| 摘要 | 第9-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 第一章 绪论 | 第12-25页 |
| 1. RNA干扰技术 | 第12-16页 |
| 1.1 RNA干扰的发现 | 第12页 |
| 1.2 小干扰RNA | 第12-13页 |
| 1.3 siRNA在应用过程中存在的问题 | 第13-15页 |
| 1.4 治疗性siRNA在癌症治疗中的应用 | 第15-16页 |
| 2. siRNA递送载体 | 第16-18页 |
| 2.1 siRNA的递送方法 | 第16-17页 |
| 2.2 壳聚糖在siRNA递送中的应用及不足 | 第17-18页 |
| 3. 细胞穿膜肽 | 第18-20页 |
| 4. 溶酶体逃逸 | 第20-22页 |
| 4.1 溶酶体阻碍siRNA发挥作用 | 第20-21页 |
| 4.2 组氨酸及溶酶体逃逸 | 第21-22页 |
| 5. 本课题的设计思路及主要研究内容 | 第22-25页 |
| 5.1 设计思路 | 第22-23页 |
| 5.2 主要研究内容及技术路线 | 第23-25页 |
| 第二章 H6R6-CS载体的合成、结构表征及其细胞毒性和缓冲能力评价 | 第25-35页 |
| 第一节 H6R6-CS载体的合成及结构表征 | 第25-29页 |
| 1. 仪器与试剂 | 第25页 |
| 2. 实验方法 | 第25-26页 |
| 2.1 载体的合成 | 第26页 |
| 2.2 不同H6R6取代度壳聚糖衍生物的合成 | 第26页 |
| 2.3 合成产物的核磁共振(~1H-NMR)分析 | 第26页 |
| 3. 结果与讨论 | 第26-29页 |
| 3.1 合成路线 | 第26-27页 |
| 3.2 ~1H-NMR结果分析 | 第27-29页 |
| 第二节 H6R6-CS载体的细胞毒性和缓冲能力评价 | 第29-35页 |
| 1. 仪器与试剂 | 第29页 |
| 1.1 仪器 | 第29页 |
| 1.2 试剂 | 第29页 |
| 2. 实验方法 | 第29-31页 |
| 2.1 细胞培养 | 第29-30页 |
| 2.2 MTT溶液的配制 | 第30页 |
| 2.3 载体H6R6-CS体外细胞毒性评价 | 第30-31页 |
| 2.3.1 体外4T1细胞毒性评价 | 第30页 |
| 2.3.2 体外MCF-7细胞毒性评价 | 第30页 |
| 2.3.3 体外A375细胞毒性评价 | 第30页 |
| 2.3.4 体外B16-F10细胞毒性评价 | 第30-31页 |
| 2.4 不同取代度H6R6-CS共聚物的缓冲能力评价 | 第31页 |
| 3. 实验结果与讨论 | 第31-34页 |
| 3.1 H6R6-CS共聚物的体外细胞毒性评价 | 第31-33页 |
| 3.2 不同取代度的H6R6-CS共聚物的缓冲能力评价 | 第33-34页 |
| 4. 本章小结 | 第34-35页 |
| 第三章 H6R6-CS/siRNA纳米粒的制备及理化性质研究 | 第35-41页 |
| 1. 仪器与试剂 | 第35-36页 |
| 1.1 仪器 | 第35页 |
| 1.2 试剂 | 第35-36页 |
| 2. 实验方法 | 第36-37页 |
| 2.1 工作溶液的配制 | 第36页 |
| 2.1.1 H6R6-CS载体溶液的配制 | 第36页 |
| 2.1.2 siRNA溶液的配制 | 第36页 |
| 2.2 H6R6-CS/siRNA纳米粒的制备 | 第36页 |
| 2.3 H6R6-CS/siRNA纳米粒的粒径及电位的测定 | 第36页 |
| 2.4 H6R6-CS/siRNA纳米粒的形态研究 | 第36页 |
| 2.5 凝胶阻滞实验 | 第36-37页 |
| 2.6 H6R6-CS/siRNA纳米粒胶体稳定性考察 | 第37页 |
| 3. 实验结果与讨论 | 第37-40页 |
| 3.1 纳米粒的最佳制备工艺考察 | 第37-38页 |
| 3.2 最佳制备工艺条件下的H6R6-CS/siRNA纳米粒粒径及Zeta电位 | 第38页 |
| 3.3 凝胶阻滞实验结果 | 第38-39页 |
| 3.4 电镜观察纳米粒的外观 | 第39页 |
| 3.5 H6R6-CS/siRNA纳米粒胶体稳定性 | 第39-40页 |
| 4. 本章小结 | 第40-41页 |
| 第四章 纳米粒沉默内源性基因的影响因素考察及体外细胞摄取能力考察 | 第41-51页 |
| 第一节 H6R6-CS/siRNA~(Luc)纳米粒沉默内源性基因的影响因素考察 | 第41-45页 |
| 1. 仪器与试剂 | 第41页 |
| 2. 实验方法 | 第41-43页 |
| 2.1 工作液的配制 | 第41页 |
| 2.1.1 细胞裂解液的配制 | 第41页 |
| 2.1.2 荧光素酶底物溶液的配制 | 第41页 |
| 2.2 4T1~(Luc)细胞培养 | 第41-42页 |
| 2.3 不同siRNA ~(Luc)剂量对抑制内源性Luciferase基因表达的影响 | 第42页 |
| 2.4 pH值对抑制内源性Luciferase基因表达的影响 | 第42页 |
| 2.5 不同H6R6取代度对抑制内源性Luciferase基因表达的影响 | 第42页 |
| 2.6 FBS对抑制内源性Luciferase基因表达的影响 | 第42-43页 |
| 2.7 H6R6-CS/siRNA ~(Luc)纳米粒对Luciferase基因表达的抑制情况 | 第43页 |
| 3. 实验结果与讨论 | 第43-45页 |
| 3.1 siRNA转染剂量对Luciferase基因沉默效率的影响 | 第43页 |
| 3.2 介质pH对Luciferase基因沉默效率的影响 | 第43-44页 |
| 3.3 CS与H6R6不同摩尔比对Luciferase基因沉默效率的影响 | 第44页 |
| 3.4 FBS对Luciferase基因沉默效率的影响 | 第44-45页 |
| 3.5 不同纳米粒对Luciferase基因沉默效率的影响 | 第45页 |
| 第二节 H6R6-CS/siRNAFAM纳米粒体外摄取能力及溶酶体逃逸能力考察 | 第45-51页 |
| 1. 仪器与试剂 | 第46页 |
| 2. 实验方法 | 第46-47页 |
| 2.1 流式细胞术观察H6R6-CS/siRNAFAM纳米粒体外摄取情况 | 第46页 |
| 2.2 激光共聚焦显微镜观察H6R6-CS/siRNA~(FAM)纳米粒体外摄取情况 | 第46页 |
| 2.3 激光共聚焦显微镜观察H6R6-CS/siRNA~(FAM)纳米粒溶酶体逃逸情况 | 第46-47页 |
| 3. 实验结果与讨论 | 第47-50页 |
| 3.1 H6R6-NP和CS-NP被肿瘤细胞摄取情况的比较 | 第47页 |
| 3.2 H6R6-NP和CS-NP被肿瘤细胞摄取情况的比较 | 第47-48页 |
| 3.3 比较H6R6-NP和CS-NP的溶酶体逃逸功能 | 第48-50页 |
| 4. 本章小结 | 第50-51页 |
| 第五章 H6R6-CS/siRNA纳米粒的体外抗肿瘤效果评价 | 第51-59页 |
| 1. 仪器与试剂 | 第51页 |
| 2. 实验方法 | 第51-53页 |
| 2.1 H6R6-CS/siRNA~(Sur)纳米粒抑制肿瘤细胞增殖能力研究 | 第51-52页 |
| 2.2 细胞死活实验 | 第52页 |
| 2.3 H6R6-CS/siRNA~(Sur)纳米粒抑制4T1肿瘤细胞迁移能力研究 | 第52页 |
| 2.4 Transwell实验 | 第52页 |
| 2.5 H6R6-CS/siRNA~(Sur)纳米粒诱导细胞凋亡能力研究 | 第52页 |
| 2.6 凋亡形态学考察 | 第52-53页 |
| 3. 实验结果与讨论 | 第53-58页 |
| 3.1 MTT实验 | 第53页 |
| 3.2 细胞死活实验 | 第53-54页 |
| 3.3 细胞划痕实验 | 第54-55页 |
| 3.4 Transwell实验 | 第55-56页 |
| 3.5 细胞凋亡实验 | 第56页 |
| 3.6 细胞凋亡形态学观察 | 第56-58页 |
| 4. 本章小结 | 第58-59页 |
| 第六章 H6R6-C S/siRNA~(Sur)纳米粒的体内抗肿瘤效果评价 | 第59-68页 |
| 1. 仪器、试剂及实验动物 | 第59页 |
| 2. 实验方法 | 第59-60页 |
| 2.1 工作液的配制 | 第59页 |
| 2.1.1 苦味酸溶液 | 第59页 |
| 2.1.2 中性甲醛的配制 | 第59页 |
| 2.2 H6R6-CS/siRNA~(Sur)纳米粒对乳腺癌的抑制性研究 | 第59-60页 |
| 2.3 H6R6-CS/siRNA~(Sur)纳米粒对乳腺癌转移的抑制性研究 | 第60页 |
| 2.4 H6R6-CS/siRNA~(Sur)纳米粒对荷瘤小鼠生存率的影响 | 第60页 |
| 3. 实验结果与讨论 | 第60-67页 |
| 3.1 原位乳腺癌模型的建立 | 第61页 |
| 3.2 H6R6-CS/siRNA~(Sur)纳米粒体内抗肿瘤效果 | 第61-62页 |
| 3.3 纳米粒对乳腺癌转移的抑制效果 | 第62-66页 |
| 3.4 纳米粒对荷瘤小鼠生存率的影响 | 第66-67页 |
| 4. 本章小结 | 第67-68页 |
| 第七章 H6R6-CS/siRNA~(BRAF)纳米粒制备及摄取情况考察 | 第68-77页 |
| 第一节 H6R6-CS/siRNA~(BRAF)纳米粒的制备及表征 | 第68-72页 |
| 1. 仪器与试剂 | 第68页 |
| 1.1 仪器 | 第68页 |
| 1.2 试剂 | 第68页 |
| 2. 实验方法 | 第68-69页 |
| 2.1 H6R6-CS/siRNA~(BRAF)纳米粒的制备 | 第68-69页 |
| 2.2 H6R6-CS/siRNA~(BRAF)纳米粒的粒径及Zeta电位的测定 | 第69页 |
| 2.3 H6R6-CS/siRNA~(BRAF)纳米粒的形态研究 | 第69页 |
| 2.4 凝胶阻滞实验 | 第69页 |
| 2.5 纳米粒胶体稳定性考察 | 第69页 |
| 3. 实验结果与讨论 | 第69-72页 |
| 3.1 纳米粒的粒径与形态 | 第69-71页 |
| 3.2 凝胶阻滞实验结果 | 第71页 |
| 3.3 纳米粒胶体稳定性考察结果 | 第71-72页 |
| 第二节 纳米粒被A375细胞摄取情况及溶酶体逃逸能力考察 | 第72-77页 |
| 1. 仪器与试剂 | 第72页 |
| 2. 实验方法 | 第72-73页 |
| 2.1 流式细胞术考察纳米粒被A375肿瘤细胞摄取情况 | 第72页 |
| 2.2 激光共聚焦显微镜观察纳米粒被A375肿瘤细胞摄取情况 | 第72页 |
| 2.3 溶酶体逃逸实验 | 第72-73页 |
| 3. 实验结果与讨论 | 第73-76页 |
| 3.1 纳米粒在A375肿瘤细胞中的摄取情况 | 第73-74页 |
| 3.2 激光共聚焦观察纳米粒被A375肿瘤细胞摄取情况 | 第74-75页 |
| 3.3 溶酶体逃逸实验结果 | 第75-76页 |
| 4. 本章小结 | 第76-77页 |
| 第八章 H6R6-CS/siRNA~(BRAF)纳米粒的体内、外药效学评价 | 第77-90页 |
| 第一节 H6R6-CS/siRNA~(BRAF)纳米粒对黑色素瘤细胞的体外抑制情况 | 第77-84页 |
| 1. 仪器与试剂 | 第77页 |
| 2. 实验方法 | 第77-78页 |
| 2.1 MTT实验 | 第77页 |
| 2.2 细胞死活实验 | 第77-78页 |
| 2.3 细胞划痕实验 | 第78页 |
| 2.4 H6R6-CS/siRNA~(Sur)纳米粒诱导A375细胞凋亡能力考察 | 第78页 |
| 2.5 A375细胞凋亡形态学考察 | 第78页 |
| 3. 实验结果与讨论 | 第78-84页 |
| 3.1 MTT实验结果 | 第78-79页 |
| 3.2 细胞死活实验结果 | 第79-80页 |
| 3.3 细胞划痕实验 | 第80-82页 |
| 3.4 细胞凋亡实验结果 | 第82页 |
| 3.5 细胞凋亡形态学观察 | 第82-84页 |
| 第二节 H6R6-CS/siRNA~(BRAF)纳米粒对A375细胞的体内抑制情况考察 | 第84-90页 |
| 1. 仪器、试剂及实验动物 | 第84页 |
| 2. 实验方法 | 第84页 |
| 2.1 黑色素瘤模型的建立 | 第84页 |
| 2.2 H6R6-CS/siRNA~(BRAF)纳米粒对黑色素瘤的抑制性研究 | 第84页 |
| 2.3 纳米粒安全性初步探讨 | 第84页 |
| 3. 实验结果与讨论 | 第84-89页 |
| 3.1 原位黑色素瘤模型的建立 | 第85页 |
| 3.2 H6R6-CS/siRNA~(BRAF)纳米粒体内抗肿瘤效果 | 第85-86页 |
| 3.3 纳米粒安全性评价结果 | 第86-89页 |
| 4. 本章小结 | 第89-90页 |
| 第九章 全文总结及展望 | 第90-93页 |
| 1. 主要研究结果 | 第90-91页 |
| 2. 研究工作的创新性和特色 | 第91页 |
| 3. 研究展望 | 第91-93页 |
| 参考文献 | 第93-107页 |
| 附录: 英文缩略语名词对照表 | 第107-108页 |
| 综述 | 第108-120页 |
| 参考文献 | 第115-120页 |
| 作者简介 | 第120-122页 |
| 致谢 | 第122-123页 |
