| 致谢 | 第1-9页 |
| 摘要 | 第9-10页 |
| 符号说明 | 第10-11页 |
| 文献综述 | 第11-20页 |
| 1 猪流感病毒的基因结构 | 第11-12页 |
| 2 猪流感病毒所编码的蛋白的功能 | 第12-15页 |
| ·血凝素 | 第12-13页 |
| ·神经氨酸酶 | 第13页 |
| ·核蛋白 | 第13-14页 |
| ·基质蛋白 | 第14页 |
| ·聚合酶 | 第14-15页 |
| ·非结构蛋白 | 第15页 |
| 3 猪流感病毒的检测方法的研究进展 | 第15-20页 |
| ·猪流感病毒感染的临床诊断 | 第15页 |
| ·流感病毒感染病理学诊断 | 第15-16页 |
| ·猪流感病毒实验室检测 | 第16-18页 |
| ·血凝与血凝抑制 | 第16页 |
| ·病毒的分离培养 | 第16页 |
| ·神经氨酸酶抑制试验 | 第16页 |
| ·酶联免疫吸附试验(ELISA) | 第16-17页 |
| ·琼脂扩散(AGP)试验 | 第17页 |
| ·RT-PCR 试验 | 第17页 |
| ·Real-Time PCR 试验 | 第17页 |
| ·依赖核酸序列的扩增法 | 第17-18页 |
| ·逆转录环介导等温扩增技术（RT-LAMP） | 第18页 |
| ·基因芯片检测技术 | 第18页 |
| ·单克隆抗体技术在猪流感检测中的优点及应用 | 第18-20页 |
| 引言 | 第20-21页 |
| 试验一 猪流感病毒 HA、NA、NP、M1、M2、NS1、NS2、PA、PB1、PB2 基因的原核表达 | 第21-49页 |
| 1 材料和方法 | 第21-31页 |
| ·材料 | 第21-24页 |
| ·病毒、质粒、载体及菌种 | 第21页 |
| ·主要试剂 | 第21页 |
| ·主要仪器 | 第21页 |
| ·试剂的配制 | 第21-24页 |
| ·大肠杆菌转化用溶液 | 第21-22页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳试剂的配制 | 第22页 |
| ·SDS-PAGE 所用试剂的配制 | 第22-23页 |
| ·Western blot 试剂的配制 | 第23-24页 |
| ·包涵体纯化试剂的配制 | 第24页 |
| ·试验方法 | 第24-31页 |
| ·猪流感病毒 HA、NA、NP、M1、M2、NS1、NS2、PA、PB1、PB2 基因的克隆 | 第24-27页 |
| ·猪流感病毒 HA、NA、NP、M1、M2、NS1、NS2、PA、PB1、PB2 基因的引物设计与合成 | 第24-25页 |
| ·H3N2 HA、NA、NP、M1、M2、NS1、NS2、PA、PB1、PB2 目的基因的扩增 | 第25-26页 |
| ·PCR 产物的回收与纯化 | 第26-27页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第27-30页 |
| ·PCR 产物、pET-28a(+)和 pET-32a(+)载体的酶切回收 | 第27页 |
| ·目的基因与表达载体的连接 | 第27页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第27-28页 |
| ·连接产物的转化 | 第28页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第28-30页 |
| ·菌液 PCR 鉴定 | 第28-29页 |
| ·高纯度重组质粒的提取 | 第29页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第29-30页 |
| ·重组质粒的测序鉴定 | 第30页 |
| ·HA、NA、NP、M1、M2、NS1、NS2、PA、PB1、PB2 基因的原核表达及鉴定 | 第30-31页 |
| ·诱导表达融合蛋白 | 第30页 |
| ·融合蛋白的可溶性分析 | 第30页 |
| ·融合蛋白的诱导表达条件的优化 | 第30-31页 |
| ·融合蛋白的大量表达、纯化和复性 | 第31页 |
| ·Western blot 鉴定 | 第31页 |
| 2 结果与分析 | 第31-47页 |
| ·HA、NA、NP、M1、M2、NS1、NS2、PA、PB1 和 PB2 基因的扩增 | 第31-32页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第32-33页 |
| ·重组质粒的原核表达与鉴定 | 第33-47页 |
| ·融合蛋白的诱导表达 | 第33-35页 |
| ·融合蛋白的可溶性分析 | 第35-36页 |
| ·重组菌诱导表达的条件优化 | 第36-45页 |
| ·最佳 IPTG 诱导浓度的确定 | 第36-41页 |
| ·最佳诱导时间的确定 | 第41-45页 |
| ·Western blot 鉴定 | 第45-47页 |
| 3 结论与讨论 | 第47-49页 |
| 试验二 抗 HA 蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立 | 第49-59页 |
| 1 材料与方法 | 第49-54页 |
| ·材料 | 第49-50页 |
| ·毒株和细胞 | 第49页 |
| ·试验动物 | 第49页 |
| ·蛋白 | 第49页 |
| ·主要试剂及试剂盒 | 第49页 |
| ·主要仪器 | 第49页 |
| ·主要试剂的配制 | 第49-50页 |
| ·试验方法 | 第50-54页 |
| ·病毒抗原制备 | 第50页 |
| ·动物免疫 | 第50页 |
| ·小白鼠抗体水平的检测 | 第50-51页 |
| ·阳性杂交瘤细胞株的建立 | 第51-53页 |
| ·NS0 细胞的复苏与培养 | 第51页 |
| ·饲养细胞的制备 | 第51页 |
| ·免疫小白鼠脾细胞的获取 | 第51-52页 |
| ·细胞融合 | 第52页 |
| ·杂交瘤细胞的培养 | 第52页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的筛选 | 第52-53页 |
| ·单克隆抗体的制备、纯化和效价测定 | 第53页 |
| ·杂交瘤细胞的培养 | 第53页 |
| ·腹水单抗的纯化 | 第53页 |
| ·单克隆抗体亚类的鉴定 | 第53-54页 |
| ·间接免疫荧光法检测单克隆抗体 | 第54页 |
| ·单抗的交叉反应性鉴定 | 第54页 |
| ·单抗的特异性鉴定 | 第54页 |
| 2 结果与分析 | 第54-57页 |
| ·病毒抗原的制备 | 第54-55页 |
| ·分泌抗 H3N2 单克隆抗体的杂交瘤细胞株的建立 | 第55-56页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的命名 | 第55页 |
| ·单抗效价的测定 | 第55-56页 |
| ·单克隆抗体亚类鉴定 | 第56页 |
| ·间接免疫荧光试验 | 第56页 |
| ·单抗的交叉反应性鉴定 | 第56-57页 |
| ·单抗的特异性鉴定 | 第57页 |
| 3 结论与讨论 | 第57-59页 |
| 全文总结 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-65页 |
| Abstract | 第65-66页 |
