| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-14页 |
| 缩略语 | 第14-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-23页 |
| 1 前言 | 第15页 |
| 2 Wibg 与bgcn 的关系 | 第15-21页 |
| ·bgcn 简介 | 第16-17页 |
| ·bgcn 和bam 的关系 | 第17-19页 |
| ·bam 基因简介 | 第17页 |
| ·bgcn 和bam 基因功能关系相近并剂量敏感 | 第17-19页 |
| ·bgcn 跟DExH 盒蛋白的关系 | 第19-21页 |
| 3 Wibg 与Mago-bind 超家族的关系 | 第21页 |
| 4 Wibg 的研究现状及展望 | 第21-23页 |
| 第二章 实验设计方案 | 第23-25页 |
| 1 实验的目的、意义 | 第23页 |
| 2 研究内容 | 第23-24页 |
| 3 试验流程图 | 第24-25页 |
| 第三章 生物信息学分析 | 第25-35页 |
| 1 生物信息学分析软件 | 第25页 |
| 2 方法 | 第25-26页 |
| ·BmWibg 基因的获得 | 第25页 |
| ·BmWibg 基因的序列分析 | 第25-26页 |
| 3 结果 | 第26-33页 |
| ·BmWibg 的基本信息 | 第26-27页 |
| ·BmWibg 蛋白的疏水性分析 | 第27-28页 |
| ·BmWibg 蛋白的信号肽分析 | 第28-29页 |
| ·BmWibg 蛋白跨膜区预测 | 第29页 |
| ·BmWibg 蛋白定位的预测 | 第29页 |
| ·BmWibg 蛋白磷酸化位点预测 | 第29-30页 |
| ·BmWibg 蛋白的二级结构预测 | 第30页 |
| ·BmWibg 蛋白的三级结构预测 | 第30-31页 |
| ·BmWibg 氨基酸序列同源性分析 | 第31-32页 |
| ·BmWibg 蛋白的进化树构建 | 第32-33页 |
| 4 讨论 | 第33-35页 |
| 第四章 家蚕Wibg 基因的克隆 | 第35-43页 |
| 1 材料与试剂 | 第35-36页 |
| ·材料 | 第35页 |
| ·试剂 | 第35-36页 |
| ·培养基 | 第35页 |
| ·抗生素 | 第35-36页 |
| ·碱裂解法提取质粒DNA 用溶液 | 第36页 |
| ·核酸电泳所用溶液 | 第36页 |
| ·其它溶液 | 第36页 |
| 2 方法 | 第36-40页 |
| ·重组表达质粒的构建策略 | 第36-37页 |
| ·质粒提取 | 第37页 |
| ·PCR 扩增 | 第37-38页 |
| ·设计引物 | 第37页 |
| ·PCR 反应体系 | 第37-38页 |
| ·PCR 反应程序 | 第38页 |
| ·双酶切PCR 产物与pET-28a(+)载体 | 第38页 |
| ·纯化酶切产物 | 第38-39页 |
| ·连接反应 | 第39页 |
| ·E.coli TG1 感受态细胞的制备 | 第39-40页 |
| ·连接产物的转化 | 第40页 |
| ·重组克隆的筛选与鉴定 | 第40页 |
| ·挑选单菌落 | 第40页 |
| ·质粒的小量制备 | 第40页 |
| ·PCR 鉴定 | 第40页 |
| ·双酶切鉴定 | 第40页 |
| 3 结果 | 第40-42页 |
| ·PCR 扩增结果 | 第40-41页 |
| ·重组质粒的双酶切鉴定 | 第41页 |
| ·序列测定 | 第41-42页 |
| 4 讨论 | 第42-43页 |
| 第五章 融合蛋白在大肠杆菌中的诱导表达、纯化 | 第43-49页 |
| 1 材料与试剂 | 第43-44页 |
| ·材料 | 第43页 |
| ·试剂 | 第43页 |
| ·试剂配制 | 第43-44页 |
| ·SDS-PAGE 用溶液 | 第43页 |
| ·凝胶过滤用溶液 | 第43页 |
| ·镍柱亲和层析纯化用试剂 | 第43-44页 |
| 2 方法 | 第44-45页 |
| ·融合蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第44页 |
| ·SDS-PAGE 电泳分析 | 第44-45页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第45页 |
| 3 结果 | 第45-47页 |
| ·融合蛋白的诱导表达及纯化 | 第45-46页 |
| ·FPLC 分离纯化 | 第46页 |
| ·融合蛋白分子量的质谱鉴定 | 第46-47页 |
| 4 讨论 | 第47-49页 |
| 第六章 多克隆抗体的制备，效价测定及Western blotting | 第49-55页 |
| 1 试剂与材料 | 第49页 |
| ·实验材料 | 第49页 |
| ·实验试剂 | 第49页 |
| ·抗体制备用试剂 | 第49页 |
| ·ELISA 用溶液 | 第49页 |
| ·Western blotting 用溶液 | 第49页 |
| 2 方法 | 第49-51页 |
| ·抗体制备 | 第49-50页 |
| ·抗原制备 | 第49-50页 |
| ·免疫动物 | 第50页 |
| ·多克隆抗血清的制备 | 第50页 |
| ·抗体的效价测定 | 第50-51页 |
| 3 抗体的纯化 | 第51页 |
| 4 Western blotting 检测抗体的特异性 | 第51-52页 |
| 5 结果 | 第52-54页 |
| ·抗体的效价测定 | 第52-53页 |
| ·抗体的纯化 | 第53页 |
| ·Western blotting 检测抗体的特异性 | 第53-54页 |
| 6 讨论 | 第54-55页 |
| 第七章 组织定位 | 第55-69页 |
| 1 材料和试剂 | 第55-57页 |
| ·材料 | 第55页 |
| ·试剂 | 第55页 |
| ·试剂配制 | 第55-57页 |
| ·蛋白提取裂解液 | 第55-56页 |
| ·Bradford 检测用试剂 | 第56页 |
| ·SDS-PAGE 用溶液 | 第56页 |
| ·Western blotting 用溶液 | 第56页 |
| ·ELISA 用溶液 | 第56-57页 |
| 2 方法 | 第57-60页 |
| ·总RNA 的提取 | 第57页 |
| ·反转录(RT)反应 | 第57-58页 |
| ·荧光定量PCR 引物的设计 | 第58页 |
| ·荧光定量PCR | 第58-59页 |
| ·荧光定量PCR 数据分析 | 第59页 |
| ·总蛋白质的提取及定量 | 第59-60页 |
| ·总蛋白质的提取 | 第59页 |
| ·Bradford 法进行定量 | 第59-60页 |
| ·Western blotting 检测BmWibg 蛋白的分布 | 第60页 |
| ·ELISA 测定蚕蛹总蛋白中BmWibg 的含量 | 第60页 |
| 3 结果 | 第60-67页 |
| ·家蚕发育过程中mRNA 量的变化 | 第60-62页 |
| ·五龄幼虫各组织中 mRNA 量的比较 | 第62-64页 |
| ·Western blotting 检测家蚕发育过程中BmWibg 蛋白表达量的变化 | 第64页 |
| ·Western blotting 检测BmWibg 蛋白在各组织中的分布 | 第64页 |
| ·BmWibg 在家蚕中的含量 | 第64-67页 |
| ·制作ELISA 标准曲线 | 第64-65页 |
| ·测定家蚕总蛋白中BmWibg 的含量 | 第65-67页 |
| 4 讨论 | 第67-69页 |
| 第八章 亚细胞定位试验 | 第69-73页 |
| 1 材料与试剂 | 第69页 |
| ·材料 | 第69页 |
| ·试剂配制 | 第69页 |
| 2 方法 | 第69-70页 |
| 3 结果 | 第70-71页 |
| 4 讨论 | 第71-73页 |
| 结论 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
