| 摘要 | 第10-11页 |
| 英文摘要 | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第13-21页 |
| 1.1 研究目的与意义 | 第13页 |
| 1.2 植物MAPK级联途径 | 第13-16页 |
| 1.2.1 植物MAPK级联途径的生物学功能 | 第14-16页 |
| 1.3 丝/苏氨酸蛋白磷酸酶 | 第16-18页 |
| 1.3.1 PP1/2A蛋白磷酸酶 | 第17页 |
| 1.3.2 PP2B蛋白磷酸酶 | 第17-18页 |
| 1.3.3 PP2C蛋白磷酸酶 | 第18页 |
| 1.4 MLP类蛋白 | 第18-19页 |
| 1.5 本研究的主要内容 | 第19-21页 |
| 1.5.1 研究内容 | 第19-20页 |
| 1.5.2 技术路线 | 第20-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-31页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-22页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第21页 |
| 2.1.2 数据库与生物软件 | 第21页 |
| 2.1.3 菌株和质粒 | 第21页 |
| 2.1.4 常用试剂及酶类 | 第21页 |
| 2.1.5 培养基 | 第21-22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-26页 |
| 2.2.1 提取大豆总RNA及反转录 | 第22-23页 |
| 2.2.2 PCR扩增GmMMK2、GmPP1、GmMLP基因 | 第23-24页 |
| 2.2.3 目的片段的电泳回收 | 第24-25页 |
| 2.2.4 目的片段连接克隆载体 | 第25页 |
| 2.2.5 大肠杆菌的转化 | 第25页 |
| 2.2.6 质粒的提取 | 第25页 |
| 2.2.7 质粒的PCR鉴定 | 第25页 |
| 2.2.8 质粒的限制性内切酶消化反应 | 第25-26页 |
| 2.2.9 大豆MAPK类基因家族序列的查找 | 第26页 |
| 2.2.10 大豆BetⅥ基因家族序列的查找 | 第26页 |
| 2.2.11 大豆MAPK、蛋白磷酸酶和BetⅥ基因家族的分析 | 第26页 |
| 2.2.12 GmMMK2、GmPP1、GmMLP启动子的分析 | 第26页 |
| 2.3 GmMMK2、GmPP1、GmMLP在非生物胁迫下的表达 | 第26-28页 |
| 2.3.1 非生物胁迫处理大豆 | 第26-27页 |
| 2.3.2 大豆叶片RNA的提取以及cDNA的合成 | 第27页 |
| 2.3.3 GmMMK2、GmPP1、GmMLP在非生物胁迫下的qPCR分析 | 第27-28页 |
| 2.4 GmMMK2、GmPP1、GmMLP在不同组织中的表达模式 | 第28页 |
| 2.4.1 幼苗期大豆不同组织的取材 | 第28页 |
| 2.4.2 提取不同组织RNA及cDNA的合成 | 第28页 |
| 2.4.3 GmMMK2、GmPP1、GmMLP在大豆五个组织中的半定量RT-PCR分析 | 第28页 |
| 2.5 GmMMK2、GmPP1、GmMLP植物表达载体的构建 | 第28-29页 |
| 2.5.1 目的基因与植物表达载体的连接反应 | 第28-29页 |
| 2.5.2 冻融法转化根癌农杆菌 | 第29页 |
| 2.6 农杆菌介导的对烟草的遗传转化及植株的再生 | 第29-30页 |
| 2.6.1 受体材料的准备 | 第29页 |
| 2.6.2 农杆菌介导的遗传转化程序及植株再生 | 第29-30页 |
| 2.7 抗性植株的分子生物学检测及后代的生物学检测 | 第30-31页 |
| 2.7.1 植物基因组DNA提取及PCR检测 | 第30页 |
| 2.7.2 植物基因组RNA提取及RT-PCR检测 | 第30页 |
| 2.7.3 转基因烟草在高盐，干旱胁迫处理下的表型及分析 | 第30-31页 |
| 3 结果与分析 | 第31-53页 |
| 3.1 基因克隆及序列分析结果 | 第31-38页 |
| 3.1.1 GmMMK2、GmPP1、GmMLP基因克隆结果 | 第31-33页 |
| 3.1.2 序列分析及生物信息学分析 | 第33-38页 |
| 3.2 GmMMK2、GmPP1、GmMLP在非生物胁迫下的表达模式 | 第38-42页 |
| 3.2.1 GmMMK2在非生物胁迫下的表达模式 | 第38-39页 |
| 3.2.2 GmPP1在非生物胁迫下的表达模式 | 第39-41页 |
| 3.2.3 GmMLP在非生物胁迫下的表达模式 | 第41-42页 |
| 3.3 GmMMK2、GmPP1、GmMLP基因在大豆不同组织中的表达模式 | 第42-43页 |
| 3.4 GmMMK2、GmPP1、GmMLP基因对烟草的遗传转化 | 第43-44页 |
| 3.5 T0代抗性植株的分子生物学检测 | 第44-47页 |
| 3.5.1 GmMMK2转化烟草T0代抗性植株的PCR检测 | 第44-45页 |
| 3.5.2 GmMMK2转化烟草T0代抗性植株的RT-PCR检测 | 第45页 |
| 3.5.3 GmPP1转化烟草T0代抗性植株的PCR检测 | 第45-46页 |
| 3.5.4 GmPP1转化烟草T0代抗性植株的RT-PCR检测 | 第46页 |
| 3.5.5 GmMLP转化烟草T0代抗性植株的PCR检测 | 第46页 |
| 3.5.6 GmMLP转化烟草T0代抗性植株的RT-PCR检测 | 第46-47页 |
| 3.6 转基因株系T1代幼苗的筛选及分子生物学 | 第47-49页 |
| 3.6.1 抗性植株萌发率的统计 | 第47页 |
| 3.6.2 GmMMK2转化烟草T1代抗性植株的PCR检测 | 第47-48页 |
| 3.6.3 GmPP1转化烟草T1代抗性植株的PCR检测 | 第48页 |
| 3.6.4 GmMLP转化烟草T1代抗性植株的PCR检测 | 第48-49页 |
| 3.7 转基因株系T1代表型分析 | 第49-53页 |
| 3.7.1 T1代幼苗期转基因株系的表型分析 | 第49-51页 |
| 3.7.2 T1代成苗期转基因株系的表型分析 | 第51-53页 |
| 4 讨论 | 第53-57页 |
| 4.1 目的基因的选择 | 第53页 |
| 4.2 大豆MAPK类蛋白激酶响应非生物胁迫的机理 | 第53-54页 |
| 4.3 大豆蛋白磷酸酶响应非生物胁迫的机理 | 第54-55页 |
| 4.4 大豆MLP类蛋白响应非生物胁迫的机理 | 第55-57页 |
| 5 结论 | 第57-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-65页 |
| 附录 | 第65-70页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第70页 |
