| 中文摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-22页 |
| 1.1 生物钟 | 第12-14页 |
| 1.1.1 生物钟概论 | 第12-13页 |
| 1.1.2 生物钟分子机制 | 第13-14页 |
| 1.2 斑马鱼及其生物钟基因 | 第14-15页 |
| 1.2.1 斑马鱼作为生物钟研究模型的可行性及优势 | 第14页 |
| 1.2.2 斑马鱼生物钟基因 | 第14-15页 |
| 1.3 clock基因 | 第15-16页 |
| 1.4 Npas2基因 | 第16页 |
| 1.5 NPAS2表达的调节机制 | 第16-18页 |
| 1.6 NPAS2的主要功能 | 第18-20页 |
| 1.6.1 NPAS2参与调节生物节律 | 第18-19页 |
| 1.6.2 NPAS2参与肿瘤发生和发展 | 第19-20页 |
| 1.7 班马鱼clock2基因概论 | 第20-21页 |
| 1.8 立题意义和主要研究内容 | 第21-22页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第22-41页 |
| 2.1 实验材料 | 第22页 |
| 2.2 实验试剂 | 第22-23页 |
| 2.3 实验仪器 | 第23-24页 |
| 2.4 实验试剂配制 | 第24-26页 |
| 2.4.1 细菌培养基 | 第24-25页 |
| 2.4.2 抗生素 | 第25页 |
| 2.4.3 核酸电泳相关缓冲液 | 第25页 |
| 2.4.4 Inoue法制备超级感受态细胞相关溶液 | 第25页 |
| 2.4.5 原位杂交相关试剂 | 第25-26页 |
| 2.5 引物设计与合成 | 第26-28页 |
| 2.6 实验方法及设计 | 第28-41页 |
| 2.6.1 斑马鱼交配及产卵 | 第28页 |
| 2.6.2 启动子的克隆 | 第28-29页 |
| 2.6.3 PCR产物切胶回收 | 第29页 |
| 2.6.4 目的片段连接到pGL4.17-luciferase载体上 | 第29页 |
| 2.6.5 连接产物转化感受态细胞 | 第29-30页 |
| 2.6.6 重组质粒的鉴定 | 第30页 |
| 2.6.7 重组质粒的抽提 | 第30-31页 |
| 2.6.8 斑马鱼总RNA的提取 | 第31页 |
| 2.6.9 细胞培养 | 第31-32页 |
| 2.6.10 荧光素酶表达水平检测 | 第32-33页 |
| 2.6.11 定点突变 | 第33页 |
| 2.6.12 Ch IP实验 | 第33-34页 |
| 2.6.13 原位杂交过程 | 第34-36页 |
| 2.6.14 PCR产物回收纯化 | 第36页 |
| 2.6.15 clock2纯合突变体品系鉴定 | 第36-37页 |
| 2.6.16 斑马鱼的运动行为检测：成鱼交配设置 | 第37-38页 |
| 2.6.17 正常光暗条件下（L:D=14:10）条件下幼鱼行为仪观察程序设置 | 第38页 |
| 2.6.18 持续黑暗和光照条件下幼鱼行为仪观察程序设置 | 第38页 |
| 2.6.19 荧光定量PCR | 第38-39页 |
| 2.6.20 高通量深度测序 | 第39-40页 |
| 2.6.21 数据统计分析 | 第40-41页 |
| 第三章 结果 | 第41-62页 |
| 3.1 斑马鱼clock2基因表达呈现生物钟节律 | 第41-42页 |
| 3.1.1 qRT-PCR验证clock2在转录水平上呈现昼夜节律 | 第41-42页 |
| 3.1.2 整体原位杂交实验检测clock2基因在斑马鱼体内的表达情况 | 第42页 |
| 3.2 斑马鱼生物钟基因clock2的调节机制 | 第42-47页 |
| 3.2.1 Bmal-Clock对斑马鱼clock2基因的调控研究 | 第42-44页 |
| 3.2.2 斑马鱼clock2通过D-box，RORE元件受到生物钟的调控 | 第44-47页 |
| 3.3 斑马鱼clock2突变体生长情况，雌雄比、受精率及生存率统计 | 第47-48页 |
| 3.4 斑马鱼clock2突变导致斑马鱼行为节律改变 | 第48-51页 |
| 3.5 斑马鱼clock2突变体中核心钟基因表达改变 | 第51-56页 |
| 3.5.1 在正常光照条件下斑马鱼clock2突变体生物钟基因bmal和clock表达改变 | 第51-52页 |
| 3.5.2 在正常光照条件下斑马鱼clock2突变体生物钟基因per和cry表达改变 | 第52-53页 |
| 3.5.3 在持续黑暗条件下斑马鱼clock2突变体生物钟基因bmal和clock表达改变 | 第53-54页 |
| 3.5.4 在持续黑暗条件下斑马鱼clock2突变体生物钟基因per和cry表达改变 | 第54页 |
| 3.5.5 在持续光照条件下斑马鱼clock2突变体生物钟基因bmal和clock表达改变 | 第54-55页 |
| 3.5.6 在持续光照条件下斑马鱼clock2突变体生物钟基因per和cry表达改变 | 第55-56页 |
| 3.6 在斑马鱼clock2突变体不同组织器官中，生物钟基因的表达改变 | 第56-58页 |
| 3.7 转录组测序 | 第58-62页 |
| 3.7.1 测序样品的准备 | 第58页 |
| 3.7.2 斑马鱼clock2转录组测序结果分析 | 第58-62页 |
| 第四章 讨论与展望 | 第62-68页 |
| 4.1 斑马鱼clock2的调控机制 | 第62-63页 |
| 4.2 clock2缺失改变斑马鱼行为节律 | 第63-64页 |
| 4.3 斑马鱼clock2基因的缺失影响生物钟基因表达 | 第64-65页 |
| 4.4 斑马鱼核心生物钟基因在clock2突变体特异性组织/器官中表达改变 | 第65-66页 |
| 4.5 斑马鱼clock2纯合突变体转录组测序结果分析 | 第66-68页 |
| 第五章 结论 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-80页 |
| 附录 缩略词 | 第80-83页 |
| 致谢 | 第83-85页 |
