| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 第1章 综述 | 第13-25页 |
| 1.1 志贺氏菌的简介 | 第13-19页 |
| 1.1.1 志贺氏菌的分类及其基本特征 | 第13页 |
| 1.1.2 志贺氏菌的致病机理 | 第13-16页 |
| 1.1.3 三型分泌系统 | 第16-18页 |
| 1.1.4 宿主的天然免疫系统对细菌入侵的应激反应 | 第18-19页 |
| 1.2 氟喹诺酮类药物发展历程及作用机制 | 第19-22页 |
| 1.2.1 氟喹诺酮类药物的发展历程 | 第19页 |
| 1.2.2 氟喹诺酮类药物的主要靶点 | 第19-20页 |
| 1.2.3 断裂复合体的形成与喹诺酮类药物的杀菌效果 | 第20-21页 |
| 1.2.4 染色体片段化对细菌的杀菌效果 | 第21页 |
| 1.2.5 活性氧与杀菌效果间的关联 | 第21-22页 |
| 1.3 耐药机制 | 第22-23页 |
| 1.3.1 靶标介导的喹诺酮耐药 | 第22页 |
| 1.3.2 质粒调节的喹诺酮耐药 | 第22-23页 |
| 1.3.3 染色体调节的喹诺酮耐药 | 第23页 |
| 1.4 志贺氏菌效应蛋白OspF | 第23-25页 |
| 第2章 前言 | 第25-27页 |
| 2.1 研究目的及意义 | 第25页 |
| 2.2 研究内容与技术路线 | 第25-27页 |
| 第3章 材料与方法 | 第27-41页 |
| 3.1 实验材料 | 第27-31页 |
| 3.1.1 菌株和质粒 | 第27页 |
| 3.1.2 实验主要试剂 | 第27-28页 |
| 3.1.3 实验仪器 | 第28-29页 |
| 3.1.4 主要培养基和溶液的配制 | 第29-31页 |
| 3.2 实验方法 | 第31-41页 |
| 3.2.1 志贺氏菌OspF基因PCR引物设计与合成 | 第31页 |
| 3.2.2 OspF基因的鉴定 | 第31页 |
| 3.2.3 PCR产物凝胶回收 | 第31-32页 |
| 3.2.4 OspF基因连接到Pet21a载体上，并转化到Top10感受态中。 | 第32-33页 |
| 3.2.5 大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第33-34页 |
| 3.2.6 质粒提取步骤 | 第34-35页 |
| 3.2.7 Pet21a OspF重组菌菌液制备 | 第35页 |
| 3.2.8 OspF蛋白的纯化 | 第35-36页 |
| 3.2.9 Shigella flexneri 2a 301野生株，突变株以及回补株中OspF蛋白的鉴定 | 第36-37页 |
| 3.2.10 OspF抗体的制备 | 第37页 |
| 3.2.11 OspF抗体的纯化 | 第37-38页 |
| 3.2.12 抗体效价的检验 | 第38页 |
| 3.2.13 MIC测定 | 第38-39页 |
| 3.2.14 检测Shigella flexneri 2a 301野生株，突变株以及回补株中对氟诺酮类药物的敏感性 | 第39页 |
| 3.2.15 在一定浓度氟喹诺酮类药物的处理下，Shigella flexneri 2a 301野生株，突变株以及回补株存活率的测定 | 第39页 |
| 3.2.16 双氧水耐受测试 | 第39-40页 |
| 3.2.17 硫脲，2,2 联吡啶对药物杀菌作用的影响 | 第40页 |
| 3.2.18 厌氧环境对药物杀菌作用的影响 | 第40页 |
| 3.2.19 细菌体内活性氧的检测 | 第40-41页 |
| 第4章 结果与分析 | 第41-57页 |
| 4.1 OspF基因的PCR扩增鉴定 | 第41-42页 |
| 4.2 OspF蛋白的纯化，以及抗体的制备与纯化 | 第42-43页 |
| 4.3 Western-blot检测OspF基因在Shigella flexneri 2a 301野生株、△OspF突变株以及回补株中的表达 | 第43-44页 |
| 4.4 生长速率的测定 | 第44-45页 |
| 4.5 最小抑菌浓度的测定 | 第45-46页 |
| 4.6 验证突变株的耐受表型 | 第46页 |
| 4.7 在单一药物处理下存活率的测定 | 第46-50页 |
| 4.8 志贺氏菌对双氧水耐受测试 | 第50页 |
| 4.9 2,2 联吡啶与硫脲对抗生素杀菌作用的影响 | 第50-51页 |
| 4.10 厌氧条件对抗生素杀菌效果的影响 | 第51-55页 |
| 4.11 环丙沙星处理下，志贺氏菌内活性氧的变化 | 第55-57页 |
| 第5章 讨论与展望 | 第57-60页 |
| 5.1 实验结论 | 第57页 |
| 5.2 讨论 | 第57-58页 |
| 5.3 展望 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-70页 |
| 致谢 | 第70-72页 |
| 在校期间发表论文 | 第72页 |
