第40-41页 |
| 2.3.2 单颗粒示踪方法计算扩散系数的合理性验证 | 第41页 |
| 2.3.3 细胞活性表征 | 第41-42页 |
| 2.3.4 暗场显微成像实时示踪颗粒的内吞过程 | 第42-44页 |
| 2.3.5 细胞膜外基质厚度的测定 | 第44-46页 |
| 2.3.6 细胞膜外基质对颗粒扩散的影响与细胞系及颗粒表面化学无关 | 第46页 |
| 2.3.7 P19 和 HeLa 细胞的膜外基质厚度 | 第46-48页 |
| 2.4 小结 | 第48-49页 |
| 第3章 厚膜外基质细胞促进金纳米颗粒内吞效率的研究 | 第49-64页 |
| 3.1 前言 | 第49-50页 |
| 3.2 实验部分 | 第50-51页 |
| 3.2.1 颗粒的制备 | 第50页 |
| 3.2.2 细胞培养 | 第50页 |
| 3.2.3 颗粒对细胞活性影响 | 第50页 |
| 3.2.4 细胞膜外基质厚度表征 | 第50页 |
| 3.2.5 MG-63 细胞膜外基质的处理 | 第50-51页 |
| 3.2.6 ICP-AES 定量实验 | 第51页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第51-62页 |
| 3.3.1 细胞内吞实验的模型 | 第51-52页 |
| 3.3.2 颗粒的表征 | 第52页 |
| 3.3.3 细胞活性表征 | 第52-53页 |
| 3.3.4 血细胞沉淀实验确定细胞膜外基质的厚度 | 第53-54页 |
| 3.3.5 MG-63 细胞对金纳米颗粒的内吞量随颗粒浓度的变化 | 第54页 |
| 3.3.6 MG-63 细胞对金纳米颗粒的内吞量随培养时间的变化 | 第54-55页 |
| 3.3.7 厚膜外基质和薄膜外基质的细胞对金纳米颗粒内吞的影响 | 第55-62页 |
| 3.4 小结 | 第62-64页 |
| 第4章 细胞膜外基质促进金纳米颗粒内吞效率的机制研究 | 第64-78页 |
| 4.1 前言 | 第64-65页 |
| 4.2 实验部分 | 第65-66页 |
| 4.2.1 暗场显微成像和微分干涉差显微成像 | 第65页 |
| 4.2.2 共聚焦显微镜成像 | 第65-66页 |
| 4.2.3 单颗粒示踪方法 | 第66页 |
| 4.2.4 内吞抑制剂的购买和准备 | 第66页 |
| 4.2.5 细胞膜外基质的表征 | 第66页 |
| 4.2.6 细胞样品的处理和制备 | 第66页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第66-77页 |
| 4.3.1 金纳米颗粒的表征 | 第66-67页 |
| 4.3.2 暗场显微成像与微分干涉差显微成像研究膜外基质对颗粒的聚集 | 第67-68页 |
| 4.3.3 共聚焦显微成像研究膜外基质对颗粒的聚集 | 第68页 |
| 4.3.4 共聚焦显微成像研究膜外基质实时捕获颗粒的过程 | 第68-69页 |
| 4.3.5 单颗粒示踪方法研究颗粒在不同厚度膜外基质中的扩散行为 | 第69-72页 |
| 4.3.6 颗粒扩散慢有利于提高细胞内吞量的验证 | 第72-73页 |
| 4.3.7 膜外基质对颗粒的捕获和内吞需要消耗能量 | 第73-74页 |
| 4.3.8 内吞抑制剂调节膜外基质对颗粒的捕获和内吞 | 第74-76页 |
| 4.3.9 膜外基质参与颗粒受体介导内吞过程的模型 | 第76-77页 |
| 4.4 小结 | 第77-78页 |
| 第5章 颗粒尺寸和表面化学对膜外基质促进金纳米颗粒内吞效率的影响研究 | 第78-88页 |
| 5.1 前言 | 第78页 |
| 5.2 实验部分 | 第78-79页 |
| 5.2.1 不同尺寸金颗粒的合成及表征 | 第78-79页 |
| 5.2.2 颗粒的表面修饰 | 第79页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第79-87页 |
| 5.3.1 金纳米颗粒的表征 | 第79-80页 |
| 5.3.2 膜外基质促进颗粒内吞与尺寸的关系(50-120 nm) | 第80-83页 |
| 5.3.3 膜外基质促进颗粒内吞与颗粒表面化学的关系 | 第83-85页 |
| 5.3.4 膜外基质促进颗粒内吞受细胞密度的影响 | 第85-87页 |
| 5.4 小结 | 第87-88页 |
| 第6章 膜外基质促进金纳米颗粒内吞效率的普遍性研究 | 第88-96页 |
| 6.1 前言 | 第88-89页 |
| 6.2 实验部分 | 第89页 |
| 6.2.1 颗粒对细胞的活性影响 | 第89页 |
| 6.2.2 HeLa 细胞膜外基质的处理 | 第89页 |
| 6.2.3 不同处理后 HeLa 细胞膜外基质的表征 | 第89页 |
| 6.3 结果与讨论 | 第89-95页 |
| 6.3.1 细胞活性表征 | 第89-90页 |
| 6.3.2 不同处理后 HeLa 细胞膜外基质的厚度 | 第90页 |
| 6.3.3 HeLa 细胞对颗粒的内吞与浓度和时间的关系 | 第90-91页 |
| 6.3.4 不同膜外基质厚度的 HeLa 细胞对颗粒的内吞 | 第91-93页 |
| 6.3.5 HeLa 细胞中颗粒扩散慢有利于提高内吞效率的验证 | 第93页 |
| 6.3.6 不同膜外基质组成的 HeLa 细胞对颗粒内吞与尺寸无关 | 第93-95页 |
| 6.4 小结 | 第95-96页 |
| 第7章 颗粒内吞后引发的细胞反应研究 | 第96-107页 |
| 7.1 前言 | 第96-97页 |
| 7.2 实验部分 | 第97-98页 |
| 7.2.1 不同尺寸金纳米颗粒的合成及表征 | 第97页 |
| 7.2.2 MTT 法表征不同尺寸金纳米颗粒对 HeLa 细胞的活性影响 | 第97页 |
| 7.2.3 单细胞方法研究颗粒在细胞内或外对细胞的活性影响 | 第97-98页 |
| 7.2.4 不同尺寸颗粒对细胞贴壁的影响表征 | 第98页 |
| 7.2.5 不同尺寸颗粒对细胞骨架的影响表征 | 第98页 |
| 7.2.6 不同尺寸颗粒对细胞增殖的影响表征 | 第98页 |
| 7.2.7 颗粒对 P19 细胞神经向分化的影响表征 | 第98页 |
| 7.3 结果与讨论 | 第98-106页 |
| 7.3.1 不同尺寸颗粒的表征 | 第98-99页 |
| 7.3.2 MTT 法研究不同尺寸颗粒对 HeLa 细胞的活性影响 | 第99-100页 |
| 7.3.3 不同尺寸颗粒对细胞贴壁的影响结果 | 第100-101页 |
| 7.3.4 不同尺寸颗粒对细胞骨架的影响结果 | 第101-102页 |
| 7.3.5 不同尺寸颗粒对细胞增殖的影响结果 | 第102-103页 |
| 7.3.6 颗粒对 P19 细胞神经向分化的影响结果 | 第103-106页 |
| 7.4 小结 | 第106-107页 |
| 结论 | 第107-109页 |
| 参考文献 | 第109-122页 |
| 附录 A 攻读学位期间发表的学术论文 | 第122-123页 |
| 致谢 | 第123页 |
