| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第1章 绪论 | 第11-18页 |
| 1.0 引言 | 第11页 |
| 1.1 真核生物成熟mRNA的合成与结构 | 第11-14页 |
| 1.1.1 真核生物的转录过程 | 第11-12页 |
| 1.1.2 真核生物的mRNA序列特征及翻译 | 第12-14页 |
| 1.2 mRNA的 5’UTR对翻译的调控 | 第14-16页 |
| 1.3 研究意义 | 第16-17页 |
| 1.4 本文的研究内容 | 第17-18页 |
| 第2章 酿酒酵母GFP/ mCherry荧光蛋白共表达研究 | 第18-37页 |
| 2.1 实验材料 | 第18-21页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第18-19页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第19-20页 |
| 2.1.3 试剂、试剂盒及酶 | 第20页 |
| 2.1.4 主要培养基 | 第20页 |
| 2.1.5 主要溶液 | 第20-21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-27页 |
| 2.2.1 表达质粒的构建 | 第21-25页 |
| 2.2.2 醋酸锂法转化酿酒酵母 | 第25-27页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第27-36页 |
| 2.3.1 红色荧光宿主菌株的构建 | 第27-29页 |
| 2.3.2 整合型质粒YIplac211-RPL8A-GFP的构建 | 第29-31页 |
| 2.3.3 整合型GFP/mCherry共表达 | 第31-32页 |
| 2.3.4 游离型GFP/mCherry的基因克隆共表达 | 第32-33页 |
| 2.3.5 游离型GFP/mCherry共表达菌株的转化与观察 | 第33-36页 |
| 2.4 小结 | 第36-37页 |
| 第3章 5’UTR文库的表征与筛选 | 第37-53页 |
| 3.1 实验材料 | 第37-40页 |
| 3.1.1 菌株和质粒 | 第37-38页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第38页 |
| 3.1.3 试剂、试剂盒以及酶和引物 | 第38-40页 |
| 3.2 实验方法 | 第40-46页 |
| 3.2.1 不同 5’UTR序列表达载体的构建 | 第40-41页 |
| 3.2.2 5’UTR表征质粒的构建 | 第41-42页 |
| 3.2.3 5’UTR表征质粒的转化和表达 | 第42-44页 |
| 3.2.4 流式细胞仪测试 5’UTR表达元件 | 第44页 |
| 3.2.5 RT-qPCR实时荧光定量PCR测定mRNA水平 | 第44-46页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第46-52页 |
| 3.3.1 不同 5’UTR序列表达载体的构建 | 第46-47页 |
| 3.3.2 流式细胞仪测试 5’UTR表达元件 | 第47-50页 |
| 3.3.3 RT-qPCR实时荧光定量PCR测定mRNA水平 | 第50-52页 |
| 3.4 小结 | 第52-53页 |
| 第4章 随机 5’UTR文库构建 | 第53-65页 |
| 4.1 实验材料 | 第53-54页 |
| 4.1.1 菌株 | 第53页 |
| 4.1.2 试剂 | 第53页 |
| 4.1.3 主要仪器设备 | 第53-54页 |
| 4.2 实验方法 | 第54-58页 |
| 4.2.1 随机 5’UTR序列DNA文库的设计 | 第54-55页 |
| 4.2.2 采用胞内连接的方法，构建 5’UTR表征元件 | 第55-57页 |
| 4.2.3 5’UTR文库的筛选 | 第57页 |
| 4.2.3 测序 | 第57-58页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第58-63页 |
| 4.3.1 5’UTR随机文库的构建 | 第58-60页 |
| 4.3.2 5’UTR文库的筛选 | 第60-62页 |
| 4.3.3 荧光定量验证文库 | 第62页 |
| 4.3.4 高通量测序随机 5’UTR序列 | 第62-63页 |
| 4.4 小结 | 第63-65页 |
| 第5章 结论与展望 | 第65-67页 |
| 5.1 结论 | 第65-66页 |
| 5.2 创新点 | 第66页 |
| 5.3 展望 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 附录 1 攻读硕士期间发表论文目录 | 第72-73页 |
| 附录 2 GFP/mCherry荧光显微照片 | 第73-74页 |
