| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 缩略语表（Abbreviation） | 第12-14页 |
| 前言 | 第14页 |
| 1 研究问题的由来 | 第14-24页 |
| ·大环内酯类抗生素的研究进展 | 第14-16页 |
| ·第一代大环内酯 | 第14-15页 |
| ·第二代大环内酯 | 第15页 |
| ·第三代大环内酯 | 第15-16页 |
| ·大环内酯类抗生素作用机制 | 第16-17页 |
| ·mLSB耐药机制 | 第17-22页 |
| ·ErmB甲基化转移酶 | 第17-18页 |
| ·Erm T甲基化转移酶 | 第18-19页 |
| ·靶位点突变介导的MLSB耐药 | 第19-20页 |
| ·外排机制 | 第20-21页 |
| ·灭活酶 | 第21-22页 |
| ·核糖体的亲和纯化 | 第22-24页 |
| 2 研究目的和意义 | 第24-25页 |
| 3 材料与方法 | 第25-43页 |
| ·试验材料 | 第25-26页 |
| ·菌株 | 第25页 |
| ·质粒 | 第25页 |
| ·工具酶、主要试剂及试剂盒 | 第25-26页 |
| ·培养基与抗生素及其配制 | 第26页 |
| ·主要缓冲液与相关试剂及其配制 | 第26-31页 |
| ·感受态细胞制备相关试剂配制 | 第26页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）相关试剂配制 | 第26-27页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳相关溶液配制 | 第27页 |
| ·MBP-MS2蛋白表达纯化相关溶液配制 | 第27-28页 |
| ·S. gallolyticus subsp. pasteurianus 23S r RNA 亲和纯化相关溶液配制 | 第28页 |
| ·尿素-聚丙烯酰胺凝胶电泳（urea-PAGE）相关溶液配制 | 第28页 |
| ·Erm甲基化酶表达纯化相关溶液配制 | 第28-29页 |
| ·甲基化测试相关试剂 | 第29页 |
| ·引物 | 第29-31页 |
| ·试验方法 | 第31-43页 |
| ·质粒的转化提取及鉴定 | 第31-33页 |
| ·TSS方法制备感受细胞 | 第31页 |
| ·大肠杆菌电转感受态细胞的制备及转化 | 第31-32页 |
| ·质粒的制备与鉴定 | 第32-33页 |
| ·限制性内切酶切鉴定 | 第33页 |
| ·酶切产物的电泳检测 | 第33页 |
| ·MS2系统亲和纯化S. gallolyticus subsp. pasteurianus 23S rRNA | 第33-37页 |
| ·RNA structure软件预测 23S rRNA二级结构 | 第33页 |
| ·MS2亲和标记 23S rRNA | 第33-34页 |
| ·构建 23S rRNA的表达载体pLK23SMS2 | 第34-35页 |
| ·限制性内切酶酶切反应 | 第35页 |
| ·PCR产物或酶切产物的电泳检测 | 第35页 |
| ·酶切产物回收与纯化 | 第35-36页 |
| ·外源DNA片段与质粒载体的连接反应 | 第36-37页 |
| ·连接产物的转化 | 第37页 |
| ·MBP-MS2蛋白的表达纯化 | 第37-39页 |
| ·细菌培养 | 第37页 |
| ·裂解菌体 | 第37-38页 |
| ·柱层析 | 第38页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第38页 |
| ·蛋白浓缩 | 第38页 |
| ·Bradford法蛋白浓度测定 | 第38-39页 |
| ·S. gallolyticus subsp. pasteurianus 23S rRNA的亲和纯化 | 第39-40页 |
| ·细菌培养 | 第39页 |
| ·制备核糖体 | 第39页 |
| ·S. gallolyticus subsp. pasteurianus 23S rRNA的亲和纯化 | 第39-40页 |
| ·尿素-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第40页 |
| ·His-Erm蛋白的表达纯化 | 第40-41页 |
| ·细菌培养 | 第40页 |
| ·裂解菌体 | 第40页 |
| ·柱层析 | 第40页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第40-41页 |
| ·蛋白浓缩 | 第41页 |
| ·Bradford法蛋白浓度测定 | 第41页 |
| ·突变型质粒的构建 | 第41页 |
| ·构建S. gallolyticus subsp. pasteurianus 23S rRNA突变体 | 第41页 |
| ·构建ErmB突变体 | 第41页 |
| ·酶促动力学试验 | 第41页 |
| ·生物信息学方法分析 | 第41-43页 |
| ·Erm甲基化酶氨基序列比对 | 第41-42页 |
| ·Erm甲基化酶系统发育树 | 第42-43页 |
| 4 结果与分析 | 第43-57页 |
| ·质粒的提取及鉴定 | 第43-45页 |
| ·质粒pcI857转化与酶切鉴定 | 第43页 |
| ·质粒pLK35转化提取 | 第43-44页 |
| ·质粒pMBP-MS2-His转化提取 | 第44-45页 |
| ·MS2系统亲和纯化S. gallolyticus subsp. pasteurianus 23S rRNA | 第45-49页 |
| ·RNA structure软件预测 23S rRNA二级结构 | 第45页 |
| ·MS2亲和标记 23S rRNA | 第45-46页 |
| ·23S rRNA表达载体pLK23SMS2的构建 | 第46-48页 |
| ·MBP-MS2融合蛋白的分离纯化 | 第48页 |
| ·解没食子酸链球菌巴氏亚种 23S rRNA的分离纯化 | 第48-49页 |
| ·ErmB、ErmT甲基化酶的亲和纯化及甲基化活性测试 | 第49-57页 |
| ·ErmB、ErmT蛋白的表达纯化 | 第49-50页 |
| ·ErmB、ErmT甲基化活性测试 | 第50-51页 |
| ·ErmB、ErmT甲基化位点的鉴定 | 第51-52页 |
| ·ErmB突变体构建 | 第52-53页 |
| ·ErmB突变体活性检测 | 第53-54页 |
| ·ErmT、ErmB及ErmB突变体活性分析 | 第54-55页 |
| ·生物信息学方法分析Erm甲基化酶 | 第55-57页 |
| 5 讨论与结论 | 第57-60页 |
| ·讨论 | 第57-59页 |
| ·ErmB、ErmT甲基化活性 | 第57-58页 |
| ·ErmB、ErmT甲基化作用位点 | 第58页 |
| ·ErmB突变体的甲基化活性 | 第58-59页 |
| ·结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
