| 中英文缩略表 | 第4-9页 |
| 中文摘要 | 第9-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 1 引言 | 第12-24页 |
| 1.1 植物中硝酸盐的作用 | 第12页 |
| 1.2 植物体内硝酸盐的吸收转运以及同化利用 | 第12-15页 |
| 1.2.1 植物体内硝酸盐转运蛋白 | 第12-14页 |
| 1.2.2 植物体内硝酸盐的同化 | 第14-15页 |
| 1.3 硝酸盐是一类信号分子 | 第15-17页 |
| 1.4 花青苷的生物合成 | 第17-21页 |
| 1.4.1 花青苷的合成途径 | 第18-19页 |
| 1.4.2 WBM蛋白复合体影响花青苷合成 | 第19-20页 |
| 1.4.3 外界环境影响花青苷合成 | 第20-21页 |
| 1.5 植物中LBD基因研究进展 | 第21-23页 |
| 1.5.1 LBD基因的结构和分类 | 第21页 |
| 1.5.2 LBD基因的功能 | 第21-23页 |
| 1.6 研究的目的和意义 | 第23-24页 |
| 2 材料和方法 | 第24-41页 |
| 2.1 材料 | 第24-26页 |
| 2.1.1 菌株 | 第24页 |
| 2.1.2 载体 | 第24页 |
| 2.1.3 酶、抗生素、各种化学药品及生化试剂 | 第24-25页 |
| 2.1.4 PCR引物 | 第25页 |
| 2.1.5 培养基 | 第25页 |
| 2.1.6 抗生素 | 第25页 |
| 2.1.7 溶液和缓冲液 | 第25-26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-41页 |
| 2.2.1 植物组织总RNA提取 | 第26-28页 |
| 2.2.1.1 CTAB发提取RNA | 第26页 |
| 2.2.1.2 试剂盒植物总RNA的提取和含量检测 | 第26-28页 |
| 2.2.2 RNA含量与纯度检测 | 第28页 |
| 2.2.3 植物RNA的纯化（除DNA）方法 | 第28页 |
| 2.2.4 反转录cDNA第一链的合成 | 第28-29页 |
| 2.2.5 cDNA模板的合成 | 第29-30页 |
| 2.2.6 基因克隆 | 第30页 |
| 2.2.7 PCR产物回收 | 第30-31页 |
| 2.2.8 大肠杆菌的转化 | 第31页 |
| 2.2.9 测序 | 第31页 |
| 2.2.10 质粒DNA的提取 | 第31-32页 |
| 2.2.11 双酶切反应 | 第32页 |
| 2.2.12 表达载体构建 | 第32-33页 |
| 2.2.12.1 构建植物过表达载体 | 第32-33页 |
| 2.2.12.2 构建酵母双杂载体 | 第33页 |
| 2.2.13 农杆菌LBA4404感受态细胞转化 | 第33-34页 |
| 2.2.14 植物材料的种植及转化 | 第34-35页 |
| 2.2.14.1 拟南芥的种植 | 第34页 |
| 2.2.14.2 拟南芥的转化 | 第34页 |
| 2.2.14.3 苹果愈伤组织的培养 | 第34-35页 |
| 2.2.14.4 苹果愈伤组织的转化 | 第35页 |
| 2.2.15 植物DNA的提取 | 第35-36页 |
| 2.2.16 酵母双杂交 | 第36-37页 |
| 2.2.16.1 试剂的配制 | 第36页 |
| 2.2.16.2 酵母双杂交步骤 | 第36-37页 |
| 2.2.17 花青苷测定 | 第37-38页 |
| 2.2.18 硝态氮含量的测定 | 第38-39页 |
| 2.2.18.1 试剂配制 | 第38页 |
| 2.2.18.2 测定方法 | 第38-39页 |
| 2.2.19 硝酸还原酶活性的测定-活体法 | 第39-41页 |
| 2.2.19.1 试剂配制 | 第39页 |
| 2.2.19.2 测定方法 | 第39-41页 |
| 3 结果与分析 | 第41-58页 |
| 3.1 MdLBD13基因的分子克隆和氨基酸序列分析 | 第41-43页 |
| 3.1.1 MdLBD13基因的分子克隆 | 第41页 |
| 3.1.2 MdLBD13与其他物种中LBD蛋白的系统进化分析和氨基酸序列分析 | 第41-43页 |
| 3.2 MdLBD13基因的表达分析 | 第43-44页 |
| 3.2.1 MdLBD13基因在不同苹果组织和器官中的表达 | 第43页 |
| 3.2.2 MdLBD13基因表达特异性响应硝酸盐 | 第43-44页 |
| 3.3 苹果愈伤组织中MdLBD13通过调节基因的表达抑制花青苷的积累 | 第44-49页 |
| 3.3.1 转基因苹果愈伤组织的筛选与鉴定 | 第44-45页 |
| 3.3.2 MdLBD13调控苹果果实着色 | 第45-47页 |
| 3.3.3 酵母双杂实验和结果分析 | 第47页 |
| 3.3.4 转基因苹果愈伤中花青苷合成相关基因的表达分析 | 第47-49页 |
| 3.4 MdLBD13抑制苹果愈伤组织中硝酸盐的吸收同化 | 第49-51页 |
| 3.4.1 转基因苹果愈伤组织中硝酸盐和硝酸还原酶活性的检测 | 第49页 |
| 3.4.2 苹果愈伤中qRT-PCR检测硝酸盐吸收转运相关基因的表达水平 | 第49-51页 |
| 3.5 异位表达MdLBD13转基因拟南芥影响花青苷和硝酸盐吸收的实验 | 第51-55页 |
| 3.5.1 过量表达MdLBD13的转基因拟南芥株系的筛选与鉴定 | 第51页 |
| 3.5.2 过量表达MdLBD13的转基因拟南芥株系的着色实验 | 第51-52页 |
| 3.5.3 转基因拟南芥中花青苷合成相关基因的表达分析 | 第52-53页 |
| 3.5.4 过量表达MdLBD13拟南芥中硝酸盐和硝酸还原酶活性的检测 | 第53-54页 |
| 3.5.5 过量表达MdLBD13的转基因拟南芥株系中硝酸盐吸收转运相关基因的检测 | 第54-55页 |
| 3.6 异位表达MdLBD13转基因拟南芥影响根系实验 | 第55-58页 |
| 3.6.1 过量表达MdLBD13的转基因和野生型拟南芥株系的处理 | 第55-56页 |
| 3.6.2 过量表达MdLBD13的转基因拟南芥株系影响侧根发育 | 第56-58页 |
| 4 讨论 | 第58-60页 |
| 5 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-78页 |
| 附录 | 第78-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
| 攻读学位期间发表和形成的学术论文 | 第84页 |
