| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-12页 |
| 缩略语 | 第12-13页 |
| 第一章 家蚕领域研究进展 | 第13-19页 |
| 引言 | 第13页 |
| 1 生物信息学在家蚕领域的应用 | 第13-15页 |
| ·EST(Expressed Sequence Tag) | 第14页 |
| ·EST 在家蚕研究中的应用 | 第14-15页 |
| 2 蛋白质组学（proteomics） | 第15页 |
| 3 家蚕功能基因组的研究 | 第15-18页 |
| ·家蚕基因工程载体 | 第15-17页 |
| ·分子标记技术在家蚕中的应用 | 第17-18页 |
| 4 展望 | 第18-19页 |
| 第二章 实验方案设计 | 第19-21页 |
| 1 研究目的和意义 | 第19页 |
| 2 研究内容 | 第19-20页 |
| 3 实验流程 | 第20-21页 |
| 第三章 生物信息学分析 | 第21-28页 |
| 1 序列和工具 | 第21页 |
| ·序列 | 第21页 |
| ·工具和软件 | 第21页 |
| 2 结果 | 第21-26页 |
| ·序列 | 第21-22页 |
| ·蛋白的信号肽分析 | 第22-23页 |
| ·蛋白疏水性分析 | 第23页 |
| ·蛋白的跨膜结构域预测 | 第23-24页 |
| ·蛋白的定位预测 | 第24页 |
| ·Bm29 功能位点分析 | 第24-25页 |
| ·Bm29 二级结构预测 | 第25-26页 |
| ·同源性分析 | 第26页 |
| 3 讨论 | 第26-28页 |
| 第四章 pET-28a(+)–Bm29 重组质粒的构建与原核表达 | 第28-40页 |
| 1 材料与试剂 | 第28-31页 |
| ·材料 | 第28页 |
| ·试剂 | 第28页 |
| ·试剂的配置 | 第28-31页 |
| 2 方法 | 第31-37页 |
| ·引物设计 | 第31页 |
| ·质粒提取 | 第31-32页 |
| ·PCR 扩增 | 第32页 |
| ·凝胶回收纯化PCR 产物 | 第32页 |
| ·PCR 产物与pET-28a(+)载体的双酶切及酶切产物回收 | 第32-33页 |
| ·连接反应 | 第33页 |
| ·E.coli TG1、Rosetta(DE3)感受态细胞的制备 | 第33-34页 |
| ·连接产物的转化 | 第34页 |
| ·重组质粒pET-28a(+)-Bm29 的筛选与鉴定 | 第34-35页 |
| ·重组质粒pET-28a(+)-Bm29 的序列测定 | 第35页 |
| ·重组质粒pET-28a(+)-Bm29 的转化E.coli Rosetta | 第35-36页 |
| ·重组质粒pET-28a(+)-Bm29 的在大肠杆菌中的诱导表达 | 第36页 |
| ·表达产物SDS-PAGE 电泳分析 | 第36-37页 |
| 3 结果 | 第37-39页 |
| ·家蚕Bm29 基因PCR 扩增结果 | 第37页 |
| ·重组质粒pET-28a(+)-Bm29 鉴定 | 第37-38页 |
| ·pET-28a(+)-Bm29 重组质粒测序 | 第38页 |
| ·重组质粒在大肠杆菌中表达 | 第38-39页 |
| 4 讨论 | 第39-40页 |
| 第五章 融合蛋白的纯化及抗体制备 | 第40-52页 |
| 1 材料与试剂 | 第40-42页 |
| ·材料与设备 | 第40页 |
| ·试剂 | 第40页 |
| ·主要试剂的配制 | 第40-42页 |
| 2 方法 | 第42-47页 |
| ·融合蛋白表达产物存在形式的检测分析 | 第42-43页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第43-44页 |
| ·抗体制备 | 第44-45页 |
| ·抗体纯化 | 第45页 |
| ·间接ELISA 法测定抗体效价 | 第45-46页 |
| ·融合蛋白His-Bm29 的Western blotting 鉴定 | 第46-47页 |
| 3 结果 | 第47-50页 |
| ·融合蛋白His-Bm29 的纯化 | 第47-48页 |
| ·抗体纯化 | 第48-49页 |
| ·抗His-Bm29 的多克隆抗体效价测定 | 第49-50页 |
| ·Western blotting 检测 | 第50页 |
| 4 讨论 | 第50-52页 |
| 第六章 Bm29 在家蚕体内的表达分析 | 第52-67页 |
| 1 材料与试剂 | 第52-53页 |
| ·材料 | 第52页 |
| ·试剂与设备 | 第52页 |
| ·试剂配制 | 第52-53页 |
| 2 方法 | 第53-57页 |
| ·家蚕各时期和各组织总蛋白质的提取及定量 | 第53-54页 |
| ·ELISA 测定家蚕各时期和各组织中Bm29 的含量 | 第54页 |
| ·家蚕各时期各组织总RNA 的提取 | 第54页 |
| ·RT-PCR 引物设计 | 第54-55页 |
| ·荧光定量PCR | 第55-56页 |
| ·荧光定量PCR 数据分析 | 第56-57页 |
| 3 结果 | 第57-65页 |
| ·Bm29 在家蚕五龄幼虫各组织以及各时期总蛋白中的含量 | 第57-59页 |
| ·家蚕发育过程中Bm29 mRNA 表达量的变化 | 第59-62页 |
| ·家蚕五龄幼虫各组织Bm29 mRNA 表达量的变化 | 第62-65页 |
| ·Western blotting 表达分析 | 第65页 |
| 4 讨论 | 第65-67页 |
| 第七章 亚细胞定位 | 第67-71页 |
| 1 材料与试剂 | 第67页 |
| ·材料与设备 | 第67页 |
| ·试剂 | 第67页 |
| ·试剂的配置 | 第67页 |
| 2 方法 | 第67-68页 |
| 3 结果 | 第68-69页 |
| 4 讨论 | 第69-71页 |
| 结论 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
