| 摘要 | 第10-14页 |
| ABSTRACT | 第14-17页 |
| 英文缩略语 | 第19-21页 |
| 前言 | 第21-24页 |
| 参考文献 | 第23-24页 |
| 第一篇 文献综述 | 第24-76页 |
| 第一章 鸡球虫病和堆型艾美耳球虫 | 第24-42页 |
| 1 鸡球虫病概述 | 第24-31页 |
| 1.1 病原 | 第24-25页 |
| 1.2 生活史 | 第25-26页 |
| 1.3 流行病学 | 第26-27页 |
| 1.4 发病机制、临床症状及病理变化 | 第27页 |
| 1.5 鸡球虫病的防治 | 第27-31页 |
| 2 鸡球虫子孢子侵入肠上皮细胞机理 | 第31-34页 |
| 2.1 鸡球虫子孢子侵入过程 | 第31-32页 |
| 2.2 鸡球虫子孢子侵入的特异性 | 第32页 |
| 2.3 鸡球虫侵入过程中的关键分子 | 第32-34页 |
| 3 展望鸡球虫的研究 | 第34-36页 |
| 参考文献 | 第36-42页 |
| 第二章 微线体蛋白 | 第42-60页 |
| 1 微线蛋白的概述 | 第42页 |
| 2 MICs蛋白分子结构域及其细胞受体 | 第42-46页 |
| 2.1 凝血酶致敏蛋白-1型结构域(Thrombospondin-1 type 1 domains,TSR) | 第42-43页 |
| 2.2 Von Willebrand A结构域/整合素inserted(Ⅰ)结构域 | 第43-44页 |
| 2.3 Apple/PAN结构域 | 第44-45页 |
| 2.4 EGF-样结构域 | 第45页 |
| 2.5 凝集素(Lectin)结构域 | 第45-46页 |
| 3 粘着复合物:组装和调节 | 第46-48页 |
| 3.1 低聚物的形成 | 第46-47页 |
| 3.2 微线体内和寄生虫表面的配体构像及分布 | 第47-48页 |
| 4 表面受体的分布和构像: 大小和结构 | 第48-49页 |
| 5 微线蛋白在穿越生物屏障中的作用 | 第49-50页 |
| 6 总结 | 第50-52页 |
| 参考文献 | 第52-60页 |
| 第三章 蛋白质相互作用的研究技术 | 第60-76页 |
| 1 生物化学与分子生物学研究技术 | 第60-66页 |
| 1.1 酵母双杂交系统 | 第60-63页 |
| 1.2 串联亲和纯化(Tandem affinty purification,TAP) | 第63页 |
| 1.3 免疫共沉淀技术(Co-immunoprecipitation technique) | 第63-64页 |
| 1.4 GST-Pul down | 第64页 |
| 1.5 Far-Western blotting | 第64-65页 |
| 1.6 蛋白质芯片 | 第65页 |
| 1.7 双分子荧光互补(Bimolecular Fluorescence Complementation,BiFC) | 第65-66页 |
| 2 生物物理学研究技术 | 第66-70页 |
| 2.1 荧光共振能量转移(Fluorescence energy transfer,FRET) | 第66-68页 |
| 2.2 表面等离子共振分析(surface plasmon resonance,SPR) | 第68-70页 |
| 3 总结 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-76页 |
| 第二篇 试验研究 | 第76-270页 |
| 第四章 堆型艾美耳球虫子孢子可溶性全蛋白中与鸡十二指肠上皮细胞结合的蛋白的鉴定及功能分析 | 第76-104页 |
| 1 材料和方法 | 第77-84页 |
| 1.1 实验材料 | 第77-79页 |
| 1.2 实验方法 | 第79-84页 |
| 2 结果 | 第84-97页 |
| 2.1 E.acervulina子孢子的纯化 | 第84页 |
| 2.2 SDS-PAGE和Western blot分析E.acervulina子孢子全蛋白 | 第84-86页 |
| 2.3 鸡十二指肠上皮细胞的鉴定 | 第86页 |
| 2.4 E.acervulina子孢子全蛋白与鸡十二指肠上皮细胞的结合 | 第86-87页 |
| 2.5 与E.acervulina子孢子全蛋白共培养的鸡十二指肠上皮细胞的SDS-PAGE和Westernblot分析 | 第87-88页 |
| 2.6 LC-MS/MS分析和鉴定结合鸡十二指肠上皮细胞的E.acervulina子孢子蛋白 | 第88-94页 |
| 2.7 生物信息学分析 | 第94-97页 |
| 3 讨论 | 第97-99页 |
| 参考文献 | 第99-104页 |
| 第五章 EaMIC2的分子鉴定及免疫保护性研究 | 第104-146页 |
| 1 材料和方法 | 第105-125页 |
| 1.1 实验材料 | 第105-106页 |
| 1.2 实验方法 | 第106-125页 |
| 2 结果 | 第125-138页 |
| 2.1 EaMIC2保守序列的扩增 | 第125页 |
| 2.2 EaMIC2基因3'和5'端的扩增 | 第125-126页 |
| 2.3 EaMIC2 ORF和mpmEaMIC2的扩增及序列分析 | 第126-127页 |
| 2.4 EaMIC2序列同源性分析以及进化树的绘制 | 第127-130页 |
| 2.5 pCold TF-mpmEaMIC2重组表达质粒的鉴定 | 第130页 |
| 2.6 重组mpmEaMIC2蛋白的表达、纯化及复性 | 第130-131页 |
| 2.7 大鼠抗mpmEaMIC2抗体效价的检测 | 第131页 |
| 2.8 免疫印迹分析mpmEaMIC2重组蛋白及EaMIC2天然的蛋白 | 第131-132页 |
| 2.9 EaMIC2在子孢子和裂殖子时期的表达 | 第132-134页 |
| 2.10 重组蛋白mpmEaMIC2抗E.acervulina保护性 | 第134-135页 |
| 2.11 免疫重组蛋白mpmEaMIC2后鸡血清中IgG滴度和细胞因子浓度的变化 | 第135-137页 |
| 2.12 免疫后鸡脾脏中CD4~+和CD8~+的变化 | 第137-138页 |
| 3 讨论 | 第138-142页 |
| 参考文献 | 第142-146页 |
| 第六章 EaMIC5的分子鉴定及免疫保护性研究 | 第146-170页 |
| 1 材料和方法 | 第147-153页 |
| 1.1 实验材料 | 第147页 |
| 1.2 实验方法 | 第147-153页 |
| 2 结果 | 第153-163页 |
| 2.1 EaMIC5基因3'和5'端的扩增 | 第153页 |
| 2.2 EaMIC5 ORF的扩增和序列分析 | 第153-154页 |
| 2.3 EaMIC5序列同源性分析以及进化树的绘制 | 第154-155页 |
| 2.4 pET-32a-EaMIC5重组表达质粒的鉴定 | 第155-156页 |
| 2.5 EaMIC5蛋白的表达、纯化及复性 | 第156-157页 |
| 2.6 大鼠抗EaMIC5抗体的效价检测 | 第157页 |
| 2.7 免疫印迹分析重组和天然的EaMIC5 | 第157-158页 |
| 2.8 EaMIC5在子孢子和裂殖子时期的表达 | 第158-160页 |
| 2.9 重组蛋白EaMIC5抗E.acervulina保护性 | 第160-161页 |
| 2.10 免疫重组蛋白EaMIC5后鸡血清中IgG滴度和sCD4、sCD8及细胞因子浓度 | 第161-163页 |
| 3 讨论 | 第163-166页 |
| 参考文献 | 第166-170页 |
| 第七章 EaMIC3的分子鉴定及免疫保护性研究 | 第170-198页 |
| 1 材料和方法 | 第170-177页 |
| 1.1 实验材料 | 第170-171页 |
| 1.2 实验方法 | 第171-177页 |
| 2 结果 | 第177-191页 |
| 2.1 EaMIC3保守序列的扩增 | 第177-178页 |
| 2.2 EaMIC3基因3'和5'端的扩增 | 第178页 |
| 2.3 EaMIC3 ORF的扩增和序列分析 | 第178-179页 |
| 2.4 EaMIC3序列同源性分析以及进化树的绘制 | 第179-183页 |
| 2.5 重组表达质粒pET-32a-EaMIC3 ORF的鉴定 | 第183页 |
| 2.6 EaMIC3蛋白的表达、纯化及复性 | 第183-184页 |
| 2.7 大鼠抗EaMIC3抗体效价的检测 | 第184页 |
| 2.8 免疫印迹分析重组和天然的EaMIC3 | 第184-185页 |
| 2.9 EaMIC3在子孢子和裂殖子时期的表达 | 第185-187页 |
| 2.10 重组蛋白EaMIC3抗E.acervulina的免疫保护性 | 第187页 |
| 2.11 免疫重组蛋白EaMIC3后鸡血清中IgG滴度和细胞因子浓度的变化 | 第187-189页 |
| 2.12 免疫后鸡脾脏中CD4~+和CD8~+的变化 | 第189-191页 |
| 3 讨论 | 第191-195页 |
| 参考文献 | 第195-198页 |
| 第八章 EaMIC3及其基序在E.acervulina子孢子侵入过程中的作用 | 第198-228页 |
| 1 材料和方法 | 第199-207页 |
| 1.1 实验材料 | 第199-200页 |
| 1.2 实验方法 | 第200-207页 |
| 2 结果 | 第207-221页 |
| 2.1 EaMARs、EaMAR12、EaMAR4-7、EtMAR1bcde、EtMAR1b和EtMAR1cde的PCR扩增 | 第207-208页 |
| 2.2 pET-32a-EaMARs、pET-32a-EtMAR1bcde、pET-32a-EtMAR1b、pET-32a-EaMAR12-EtMAR1b-EaMAR4-7和pET-32a-EaMAR3-EtMAR1cde重组表达质粒的鉴定 | 第208-209页 |
| 2.3 重组蛋白的表达、纯化及复性 | 第209-211页 |
| 2.4 大鼠抗EaMIC3和EtMAR1bcde抗体的效价检测 | 第211页 |
| 2.5 EaMIC3在子孢子中的定位 | 第211页 |
| 2.6 EaMIC3与鸡十二指肠上皮细胞的结合 | 第211-212页 |
| 2.7 EaMIC3-MARs结构域蛋白与鸡十二指肠上皮细胞结合的能力 | 第212-213页 |
| 2.8 EaMICs和EaMARs与不同肠段的结合能力 | 第213-216页 |
| 2.9 子孢子侵入的抑制 | 第216-221页 |
| 3 讨论 | 第221-224页 |
| 参考文献 | 第224-228页 |
| 第九章 EaMIC3-鸡十二指肠上皮细胞酵母双杂交系统的构建及EaMIC3结合分子的筛选 | 第228-270页 |
| 1 材料与方法 | 第229-248页 |
| 1.1 实验材料 | 第229-230页 |
| 1.2 方法 | 第230-248页 |
| 2 结果 | 第248-260页 |
| 2.1 鸡十二指肠上皮细胞总RNA质量检测 | 第248-249页 |
| 2.2 LD PCR合成cDNA双链的检测 | 第249页 |
| 2.3 双链cDNA的纯化 | 第249-250页 |
| 2.4 双链cDNA的均一化 | 第250-251页 |
| 2.5 鸡十二指肠上皮细胞cDNA文库质量的评价 | 第251-252页 |
| 2.6 重组诱饵质粒pDHB1-EaMIC3的构建与鉴定 | 第252-253页 |
| 2.7 诱饵质粒pDHB1-EaMIC3在NMY51酵母中表达的检测 | 第253页 |
| 2.8 酵母双杂交系统的功能性检测 | 第253-255页 |
| 2.9 筛选3-AT的最适浓度 | 第255-256页 |
| 2.10 酵母双杂交初次筛选结果 | 第256页 |
| 2.11 返回酵母验证结果 | 第256-257页 |
| 2.12 返回验证阳性捕获质粒中插入基因的鉴定 | 第257-258页 |
| 2.13 生物信息学分析结果 | 第258-260页 |
| 3 讨论 | 第260-265页 |
| 参考文献 | 第265-270页 |
| 全文总结 | 第270-272页 |
| 致谢 | 第272-274页 |
| 博士期间论文发表情况 | 第274-276页 |
