| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 第一章 引言与文献综述 | 第14-40页 |
| 1.1 引言 | 第14-16页 |
| 1.2 文献综述 | 第16-39页 |
| 1.2.1 植物超低温保存概念、机理和应用 | 第16-21页 |
| 1.2.1.1 基于冷冻诱导脱水的两步冷冻法 | 第16-18页 |
| 1.2.1.2 基于玻璃化的超低温保存 | 第18-21页 |
| 1.2.2 植物细胞超低温保存伤害研究综述 | 第21-36页 |
| 1.2.2.1 组织学研究 | 第21-25页 |
| 1.2.2.2 超微结构研究 | 第25-28页 |
| 1.2.2.3 冰晶研究 | 第28-30页 |
| 1.2.2.4 氧化胁迫研究 | 第30-33页 |
| 1.2.2.5 液氮冻存材料的遗传变异研究 | 第33-36页 |
| 1.2.3 超低温伤害的应用：超低温疗法（Cryotherapy）脱除植物病原体 | 第36-39页 |
| 1.3 本研究的目的意义 | 第39-40页 |
| 第二章 马铃薯超低温保存体系的优化和建立 | 第40-56页 |
| 2.1 试验材料 | 第40页 |
| 2.2 主要试剂和仪器 | 第40-41页 |
| 2.3 试验方法 | 第41-43页 |
| 2.3.1 两种超低温保存体系的建立和多参数的优化 | 第41-42页 |
| 2.3.1.1 低温驯化 | 第41页 |
| 2.3.1.2 蔗糖预培养 | 第41页 |
| 2.3.1.3 加载液成分 | 第41-42页 |
| 2.3.1.4 PVS2 处理时间 | 第42页 |
| 2.3.1.5 恢复培养基 | 第42页 |
| 2.3.2 两种基于玻璃化的超低温保存在多个马铃薯品种上的应用 | 第42-43页 |
| 2.3.3 小滴玻璃化和 DMSO 滴冻法超低温保存马铃薯的比较 | 第43页 |
| 2.3.4 试验设计与统计分析 | 第43页 |
| 2.4 结果与分析 | 第43-52页 |
| 2.4.1 关键参数的优化对茎尖超低温保存再生率的影响 | 第43-50页 |
| 2.4.1.1 低温驯化的效果 | 第43-44页 |
| 2.4.1.2 蔗糖预培养的效果 | 第44-46页 |
| 2.4.1.3 不同加载液成份的效果 | 第46-47页 |
| 2.4.1.4 玻璃化溶液处理时间的效果 | 第47-48页 |
| 2.4.1.5 不同恢复培养基的效果 | 第48-50页 |
| 2.4.2 两种基于玻璃化的超低温保存在多个马铃薯品种上的应用 | 第50页 |
| 2.4.3 小滴玻璃化和 DMSO 滴冻法超低温保存马铃薯茎尖 | 第50-52页 |
| 2.5 讨论与小结 | 第52-56页 |
| 第三章 马铃薯茎尖细胞超低温伤害解析 | 第56-88页 |
| 3.1 试验材料 | 第57页 |
| 3.2 主要试剂和仪器 | 第57-58页 |
| 3.3 试验方法 | 第58-62页 |
| 3.3.1 三种基于玻璃化法的茎尖超低温保存 | 第58页 |
| 3.3.2 超低温保存关键步骤处理的茎尖组织学伤害 | 第58页 |
| 3.3.3 超低温保存关键步骤处理的茎尖存活细胞比例 | 第58-59页 |
| 3.3.4 ISSR 检测再生植株的遗传变异 | 第59页 |
| 3.3.5 AFLP 检测再生植株的遗传变异 | 第59-61页 |
| 3.3.6 流式细胞仪检测再生植株的染色体倍性变异 | 第61页 |
| 3.3.7 超低温保存关键步骤处理的茎尖细胞超微结构观察 | 第61页 |
| 3.3.8 茎尖超低温保存冻融过程中的热流监测 | 第61页 |
| 3.3.9 内源和外源抗氧化剂对茎尖氧化伤害的影响 | 第61-62页 |
| 3.3.10 试验设计与统计分析 | 第62页 |
| 3.4 结果与分析 | 第62-81页 |
| 3.4.1 超低温保存后茎尖的存活率与再生率统计 | 第62页 |
| 3.4.2 超低温保存关键步骤处理的茎尖的存活细胞比例评估 | 第62-64页 |
| 3.4.3 超低温保存关键步骤处理的茎尖组织学观察 | 第64-67页 |
| 3.4.4 超低温保存再生植株的遗传变异研究 | 第67-71页 |
| 3.4.4.1 ISSR 分子标记鉴定 | 第67-69页 |
| 3.4.4.2 AFLP 分子标记鉴定 | 第69-70页 |
| 3.4.4.3 染色体倍数鉴定 | 第70-71页 |
| 3.4.5 超低温保存冻融过程中热流的 DSC 监测 | 第71-74页 |
| 3.4.5.1 冷冻保护剂的冻融过程中热流监测 | 第71-72页 |
| 3.4.5.2 茎尖冻融过程中热流监测 | 第72-74页 |
| 3.4.6 超低温保存关键步骤处理后细胞的超微结构观察 | 第74-79页 |
| 3.4.6.1 茎尖细胞的超微结构观察 | 第74-75页 |
| 3.4.6.2 超低温保护剂处理的茎尖细胞超微结构观察 | 第75-77页 |
| 3.4.6.3 超低温冻存后茎尖存活细胞定位 | 第77-79页 |
| 3.4.7 内源和外源抗氧化剂对茎尖氧化伤害的影响 | 第79-81页 |
| 3.4.7.1 转基因和野生型的马铃薯茎尖超低温保存 | 第79-80页 |
| 3.4.7.2 转基因与野生型超低温保存再生植株的形态学比较 | 第80页 |
| 3.4.7.3 外源添加还原型 GSH 或 AsA 对茎尖再生率的影响 | 第80-81页 |
| 3.5 讨论与小结 | 第81-88页 |
| 第四章 马铃薯超低温伤害脱毒效应的研究 | 第88-106页 |
| 4.1 试验材料 | 第88-89页 |
| 4.2 试剂与仪器 | 第89页 |
| 4.3 试验方法 | 第89-92页 |
| 4.3.1 超低温疗法脱除 PLRV 与 PVY | 第89页 |
| 4.3.2 超低温疗法与分生组织培养脱除 PLRV | 第89-90页 |
| 4.3.3 超低温疗法脱除 PLRV 的机理研究 | 第90-91页 |
| 4.3.3.1 组织学定位茎尖存活细胞的分布 | 第90页 |
| 4.3.3.2 免疫组织化学法定位茎尖的 PLRV 的分布 | 第90-91页 |
| 4.3.4 PVS2 处理脱除 PLRV | 第91页 |
| 4.3.5 调控超低温保护剂伤害和冰晶伤害脱除 PVY | 第91页 |
| 4.3.6 ELISA 检测马铃薯病毒 | 第91页 |
| 4.3.7 RT‐PCR 检测马铃薯病毒 | 第91-92页 |
| 4.3.8 试验设计与统计分析 | 第92页 |
| 4.4 结果与分析 | 第92-102页 |
| 4.4.1 超低温疗法脱除 PLRV 与 PVY | 第92-93页 |
| 4.4.2 茎尖大小对超低温疗法脱除 PLRV 的影响 | 第93页 |
| 4.4.3 超低温疗法脱除 PLRV 的机理 | 第93-95页 |
| 4.4.4 茎尖叶原基的个数对 PVS2 处理脱除 PLRV 的影响 | 第95-99页 |
| 4.4.5 调控超低温保护剂伤害和冰晶伤害及其对脱除 PVY 的影响 | 第99-102页 |
| 4.5 讨论与小结 | 第102-106页 |
| 第五章 结论与创新点 | 第106-108页 |
| 5.1 结论 | 第106页 |
| 5.2 创新点 | 第106-108页 |
| 参考文献 | 第108-126页 |
| 致谢 | 第126-127页 |
| 作者简介 | 第127-128页 |
