| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-15页 |
| 1 杆状病毒的研究现状和背景 | 第11页 |
| ·杆状病毒的概述 | 第11页 |
| ·杆状病毒基因组当前的研究趋势 | 第11页 |
| 2 晚期表达因子的研究进展 | 第11-13页 |
| ·杆状病毒的调控基因 | 第11-12页 |
| ·参与病毒 DNA 复制的 lef 基因 | 第12页 |
| ·参与病毒基因转录的 lef 基因 | 第12-13页 |
| 3 BmNPV 的概述 | 第13页 |
| 4 家蚕杆状病毒表达系统（Baculovirus expression system, BVES）简介 | 第13-14页 |
| 5 BmNPV gp88 基因的研究现状 | 第14页 |
| 6 Red 重组系统的研究进展 | 第14-15页 |
| 第二章 实验方案设计 | 第15-17页 |
| 1 研究目的和意义 | 第15页 |
| 2 研究的主要内容 | 第15-16页 |
| 3 实验方案 | 第16-17页 |
| 第三章 gp88 的生物信息学分析 | 第17-22页 |
| 1 生物信息学工具 | 第17页 |
| 2 gp88 基因的生物信息学分析 | 第17-21页 |
| ·gp88 的基因序列分析 | 第17-18页 |
| ·GP88 的疏水性分析 | 第18-19页 |
| ·信号肽分析 | 第19页 |
| ·跨膜区分析 | 第19-20页 |
| ·二级结构预测 | 第20页 |
| ·GP88 的同源性分析 | 第20-21页 |
| 3 讨论 | 第21-22页 |
| 第四章 BmNPV 基因 gp88 缺失型和补回型 Bacmid 的构建 | 第22-35页 |
| 1 材料与试剂 | 第22页 |
| ·材料 | 第22页 |
| ·试剂 | 第22页 |
| ·试剂的配置 | 第22页 |
| 2 方法 | 第22-29页 |
| ·gp88 缺失型病毒的构建策略 | 第22-23页 |
| ·制备含有 pKD46 质粒的 DH10Bac 菌株的感受态细胞 | 第23-24页 |
| ·BmNPV gp88 打靶片段的制备 | 第24页 |
| ·gp88 缺失型病毒的获得 | 第24-25页 |
| ·gp88 基因缺失型 Bacmid 的 PCR 鉴定 | 第25-26页 |
| ·构建转移载体 pFastBacHTA-gp8816 | 第26-27页 |
| ·gp88 基因补回型病毒的构建 | 第27-29页 |
| ·gp88 基因补回型病毒的 PCR 鉴定 | 第29页 |
| 3 结果 | 第29-33页 |
| ·gp88 打靶片段的鉴定 | 第29-30页 |
| ·gp88 敲除型病毒的鉴定 | 第30-31页 |
| ·重组转移载体 pFastBacHTA-gp88 的鉴定 | 第31-32页 |
| ·gp88 基因补回型病毒 gp88-re-Bacmid 的鉴定 | 第32-33页 |
| 4 讨论 | 第33-35页 |
| 第五章 gp88 缺失对 BmNPV 基因组 DNA 复制的影响 | 第35-45页 |
| 1 材料与试剂 | 第35页 |
| ·材料 | 第35页 |
| ·试剂 | 第35页 |
| 2 方法 | 第35-39页 |
| ·细胞复苏、培养和冻存 | 第35-36页 |
| ·提取病毒 Bacmid | 第36页 |
| ·Bacmid 转染 BmN 细胞 | 第36页 |
| ·病毒滴度的测定 | 第36-37页 |
| ·病毒基因组的提取和消化 | 第37-38页 |
| ·荧光定量 PCR 分析 | 第38-39页 |
| 3 实验结果与分析 | 第39-44页 |
| ·三种病毒 Bacmid 转染细胞的情况 | 第39-40页 |
| ·病毒增殖曲线分析 | 第40-41页 |
| ·gp88 缺失对病毒复制的影响 | 第41-44页 |
| 4 讨论 | 第44-45页 |
| 第六章 gp88 缺失对 BmNPV 病毒早期、晚期和极晚期基因转录的影响 | 第45-59页 |
| 1 材料与试剂 | 第45页 |
| ·材料 | 第45页 |
| ·试剂 | 第45页 |
| 2 方法 | 第45-49页 |
| ·荧光定量 PCR 引物的设计 | 第45-46页 |
| ·脂质体介导三种病毒基因组 DNA 转染家蚕 BmN 细胞 | 第46-47页 |
| ·细胞总 RNA 的提取 | 第47页 |
| ·DNA 酶消化提取的总 RNA 中的 DNA | 第47-48页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第48页 |
| ·荧光定量 PCR | 第48-49页 |
| ·荧光定量 PCR 数据的分析 | 第49页 |
| 3 实验结果 | 第49-57页 |
| ·三种病毒早期基因 lef-3、ie-1 以及 dnapol 转录水平的 qPCR 分析 | 第49-54页 |
| ·三种病毒晚期基因 vp39 转录的 qPCR 分析 | 第54-55页 |
| ·病毒极晚期基因 p10 转录的 qPCR 分析 | 第55-57页 |
| 4 讨论 | 第57-59页 |
| 第七章 gp88 缺失对病毒各时期基因表达的影响 | 第59-63页 |
| 1 材料与试剂 | 第59页 |
| ·材料 | 第59页 |
| ·试剂配制 | 第59页 |
| 2 方法 | 第59-60页 |
| ·三种病毒转染 BmN 细胞 | 第59页 |
| ·Western Blot 检测蛋白表达 | 第59-60页 |
| 3 结果 | 第60-61页 |
| ·GP88 蛋白的鉴定 | 第60页 |
| ·Western Blot 检测病毒各期蛋白表达情况 | 第60-61页 |
| 4 讨论 | 第61-63页 |
| 第八章 透射电子显微镜观察 | 第63-68页 |
| 1 材料与试剂 | 第63-64页 |
| ·材料 | 第63页 |
| ·试剂 | 第63-64页 |
| 2 电子显微镜分析 | 第64-65页 |
| 3 结果 | 第65-67页 |
| 4 讨论 | 第67-68页 |
| 结论 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
