| 致谢 | 第1-10页 |
| 摘要 | 第10-12页 |
| 文献综述 | 第12-21页 |
| 1 猪流行性腹泻病（PED）的流行病学特征 | 第12-14页 |
| ·临床流行病学 | 第12-13页 |
| ·分子流行病学 | 第13-14页 |
| 2 猪流行性腹泻病毒(PEDV)病原学 | 第14-16页 |
| ·PEDV 的基因组结构与特点 | 第14页 |
| ·S 蛋白结构与功能 | 第14-15页 |
| ·M 蛋白结构与功能 | 第15页 |
| ·N 蛋白结构与功能 | 第15-16页 |
| ·E 蛋白结构与功能 | 第16页 |
| ·ORF3 蛋白结构与功能 | 第16页 |
| ·酶多聚蛋白 lab（pplab）结构与功能 | 第16页 |
| 3 猪流行性腹泻病毒感染特性 | 第16-18页 |
| ·病毒感染的分子生物学特性 | 第16-17页 |
| ·病毒的细胞培养特性 | 第17-18页 |
| 4 猪流行性腹泻病的诊断技术 | 第18-19页 |
| ·常规检测技术 | 第18-19页 |
| ·免疫电镜法(IEM) | 第18页 |
| ·免疫荧光法(IF) | 第18页 |
| ·间接血凝试验(IHA) | 第18页 |
| ·ELISA 法 | 第18-19页 |
| ·RT-PCR 法 | 第19页 |
| ·常规 RT-PCR | 第19页 |
| ·TaqMan 荧光定量 RT-PCR | 第19页 |
| 5 预防与控制措施 | 第19-21页 |
| ·PED 疫苗的研究 | 第19-20页 |
| ·灭活疫苗 | 第19页 |
| ·细胞弱毒苗 | 第19-20页 |
| ·多价联合疫苗 | 第20页 |
| ·TGEV 与 PEDV 二联疫苗 | 第20页 |
| ·PEDV、TGEV、RV 三联疫苗 | 第20页 |
| ·综合防控措施 | 第20-21页 |
| 引言 | 第21-22页 |
| 试验一 河南省 PEDV 毒株 S1 基因遗传变异分析 | 第22-41页 |
| 1 材料与方法 | 第22-29页 |
| ·材料 | 第22-25页 |
| ·样品和毒株 | 第22-24页 |
| ·主要试剂 | 第24页 |
| ·常用溶液及其配制 | 第24-25页 |
| ·主要仪器设备 | 第25页 |
| ·方法 | 第25-29页 |
| ·S1 基因 RT-PCR 扩增及克隆、鉴定 | 第25-28页 |
| ·引物的设计与合成 | 第25页 |
| ·PEDV 核酸的提取 | 第25页 |
| ·反转录 | 第25-26页 |
| ·RT-PCR 扩增 | 第26页 |
| ·PCR 产物纯化 | 第26-27页 |
| ·纯化产物与 pGEM-T Easy 载体的连接 | 第27页 |
| ·连接产物的转化与鉴定 | 第27-28页 |
| ·S1 基因序列测定及拼接 | 第28页 |
| ·S1 基因核苷酸序列遗传进化分析 | 第28页 |
| ·S1 基因推导的氨基酸的遗传进化分析 | 第28-29页 |
| 2 结果与分析 | 第29-39页 |
| ·S1 基因的 RT-PCR 扩增结果 | 第29页 |
| ·S1 基因酶切鉴定结果 | 第29-30页 |
| ·S1 基因序列测定及拼接 | 第30-31页 |
| ·S1 基因核苷酸序列遗传进化分析 | 第31-38页 |
| ·S1 基因推导的氨基酸序列的遗传进化分析 | 第38-39页 |
| 3 结论与讨论 | 第39-41页 |
| 试验二 猪流行性腹泻病毒细胞培养特性研究 | 第41-49页 |
| 1 材料和方法 | 第41-43页 |
| ·材料 | 第41-42页 |
| ·样品及细胞系 | 第41页 |
| ·主要试剂 | 第41页 |
| ·常用溶液及其配制 | 第41-42页 |
| ·主要仪器设备 | 第42页 |
| ·方法 | 第42-43页 |
| ·PEDV 在细胞中生长特性观察和检测 | 第42页 |
| ·阳性样品的来源及处理 | 第42页 |
| ·不同胰酶浓度对 PEDV 在 Vero、ST、PK-15 细胞培养中生长特性的影响 | 第42页 |
| ·不同接种时间对 PEDV 在 Vero、ST、PK-15 细胞培养中生长特性的影响 | 第42页 |
| ·不同接种剂量对 PEDV 在 Vero、ST、PK-15 细胞培养中生长特性的影响 | 第42-43页 |
| 2 结果与分析 | 第43-48页 |
| ·胰酶浓度对 PEDV 在 Vero 细胞培养中生长特性的影响结果 | 第43-44页 |
| ·接种时间对 PEDV 在 Vero 细胞培养中生长特性的影响结果 | 第44-45页 |
| ·接种剂量对 PEDV 在 Vero 细胞培养中生长特性的影响结果 | 第45-47页 |
| ·胰酶浓度对 PEDV 在 ST 细胞培养中生长特性的影响结果 | 第47页 |
| ·接种时间对 PEDV 在 ST 细胞培养中生长特性的影响结果 | 第47页 |
| ·接种剂量对 PEDV 在 ST 细胞培养中生长特性的影响结果 | 第47页 |
| ·胰酶浓度对 PEDV 在 PK-15 细胞培养中生长特性的影响结果 | 第47页 |
| ·接种时间对 PEDV 在 PK-15 细胞培养中生长特性的影响结果 | 第47页 |
| ·接种剂量对 PEDV 在 PK-15 细胞培养中生长特性的影响结果 | 第47-48页 |
| 3 结论与讨论 | 第48-49页 |
| 试验三 PEDV Taqman-MGB 探针荧光定量 RT-PCR 检测方法的建立 | 第49-60页 |
| 1 材料与方法 | 第49-53页 |
| ·材料 | 第49-50页 |
| ·样品 | 第49页 |
| ·主要试剂 | 第49页 |
| ·常用溶液及其配制 | 第49页 |
| ·主要仪器设备 | 第49-50页 |
| ·方法 | 第50-52页 |
| ·引物及探针的设计与合成 | 第50页 |
| ·PEDV FQ-PCR 标准品的制备 | 第50-52页 |
| ·PEDV 核酸的提取 | 第50页 |
| ·反转录获得 cDNA | 第50-51页 |
| ·RT-PCR 扩增 | 第51页 |
| ·回收 PCR 产物 | 第51页 |
| ·回收产物与 pQE30 载体的连接 | 第51页 |
| ·连接产物的转化及质粒提取 | 第51页 |
| ·重组质粒的特异性酶切鉴定与 PCR 鉴定 | 第51-52页 |
| ·重组质粒 DNA 浓度的测定 | 第52页 |
| ·FQ-PCR 方法反应条件的优化 | 第52页 |
| ·退火温度优化 | 第52页 |
| ·退火时间优化 | 第52页 |
| ·DNA 聚合酶浓度优化 | 第52页 |
| ·探针及引物浓度优化 | 第52页 |
| ·FQ-PCR 扩增反应 | 第52页 |
| ·标准曲线的建立 | 第52-53页 |
| ·灵敏性试验 | 第53页 |
| ·敏感性试验 | 第53页 |
| ·特异性试验 | 第53页 |
| ·重复性试验 | 第53页 |
| ·符合性试验 | 第53页 |
| 2 结果与分析 | 第53-58页 |
| ·重组质粒鉴定结果 | 第53-54页 |
| ·质粒 DNA 浓度的测定结果 | 第54页 |
| ·FQ-PCR 方法扩增曲线 | 第54-55页 |
| ·FQ-PCR 的标准曲线 | 第55页 |
| ·灵敏性试验结果 | 第55-56页 |
| ·敏感性试验结果 | 第56-57页 |
| ·特异性试验结果 | 第57页 |
| ·重复性试验结果 | 第57-58页 |
| ·符合性试验结果 | 第58页 |
| 3 结论与讨论 | 第58-60页 |
| 总结 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-65页 |
| Abstract | 第65-68页 |
| 个人简历 | 第68页 |
