| 摘要 | 第3-4页 |
| abstract | 第4页 |
| 缩略语表 | 第8-9页 |
| 1 引言 | 第9-16页 |
| 1.1 流感嗜血杆菌及其表面的纤溶酶原受体 | 第9-10页 |
| 1.2 Plg-Pm系统 | 第10-13页 |
| 1.2.1 Plg、Pm的组成及构象 | 第10-11页 |
| 1.2.2 Plg、Pm的功能 | 第11页 |
| 1.2.3 PA简介 | 第11-12页 |
| 1.2.4 纤溶酶原激活剂抑制剂(Plasminogen activate inhibitors,PAIs) | 第12-13页 |
| 1.2.5 Pm抑制剂 | 第13页 |
| 1.3 人血浆Lp(a) | 第13-15页 |
| 1.3.1 Lp(a)的结构 | 第13-14页 |
| 1.3.2 Lp(a)的功能作用 | 第14-15页 |
| 1.4 立题依据 | 第15页 |
| 1.5 研究内容 | 第15-16页 |
| 2 材料与方法 | 第16-27页 |
| 2.1 实验材料 | 第16-18页 |
| 2.1.1 仪器设备 | 第16页 |
| 2.1.2 化学试剂 | 第16-17页 |
| 2.1.3 质粒和菌株 | 第17页 |
| 2.1.4 培养基 | 第17页 |
| 2.1.5 化学贮存液 | 第17-18页 |
| 2.1.6 PCR引物 | 第18页 |
| 2.2 实验方法 | 第18-27页 |
| 2.2.1 NTHi ATCC49247基因组DNA的提取及鉴定 | 第18页 |
| 2.2.2 NTHi表面hpf、hpf△k基因的扩增 | 第18-19页 |
| 2.2.3 pGEX-6p-1质粒的提取 | 第19页 |
| 2.2.4 载体及片段的酶切、纯化及连接转化 | 第19-21页 |
| 2.2.5 阳性菌筛选 | 第21-22页 |
| 2.2.6 阳性菌落的扩大培养及菌种保存 | 第22页 |
| 2.2.7 基因序列的测定 | 第22页 |
| 2.2.8 工程菌的培养及诱导表达 | 第22-23页 |
| 2.2.9 表达产物的SDS-PAGE分析 | 第23页 |
| 2.2.10 重组蛋白rPF、rPF△k的纯化 | 第23-24页 |
| 2.2.11 目的蛋白标签的切除 | 第24页 |
| 2.2.12 标签切除效果的Western-blot检测 | 第24-25页 |
| 2.2.13 酶联免疫吸附试验(ELISA)检测rPF、rPF△k与Plg、Lp(a)的结合 | 第25-26页 |
| 2.2.14 ELISA检测EACA对rPF与Plg、Lp(a)结合的抑制 | 第26-27页 |
| 3 结果 | 第27-36页 |
| 3.1 NTHi ATCC49247基因组的提取 | 第27页 |
| 3.2 目的基因的扩增 | 第27-28页 |
| 3.2.1 hpf基因的扩增 | 第27-28页 |
| 3.2.2 hpf△k扩增结果 | 第28页 |
| 3.3 质粒的提取 | 第28页 |
| 3.4 质粒及目的片段酶切结果 | 第28-29页 |
| 3.5 菌落PCR结果 | 第29页 |
| 3.6 工程菌表达产物的SDS-PAGE分析 | 第29-31页 |
| 3.6.1 rPF小量表达结果 | 第29-30页 |
| 3.6.2 rPF△k小量表达结果 | 第30-31页 |
| 3.7 重组蛋白的纯化 | 第31-32页 |
| 3.7.1 rPF纯化结果 | 第31页 |
| 3.7.2 rPF△K纯化结果 | 第31-32页 |
| 3.8 目的蛋白标签的切除及纯化 | 第32-33页 |
| 3.8.1 rPF标签的切除 | 第32页 |
| 3.8.2 rPF△K标签的切除 | 第32-33页 |
| 3.9 标签切除效果的Western blot检测 | 第33页 |
| 3.10 ELISA检测rPF、rPF△k与Plg、Lp(a)的结合 | 第33-34页 |
| 3.11 亲和色谱层析检测rPF、rPF△k与Lp(a)的结合 | 第34页 |
| 3.12 ELISA检测EACA对rPF与Plg、Lp(a)结合的抑制 | 第34-35页 |
| 3.13 ELISA检测Lp(a)对rPF与Pig结合的抑制 | 第35-36页 |
| 4 讨论 | 第36-37页 |
| 5 结论 | 第37-38页 |
| 致谢 | 第38-39页 |
| 参考文献 | 第39-45页 |
| 作者简介 | 第45页 |
