| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 第一章 前言 | 第9-25页 |
| 1.1 微藻产油的研究背景 | 第9页 |
| 1.2 微藻是新能源开发的理想生物材料 | 第9-15页 |
| 1.2.1 微藻生物柴油的研究现状 | 第9-10页 |
| 1.2.2 影响微藻生长和油脂积累的因素 | 第10-13页 |
| 1.2.3 微藻的总油脂及提取方法 | 第13页 |
| 1.2.4 微藻三酰甘油代谢的过程 | 第13-15页 |
| 1.3 莱茵衣藻的概述 | 第15-17页 |
| 1.3.1 莱茵衣藻的分类地位及其细胞结构 | 第15-16页 |
| 1.3.2 莱茵衣藻的生活史 | 第16页 |
| 1.3.3 选择莱茵衣藻作为研究对象的优势 | 第16-17页 |
| 1.4 基因组基因突变技术 | 第17-18页 |
| 1.4.1 基因敲除和敲入技术 | 第17页 |
| 1.4.2 反义技术 | 第17页 |
| 1.4.3 RNA干扰技术 | 第17-18页 |
| 1.5 MYB家族转录因子 | 第18-21页 |
| 1.5.1 MYB家族转录因子的结构特征 | 第19页 |
| 1.5.2 MYB转录因子的作用 | 第19-21页 |
| 1.6 AP2基因家族转录因子 | 第21页 |
| 1.7 表观遗传学（Epigenetics） | 第21-23页 |
| 1.7.1 DNA甲基化及其原理 | 第22页 |
| 1.7.2 植物DNA甲基化途径 | 第22-23页 |
| 1.7.3 DNA甲基化检测方法 | 第23页 |
| 1.8 本实验的目的及意义 | 第23-25页 |
| 第二章 莱茵衣藻MYB与AP2基因的RNA干涉研究 | 第25-51页 |
| 2.1 实验材料 | 第25-28页 |
| 2.1.1 实验所用藻株及其它菌株 | 第25页 |
| 2.1.2 构建干涉所用的载体 | 第25页 |
| 2.1.3 实验所需仪器、试剂及试剂盒 | 第25-26页 |
| 2.1.5 实验所需要的培养基 | 第26-27页 |
| 2.1.6 实验所用的引物 | 第27-28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-36页 |
| 2.2.1 莱茵衣藻CC425培养条件 | 第28页 |
| 2.2.2 莱茵衣藻CC425总RNA的提取 | 第28-29页 |
| 2.2.3 莱茵衣藻RNA反转录成cDNA | 第29页 |
| 2.2.4 莱茵衣藻转录组测序 | 第29页 |
| 2.2.5 干涉片段克隆及测序 | 第29-31页 |
| 2.2.6 用于构建RNAi干涉载体的反向重复片段的获得 | 第31-32页 |
| 2.2.7 RNAi载体的构建 | 第32-33页 |
| 2.2.8 干涉藻株的生物量检测 | 第33-35页 |
| 2.2.9 qRT-PCR检测转基因藻株mRNA水平 | 第35-36页 |
| 2.2.10 qRT-PCR检测转基因藻株对与中性油脂合成相关基因的影响 | 第36页 |
| 2.3 实验结果 | 第36-51页 |
| 2.3.1 莱茵衣藻CC124正常条件与减氮条件下的转录组测序结果 | 第36-37页 |
| 2.3.2 qRT-PCR检测CrMYB7、CrMYB8、CrAP2-3、CrAP2-4 的基因表达丰度 | 第37-39页 |
| 2.3.3 干涉片段的PCR克隆测序及T282中间载体的构建 | 第39-40页 |
| 2.3.4 RNAi载体酶切验证 | 第40-41页 |
| 2.3.5 RNAi转化莱茵衣藻CC425转化子的筛选 | 第41-42页 |
| 2.3.6 莱茵衣藻CC425干涉藻株油脂含量及生物量的检测 | 第42-51页 |
| 第三章 CrAP2-4 与CrMYB7启动子区域甲基化水平分析 | 第51-57页 |
| 3.1 实验材料 | 第51页 |
| 3.1.1 实验所需藻种 | 第51页 |
| 3.1.2 实验所需仪器 | 第51页 |
| 3.1.3 实验所需试剂及试剂盒 | 第51页 |
| 3.1.4 实验所需培养 | 第51页 |
| 3.1.5 实验中引物的设计 | 第51页 |
| 3.2 实验方法 | 第51-53页 |
| 3.2.1 藻株的培养 | 第51页 |
| 3.2.2 莱茵衣藻CC124的DNA的提取 | 第51-52页 |
| 3.2.3 DNA重亚硫酸盐处理 | 第52-53页 |
| 3.2.4 以重亚硫酸盐处理的DNA模板进行PCR扩增 | 第53页 |
| 3.2.5 PCR扩增产物的测序 | 第53页 |
| 3.2.6 测序结果的比对 | 第53页 |
| 3.3 实验结果与分析 | 第53-57页 |
| 3.3.1 重亚硫酸盐处理结果比对 | 第53-54页 |
| 3.3.2 测序结果甲基化位点的预测 | 第54-57页 |
| 第四章 讨论 | 第57-61页 |
| 4.1 莱茵衣藻 | 第57页 |
| 4.3 MYB、AP2转录因子 | 第57-58页 |
| 4.4 CrMYB7和CrAP2-4 对莱茵衣藻油脂积累的影响 | 第58页 |
| 4.5 DNA甲基化 | 第58-61页 |
| 第五章 结论 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-71页 |
| 致谢 | 第71-73页 |
| 个人简历 | 第73页 |
