| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第1章 文献综述 | 第14-37页 |
| 1.1 组织工程 | 第14-20页 |
| 1.1.1 组织工程的基本概念 | 第14-15页 |
| 1.1.2 组织工程的发展概要 | 第15-16页 |
| 1.1.3 种子细胞来源 | 第16-17页 |
| 1.1.3.1 分化成熟的体细胞 | 第16页 |
| 1.1.3.2 干细胞 | 第16-17页 |
| 1.1.4 生物支架材料 | 第17-20页 |
| 1.2 细胞与生物支架材料的相互作用 | 第20-25页 |
| 1.2.1 细胞微环境的概念 | 第20-21页 |
| 1.2.2 胞外基质组成、结构和功能 | 第21-23页 |
| 1.2.2.1 生物化学组成 | 第21-22页 |
| 1.2.2.2 物理结构特征 | 第22页 |
| 1.2.2.3 胞外基质与细胞间的作用 | 第22-23页 |
| 1.2.3 生物支架材料特性对细胞行为的影响 | 第23-25页 |
| 1.2.3.1 拓扑结构的影响 | 第23-24页 |
| 1.2.3.2 力学特性的影响 | 第24页 |
| 1.2.3.3 化学性质的影响 | 第24-25页 |
| 1.3 构筑生物支架材料化学微环境调控细胞行为 | 第25-35页 |
| 1.3.1 化学微环境的生物学本质 | 第25-26页 |
| 1.3.2 基于生物材料重塑细胞化学微环境 | 第26-27页 |
| 1.3.3 构建生物支架材料化学特性调控细胞行为的主要策略 | 第27-35页 |
| 1.3.3.1 基于细胞行为筛选生物材料 | 第27-28页 |
| 1.3.3.2 生物活性分子修饰基材表面 | 第28-30页 |
| 1.3.3.3 运用简单化学基团调节基材表面化学 | 第30-33页 |
| 1.3.3.4 表面化学图案化 | 第33-34页 |
| 1.3.3.5 构建表面的化学梯度 | 第34-35页 |
| 1.4 本研究的目的、意义和研究内容 | 第35-37页 |
| 第2章 PCL基材及其共聚化学基团对MSC_s粘附、增殖和分化的影响 | 第37-66页 |
| 2.1 引言 | 第37-39页 |
| 2.2 材料与方法 | 第39-45页 |
| 2.2.1 试剂和材料 | 第39页 |
| 2.2.2 PCL及其衍生聚合物的合成 | 第39-40页 |
| 2.2.3 PCL薄膜的制备 | 第40页 |
| 2.2.4 PCL薄膜表面特性的表征 | 第40-41页 |
| 2.2.4.1 表面元素分析(XPS) | 第40页 |
| 2.2.4.2 表面润湿性 | 第40页 |
| 2.2.4.3 表面蛋白的吸附 | 第40页 |
| 2.2.4.4 表面形貌和粗糙度 | 第40-41页 |
| 2.2.5 细胞培养实验 | 第41-42页 |
| 2.2.5.1 羊膜间充质干细胞的分离和培养 | 第41页 |
| 2.2.5.2 hAMSCs的粘附 | 第41页 |
| 2.2.5.3 hAMSCs的增殖 | 第41页 |
| 2.2.5.4 hAMSCs的成骨诱导分化 | 第41-42页 |
| 2.2.5.5 hAMSCs的成脂肪诱导分化 | 第42页 |
| 2.2.5.6 hAMSCs的成软骨诱导分化 | 第42页 |
| 2.2.6 细胞骨架和组织学染色 | 第42页 |
| 2.2.6.1 细胞骨架染色 | 第42页 |
| 2.2.6.2 茜素红染色 | 第42页 |
| 2.2.6.3 油红-O染色 | 第42页 |
| 2.2.6.4 番红-O染色 | 第42页 |
| 2.2.7 免疫荧光染色 | 第42-43页 |
| 2.2.8 生化检测方法 | 第43-44页 |
| 2.2.8.1 细胞量测定 | 第43页 |
| 2.2.8.2 钙含量测定 | 第43页 |
| 2.2.8.3 油脂含量测定 | 第43页 |
| 2.2.8.4 GAG含量和DNA含量测定 | 第43-44页 |
| 2.2.9 RT-PCR | 第44-45页 |
| 2.2.10 数据统计分析 | 第45页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第45-65页 |
| 2.3.1 PCL及其衍生物的制备 | 第45-47页 |
| 2.3.2 PCL薄膜表面的特征 | 第47-52页 |
| 2.3.2.1 表面润湿性和吸附总蛋白 | 第47-49页 |
| 2.3.2.2 表面元素构成 | 第49-50页 |
| 2.3.2.3 薄膜表面的形貌特征 | 第50-52页 |
| 2.3.3 hAMSCs在PCL薄膜材料表面的粘附 | 第52-58页 |
| 2.3.3.1 无血清培养条件下hAMSCs的粘附 | 第52-53页 |
| 2.3.3.2 有血清培养条件下hAMSCs的粘附 | 第53-54页 |
| 2.3.3.3 薄膜表面的细胞形态和铺展面积 | 第54-56页 |
| 2.3.3.4 薄膜表面的细胞粘附结构和粘附蛋白分泌 | 第56-58页 |
| 2.3.4 hAMSCs在PCL薄膜材料表面的增殖 | 第58-59页 |
| 2.3.5 hAMSCs在PCL薄膜材料表面的多向分化 | 第59-65页 |
| 2.3.5.1 hAMSCs的成骨分化 | 第59-61页 |
| 2.3.5.2 hAMSCs的成脂肪分化 | 第61-63页 |
| 2.3.5.3 hAMSCs的成软骨分化 | 第63-65页 |
| 2.4 本章小结 | 第65-66页 |
| 第3章 化学基团对不同类细胞成软骨特征的影响 | 第66-86页 |
| 3.1 前言 | 第66-68页 |
| 3.2 材料和方法 | 第68-71页 |
| 3.2.1 材料和试剂 | 第68页 |
| 3.2.2 兔软骨细胞的分离和培养 | 第68页 |
| 3.2.3 兔骨髓间充质干细胞的分离和培养 | 第68-69页 |
| 3.2.4 P1 rACs在PCL薄膜表面的培养 | 第69页 |
| 3.2.4.1 P1 rACs的粘附 | 第69页 |
| 3.2.4.2 P1 rACs的长时间培养 | 第69页 |
| 3.2.5 P3 rACs和P5 rACs在PCL薄膜表面的软骨诱导再分化 | 第69页 |
| 3.2.6 rBMSCs在PCL薄膜表面的培养 | 第69页 |
| 3.2.6.1 rBMSCs的多向分化能力检测 | 第69页 |
| 3.2.6.2 rBMSCs的粘附 | 第69页 |
| 3.2.6.3 P5 rBMSCs的增殖 | 第69页 |
| 3.2.6.4 rBMSCs的成软骨诱导分化 | 第69页 |
| 3.2.7 细胞骨架以及组织学染色 | 第69-70页 |
| 3.2.7.1 细胞骨架染色 | 第70页 |
| 3.2.7.2 番红-O染色 | 第70页 |
| 3.2.7.3 阿利新蓝染色 | 第70页 |
| 3.2.8 生化检测 | 第70页 |
| 3.2.8.1 细胞量测定 | 第70页 |
| 3.2.8.2 GAG含量和DNA含量测定 | 第70页 |
| 3.2.9 RT-PCR | 第70页 |
| 3.2.10 数据统计分析 | 第70-71页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第71-85页 |
| 3.3.1 细胞的分离、培养与鉴定 | 第71-73页 |
| 3.3.1.1 rACs的分离与传代培养 | 第71-72页 |
| 3.3.1.2 rBMSCs的分离与多向分化能力 | 第72-73页 |
| 3.3.2 细胞在PCL薄膜材料表面的粘附 | 第73-76页 |
| 3.3.2.1 P1 rACs | 第73-74页 |
| 3.3.2.2 rBMSCs | 第74-76页 |
| 3.3.3 细胞在PCL薄膜材料表面的增殖 | 第76-77页 |
| 3.3.3.1 P1 rACs | 第76页 |
| 3.3.3.2 rBMSCs | 第76-77页 |
| 3.3.4 P1 rACs在PCL薄膜材料表面的长期培养 | 第77-80页 |
| 3.3.5 P3和P5 rACs在PCL薄膜材料表面的再分化 | 第80-82页 |
| 3.3.6 rBMSCs在PCL薄膜材料表面的成软骨分化 | 第82-85页 |
| 3.4 本章小结 | 第85-86页 |
| 第4章 MSC_s对PHEMA表面胶原密度分布的生物学响应 | 第86-114页 |
| 4.1 引言 | 第86-87页 |
| 4.2 材料与方法 | 第87-93页 |
| 4.2.1 材料和试剂 | 第87页 |
| 4.2.2 PHEMA薄膜制备及其胶原修饰 | 第87-89页 |
| 4.2.3 制备具有胶原密度梯度的PHEMA表面 | 第89页 |
| 4.2.4 PHEMA膜表面特性的表征 | 第89页 |
| 4.2.4.1 表面形貌和粗糙度 | 第89页 |
| 4.2.4.2 润湿性 | 第89页 |
| 4.2.5 间充质干细胞和关节软骨细胞的分离和培养 | 第89-90页 |
| 4.2.5.1 hBMSCs的培养 | 第89-90页 |
| 4.2.5.2 oACs的分离和培养 | 第90页 |
| 4.2.6 hBMSCs在PHEMA薄膜表面的培养 | 第90-91页 |
| 4.2.6.1 hBMSCs的粘附 | 第90页 |
| 4.2.6.2 hBMSCs的增殖 | 第90页 |
| 4.2.6.3 hBMSCs的成骨诱导分化 | 第90页 |
| 4.2.6.4 hBMSCs的成脂肪诱导分化 | 第90页 |
| 4.2.6.5 hBMSCs的成软骨诱导分化 | 第90页 |
| 4.2.6.6 hBMSCs的成骨和成脂肪共诱导与成骨和成软骨共诱导分化 | 第90-91页 |
| 4.2.7 oACs在PHEMA薄膜表面的培养 | 第91页 |
| 4.2.8 细胞骨架及组织学染色 | 第91页 |
| 4.2.8.1 细胞骨架染色 | 第91页 |
| 4.2.8.2 ALP染色 | 第91页 |
| 4.2.8.3 油红-O染色 | 第91页 |
| 4.2.8.4 番红-O染色 | 第91页 |
| 4.2.8.5 阿利新蓝染色 | 第91页 |
| 4.2.9 生化检测 | 第91-92页 |
| 4.2.9.1 细胞量测定 | 第91页 |
| 4.2.9.2 细胞总蛋白含量的测定 | 第91-92页 |
| 4.2.9.3 ALP活性的测定 | 第92页 |
| 4.2.9.4 油脂含量的测定 | 第92页 |
| 4.2.9.5 GAG含量和DNA含量的测定 | 第92页 |
| 4.2.10 免疫荧光染色 | 第92页 |
| 4.2.11 半定量RT-PCR | 第92-93页 |
| 4.2.12 数据统计分析 | 第93页 |
| 4.3 结果和讨论 | 第93-113页 |
| 4.3.1 胶原修饰PHEMA薄膜的表面特性 | 第93-96页 |
| 4.3.1.1 表面的胶原结合 | 第93-94页 |
| 4.3.1.2 表面润湿性 | 第94-95页 |
| 4.3.1.3 表面形貌和粗糙度 | 第95-96页 |
| 4.3.2 hBMSCs在PHEMA薄膜材料表面的粘附 | 第96-98页 |
| 4.3.3 hBMSCs在PHEMA薄膜材料表面的增殖 | 第98-100页 |
| 4.3.4 hBMSCs在PHEMA薄膜材料表面的多向分化 | 第100-110页 |
| 4.3.4.1 hBMSCs的成骨分化 | 第100-103页 |
| 4.3.4.2 hBMSCs的成脂肪分化 | 第103-106页 |
| 4.3.4.3 hBMSCs的成软骨分化 | 第106-110页 |
| 4.3.5 P1 oACs在PHEMA薄膜材料表面的培养 | 第110-112页 |
| 4.3.6 hBMSCs对PHEMA薄膜材料表面胶原密度梯度的生物学响应及多向分化趋向 | 第112-113页 |
| 4.4 本章小结 | 第113-114页 |
| 第5章 全文总结和展望 | 第114-117页 |
| 参考文献 | 第117-128页 |
| 致谢 | 第128-129页 |
| 研究成果 | 第129页 |
