| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 第一章 绪论 | 第13-33页 |
| 1.1 南极假丝酵母脂肪酶B | 第13-20页 |
| 1.1.1 南极假丝酵母脂肪酶B的概述 | 第13-14页 |
| 1.1.2 南极假丝酵母脂肪酶B的催化反应机制 | 第14页 |
| 1.1.3 南极假丝酵母脂肪酶B的基因工程研究 | 第14-19页 |
| 1.1.4 南极假丝酵母脂肪酶B的应用 | 第19-20页 |
| 1.2 毕赤酵母表达系统 | 第20-22页 |
| 1.2.1 背景介绍 | 第20页 |
| 1.2.2 毕赤酵母表达宿主菌 | 第20-21页 |
| 1.2.3 毕赤酵母表达载体及外源基因整合方式 | 第21-22页 |
| 1.2.4 毕赤酵母表达系统的应用实例(脂肪酶在毕赤酵母中的表达) | 第22页 |
| 1.3 维生素A及其衍生物 | 第22-26页 |
| 1.3.1 维生素A及其衍生物的简介 | 第22-23页 |
| 1.3.2 维生素A的化学合成 | 第23-25页 |
| 1.3.3 维生素A棕榈酸酯的简介 | 第25页 |
| 1.3.4 维生素A棕榈酸酯的合成 | 第25-26页 |
| 1.4 本论文的选题意义及研究内容 | 第26-27页 |
| 1.4.1 本论文的选题意义 | 第26-27页 |
| 1.4.2 本论文的研究内容 | 第27页 |
| 参考文献 | 第27-33页 |
| 第二章 南极假丝酵母脂肪酶B基因的克隆与表达 | 第33-51页 |
| 2.1 引言 | 第33页 |
| 2.2 材料和方法 | 第33-44页 |
| 2.2.1 菌种和载体 | 第33-34页 |
| 2.2.2 主要工具酶和试剂 | 第34页 |
| 2.2.3 培养基及溶液配置 | 第34-36页 |
| 2.2.4 主要实验仪器 | 第36-37页 |
| 2.2.5 C.Antarctica ZJB09193总RNA的提取 | 第37页 |
| 2.2.6 RNA甲醛变性电泳 | 第37-38页 |
| 2.2.7 C.Antarctica ZJB09193脂肪酶B cDNA的合成 | 第38-39页 |
| 2.2.8 C.Antarctica ZJB09193脂肪酶B基因的克隆 | 第39-40页 |
| 2.2.9 大肠杆菌E.coli JM109感受态的制备及转化 | 第40页 |
| 2.2.10 C.Antarctica ZJB09193脂肪酶B表达载体的构建 | 第40-41页 |
| 2.2.11 重组表达载体pPICZα A-CALB的提取 | 第41-42页 |
| 2.2.12 重组表达载体pPICZα A-CALB的酶切鉴定 | 第42页 |
| 2.2.13 重组表达载体pPICZα A-CALB的转化 | 第42-43页 |
| 2.2.14 重组脂肪酶的诱导表达及SDS-PAGE分析 | 第43页 |
| 2.2.15 生物量的测定 | 第43-44页 |
| 2.2.16 重组脂肪酶的酶活检测 | 第44页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第44-49页 |
| 2.3.1 RNA的提取 | 第44-45页 |
| 2.3.2 cDNA的合成及克隆 | 第45页 |
| 2.3.3 CALB表达载体的构建及鉴定 | 第45-47页 |
| 2.3.4 毕赤酵母的电转化 | 第47页 |
| 2.3.5 重组脂肪酶的诱导表达 | 第47-49页 |
| 2.4 本章小结 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-51页 |
| 第三章 重组脂肪酶的分离纯化及酶学性质研究 | 第51-63页 |
| 3.1 引言 | 第51页 |
| 3.2 材料和方法 | 第51-55页 |
| 3.2.1 菌株 | 第51页 |
| 3.2.2 培养基及其配制 | 第51-52页 |
| 3.2.3 主要实验仪器 | 第52页 |
| 3.2.4 重组脂肪酶活力的测定 | 第52页 |
| 3.2.5 蛋白质浓度的测定 | 第52-53页 |
| 3.2.6 重组脂肪酶的分离纯化 | 第53-54页 |
| 3.2.7 重组脂肪酶的酶学性质研究 | 第54-55页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第55-61页 |
| 3.3.1 重组脂肪酶的分离纯化 | 第55-57页 |
| 3.3.2 重组脂肪酶最适pH的测定 | 第57-58页 |
| 3.3.3 重组脂肪酶的pH稳定性 | 第58页 |
| 3.3.4 重组脂肪酶最适温度的测定 | 第58-59页 |
| 3.3.5 重组脂肪酶的热稳定性 | 第59页 |
| 3.3.6 金属离子和表面活性剂对重组脂肪酶酶活的影响 | 第59-61页 |
| 3.3.7 酶反应动力学 | 第61页 |
| 3.4 本章小结 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-63页 |
| 第四章 固定化脂肪酶的应用—维生素A棕榈酸酯的酶法合成 | 第63-81页 |
| 4.1 引言 | 第63页 |
| 4.2 材料和方法 | 第63-67页 |
| 4.2.1 试剂 | 第63-64页 |
| 4.2.2 主要实验仪器 | 第64页 |
| 4.2.3 固定化脂肪酶的制备 | 第64-65页 |
| 4.2.4 固定化脂肪酶合成维生素A棕榈酸酯的条件优化 | 第65-67页 |
| 4.3 结果与分析 | 第67-79页 |
| 4.3.1 载体的选择 | 第67-68页 |
| 4.3.2 载体与共固定剂的质量体积比影响 | 第68页 |
| 4.3.3 活化棉布的最优加酶量 | 第68-69页 |
| 4.3.4 固定化时间的影响 | 第69-70页 |
| 4.3.5 有机溶剂的影响 | 第70页 |
| 4.3.6 温度的影响 | 第70-71页 |
| 4.3.7 固定化酶用量的影响 | 第71-72页 |
| 4.3.8 底物摩尔比的影响 | 第72-73页 |
| 4.3.9 反应初始加水量的影响 | 第73-74页 |
| 4.3.10 反应进程 | 第74页 |
| 4.3.11 固定化酶稳定性的研究 | 第74-75页 |
| 4.3.12 脂肪酸碳链长度的影响 | 第75页 |
| 4.3.13 反应动力学机制 | 第75-79页 |
| 4.4 本章小结 | 第79页 |
| 参考文献 | 第79-81页 |
| 第五章 总结与展望 | 第81-83页 |
| 5.1 总结 | 第81-82页 |
| 5.2 展望 | 第82-83页 |
| 攻读学位期间所取得的相关科研成果 | 第83-84页 |
| 致谢 | 第84页 |
