| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第1章 引言 | 第11-22页 |
| 1.1 鞘脂类的概述 | 第11-15页 |
| 1.1.1 鞘脂的分类 | 第11页 |
| 1.1.2 鞘脂类代谢 | 第11-12页 |
| 1.1.3 食品中的鞘脂类 | 第12-13页 |
| 1.1.4 鞘脂类吸收 | 第13页 |
| 1.1.5 鞘脂类：癌症治疗和预防的新策略 | 第13-14页 |
| 1.1.6 鞘脂类作为新膳食的营养和安全性 | 第14-15页 |
| 1.2 病毒介导的海洋球石藻新型鞘脂类的代谢 | 第15-17页 |
| 1.2.1 海洋球石藻及其特异性感染病毒 | 第15页 |
| 1.2.2 病毒介导的海洋球石藻新型鞘脂类代谢特征 | 第15-17页 |
| 1.3 基因功能鉴定的方法和技术 | 第17页 |
| 1.4 酿酒酵母基因工程研究现状 | 第17-19页 |
| 1.4.1 酿酒酵母载体 | 第18页 |
| 1.4.2 基因功能的研究 | 第18-19页 |
| 1.5 微藻的遗传转化系统 | 第19-20页 |
| 1.5.1 真核微藻基因工程载体元件 | 第19页 |
| 1.5.2 真核微藻的转化方法 | 第19-20页 |
| 1.5.3 微藻基因工程的应用前景 | 第20页 |
| 1.6 本论文研究的目的与意义 | 第20-22页 |
| 第2章 海洋球石藻病毒甾醇去饱和酶（SD）和脂肪酸去饱和酶（FAD）基因的克隆及生物信息学分析 | 第22-40页 |
| 2.1 材料与方法 | 第22-27页 |
| 2.1.1 实验病毒株、藻株 | 第22页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第22-23页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第23页 |
| 2.1.4 EhV99B1病毒颗粒的浓缩 | 第23页 |
| 2.1.5 CTAB法提取EhV病毒基因组 | 第23-24页 |
| 2.1.6 SD基因和FAD基因的克隆 | 第24-26页 |
| 2.1.7 SD和FAD的生物信息学分析 | 第26-27页 |
| 2.2 实验结果 | 第27-38页 |
| 2.2.1 SD和FAD基因的扩增 | 第27-28页 |
| 2.2.2 重组质粒菌株的筛选 | 第28-29页 |
| 2.2.3 重组质粒双酶切验证 | 第29页 |
| 2.2.4 SD和FAD的生物信息学分析 | 第29-38页 |
| 2.3 讨论 | 第38-39页 |
| 2.4 本章小结 | 第39-40页 |
| 第3章 甾醇去饱和酶（SD）和脂肪酸去饱和酶（FAD）基因在酿酒酵母系统中的表达 | 第40-55页 |
| 3.1 材料和方法 | 第40-47页 |
| 3.1.1 菌株、载体和培养基 | 第40-41页 |
| 3.1.2 主要试剂和仪器 | 第41-42页 |
| 3.1.3 主要溶液的配制 | 第42页 |
| 3.1.4 重组载体pMD19-T-SD和pMD19-T-FAD的构建 | 第42页 |
| 3.1.5 重组质粒YES/CT-SD和YES/CT-FAD的构建 | 第42-44页 |
| 3.1.6 酿酒酵母INVSc1的复苏与保藏 | 第44页 |
| 3.1.7 酿酒酵母INVSc1感受态细胞的制备 | 第44页 |
| 3.1.8 重组质粒在INVSc1中的转化和诱导表达 | 第44-46页 |
| 3.1.9 总脂的提取及薄层层析（TLC） | 第46-47页 |
| 3.2 结果与分析 | 第47-54页 |
| 3.2.1 SD、FAD基因的扩增及重组T载体的构建 | 第47页 |
| 3.2.2 酵母表达载体pYES2/CT-SD、pYES2/CT-FAD的构建 | 第47-49页 |
| 3.2.3 酿酒酵母的复苏 | 第49页 |
| 3.2.4 重组表达载体在酿酒酵母INVSc1的转化 | 第49-50页 |
| 3.2.5 酿酒酵母菌落PCR的筛选 | 第50-51页 |
| 3.2.6 重组蛋白SDS-PAGE的检测 | 第51-53页 |
| 3.2.7 总脂的TLC分析 | 第53-54页 |
| 3.3 小结 | 第54-55页 |
| 第4章 海洋球石藻（E.huxleyi）BOF92真核表达载体的优化 | 第55-76页 |
| 4.1 材料与方法 | 第55-68页 |
| 4.1.1 实验藻种 | 第55页 |
| 4.1.2 实验主要试剂 | 第55-56页 |
| 4.1.3 实验主要仪器 | 第56页 |
| 4.1.4 目的基因GFP、FCP-P、FCP-T、Bar的扩增 | 第56-58页 |
| 4.1.5 海洋球石藻真核表达载体的构建 | 第58-63页 |
| 4.1.6 海洋球石藻PEG介导的细胞转化及阳性转化子的筛选 | 第63-64页 |
| 4.1.7 PEG转化细胞中Bar基因在转录水平的检测 | 第64-66页 |
| 4.1.8 PEG转化细胞中Bar基因在翻译水平的检测 | 第66-68页 |
| 4.2 结果 | 第68-74页 |
| 4.2.1 GFP、FCP-P、FCP-T、Bar基因的T克隆及鉴定 | 第68-69页 |
| 4.2.2 重组表达载体psp73-FAP-Bar-FAT1-FBP-FAT2的构建与鉴定 | 第69-70页 |
| 4.2.3 重组表达载体psp73-FAP-GFP-FAT2的构建与鉴定 | 第70-71页 |
| 4.2.4 荧光显微镜观察结果 | 第71-72页 |
| 4.2.5 平板筛选 | 第72页 |
| 4.2.6 荧光定量检测Bar基因的绝对表达量 | 第72-73页 |
| 4.2.7 Western Blot分析Bar蛋白的表达 | 第73-74页 |
| 4.3 讨论 | 第74页 |
| 4.4 小结 | 第74-76页 |
| 第5章 结论与展望 | 第76-78页 |
| 5.1 本论文的主要结论 | 第76页 |
| 5.2 本论文的创新点 | 第76-77页 |
| 5.3 本论文的研究展望 | 第77-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-86页 |
| 附录 | 第86-89页 |
| 在学期间发表的学术论文 | 第89页 |
