中文摘要 | 第7-11页 |
英文摘要 | 第11-14页 |
前言 | 第15-17页 |
第一部分 制备稳定无Tn抗原暴露的人结直肠癌细胞株 | 第17-34页 |
一.材料和方法 | 第17-29页 |
1. 材料 | 第17-20页 |
1.1 细胞 | 第17页 |
1.2 主要试剂 | 第17-19页 |
1.3 主要器材、仪器 | 第19-20页 |
2. 细胞培养 | 第20-21页 |
2.1 细胞复苏 | 第20页 |
2.2 细胞传代 | 第20-21页 |
2.3 细胞计数 | 第21页 |
2.4 细胞冻存 | 第21页 |
3. 慢病毒感染异常O-型糖基化的人结肠癌细胞株LS174T(Tn+) | 第21-22页 |
3.1 瞬时感染Cosmc/control | 第21-22页 |
3.2 筛选稳定感染细胞株 | 第22页 |
4. Real-time PCR检测感染细胞的Cosmc转录水平 | 第22-24页 |
4.1 Trizol法常规提取总RNA | 第22-23页 |
4.2 cDNA第一链合成 | 第23-24页 |
4.3 Real-time PCR | 第24页 |
5. Western blot检测感染细胞的Cosmc蛋白水平 | 第24-28页 |
5.1 提取细胞内蛋白 | 第24-25页 |
5.2 BCA法测定蛋白总浓度 | 第25-26页 |
5.3 分离胶与浓缩胶的配置 | 第26-27页 |
5.4 十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺(SDS-PAGE)凝胶电泳 | 第27页 |
5.5 Western印迹法印迹 | 第27页 |
5.6 封闭和杂交 | 第27-28页 |
5.7 扫膜显影及记录 | 第28页 |
6. 流式细胞仪检测稳转细胞株表面Tn抗原表达变化 | 第28-29页 |
7. 统计方法 | 第29页 |
五.结果 | 第29-31页 |
六.讨论 | 第31-33页 |
七.小结 | 第33-34页 |
第二部分 粘蛋白型O-聚糖对结直肠癌细胞生物学特性的影响 | 第34-44页 |
一.材料和方法 | 第34-37页 |
1. 材料 | 第34页 |
1.1 细胞 | 第34页 |
1.2 主要试剂 | 第34页 |
1.3 主要器材、仪器 | 第34页 |
2. CCK8细胞增殖实验 | 第34-35页 |
3. PE Annexin V/7-AAD细胞凋亡实验 | 第35页 |
4. 细胞划痕实验 | 第35-36页 |
5. Transwell细胞迁移实验 | 第36页 |
6. Transwell细胞侵袭实验 | 第36-37页 |
7. 统计方法 | 第37页 |
二.结果 | 第37-42页 |
三.讨论 | 第42-43页 |
四.小结 | 第43-44页 |
全文讨论 | 第44-45页 |
全文小结 | 第45-46页 |
参考文献 | 第46-49页 |
文献综述 | 第49-58页 |
参考文献 | 第52-58页 |
附录 | 第58-60页 |
攻读学位期间发表论文情况 | 第60-61页 |
致谢 | 第61-62页 |
个人简历 | 第62页 |