| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-10页 |
| 第一章 绪论 | 第10-25页 |
| ·抗叶酸剂类抗肿瘤药物研究进展 | 第10-11页 |
| ·胸苷酸合成酶(TS) | 第11-14页 |
| ·胸苷酸合成酶抑制剂分类 | 第11-14页 |
| ·叶酸类似物型抑制剂 | 第12-14页 |
| ·嘧啶类似物型抑制剂 | 第14页 |
| ·抗肿瘤药物的研究进展 | 第14-18页 |
| ·抗肿瘤药物的分类 | 第15-18页 |
| ·细胞毒类药物 | 第15-17页 |
| ·影响内分泌平衡的药物 | 第17-18页 |
| ·其他类抗肿瘤药物 | 第18页 |
| ·重组蛋白的纯化简介 | 第18-20页 |
| ·离子交换法 | 第18-19页 |
| ·硫酸铵沉淀法 | 第19页 |
| ·凝胶层析法 | 第19-20页 |
| ·亲和层析法 | 第20页 |
| ·蛋白质复性简介 | 第20-23页 |
| ·复性机制 | 第20-21页 |
| ·复性方法 | 第21-23页 |
| ·复性条件 | 第23页 |
| ·本课题研究意义及计划方案 | 第23-25页 |
| ·课题研究意义 | 第23-24页 |
| ·课题研究的计划方案 | 第24-25页 |
| 第二章 TS蛋白的高效表达与纯化 | 第25-41页 |
| ·实验材料 | 第25-28页 |
| ·主要实验仪器 | 第25-26页 |
| ·实验菌种及质粒 | 第26页 |
| ·主要试剂及配制 | 第26-28页 |
| ·实验方法 | 第28-31页 |
| ·大肠杆菌的诱导表达 | 第28页 |
| ·SDS-PAGE检测蛋白质分子大小 | 第28-29页 |
| ·Bradford法测蛋白质浓度 | 第29-30页 |
| ·表达形式分析 | 第30页 |
| ·单因素实验 | 第30页 |
| ·正交试验 | 第30页 |
| ·亲和色谱层析分离蛋白质 | 第30-31页 |
| ·实验结果与分析 | 第31-39页 |
| ·目的蛋白的诱导表达 | 第31-32页 |
| ·重组人TS表达形式的定位 | 第32-33页 |
| ·单因素实验 | 第33-36页 |
| ·温度 | 第33-34页 |
| ·IPTG浓度 | 第34-35页 |
| ·诱导时间 | 第35-36页 |
| ·正交试验优化表达条件 | 第36-39页 |
| ·亲和色谱分离纯化重组人TS | 第39页 |
| ·实验小结 | 第39-41页 |
| 第三章 胸苷酸合成酶辅因子mTHF的合成 | 第41-49页 |
| ·实验材料 | 第42页 |
| ·实验仪器 | 第42页 |
| ·实验试剂 | 第42页 |
| ·实验方法 | 第42-43页 |
| ·四氢叶酸的合成 | 第42-43页 |
| ·四氢叶酸的鉴定及含量测定 | 第43页 |
| ·5,10-亚甲基四氢叶酸的合成 | 第43页 |
| ·5,10-亚甲基四氢叶酸的纯化 | 第43页 |
| ·实验结果与分析 | 第43-48页 |
| ·四氢叶酸合成实验现象 | 第43-44页 |
| ·四氢叶酸鉴定实验现象 | 第44页 |
| ·四氢叶酸反应条件的优化 | 第44-45页 |
| ·5,10-亚甲基四氢叶酸的鉴别 | 第45-46页 |
| ·实验注意事项 | 第46-48页 |
| ·实验小结 | 第48-49页 |
| 第四章 胸苷酸合成酶抑制剂重要中间体的合成 | 第49-61页 |
| ·中间体化合物的合成分析 | 第49-51页 |
| ·实验仪器和试剂 | 第51-52页 |
| ·仪器 | 第51-52页 |
| ·试剂 | 第52页 |
| ·实验部分 | 第52-55页 |
| ·5-羟甲基尿嘧啶(1)的合成 | 第52-53页 |
| ·5-氯甲基尿嘧啶(2)的合成 | 第53页 |
| ·异硫脲盐(3)的合成 | 第53页 |
| ·5-巯甲基尿嘧啶(4)的合成 | 第53页 |
| ·异亚硝基乙酰间甲苯胺(5)的合成 | 第53-54页 |
| ·4-甲基靛红(6)的合成 | 第54页 |
| ·2-氨基-6-甲基苯甲酸(7)的合成 | 第54页 |
| ·3,4-二氢-2,5-二甲基-4-氧代喹唑啉(8)的合成 | 第54-55页 |
| ·5-溴甲基-3,4-二氢-2-甲基-4-氧代喹唑啉(9)的合成 | 第55页 |
| ·结果与讨论 | 第55-60页 |
| ·5-羟甲基尿嘧啶合成 | 第55-56页 |
| ·5-氯甲基尿嘧啶的的合成 | 第56页 |
| ·异硫脲盐的合成 | 第56页 |
| ·异亚硝基乙酰间甲基苯胺的合成 | 第56-57页 |
| ·4-甲基靛红的合成 | 第57-58页 |
| ·2-氨基-6-甲基苯甲酸的合成 | 第58-59页 |
| ·3,4-二氢-2,5-二甲基-4-氧代喹唑啉的合成 | 第59页 |
| ·5-溴甲基-3,4-二氢-2-甲基-4-氧代喹唑啉的合成 | 第59-60页 |
| ·本章小结 | 第60-61页 |
| 第五章 TS蛋白复性及抑制剂活性测定 | 第61-68页 |
| ·实验材料 | 第61-62页 |
| ·实验仪器 | 第61-62页 |
| ·实验试剂 | 第62页 |
| ·试剂配制 | 第62页 |
| ·实验方法 | 第62-64页 |
| ·透析袋的预处理 | 第62页 |
| ·复性蛋白的预处理 | 第62-63页 |
| ·变性蛋白的透析复性 | 第63页 |
| ·蛋白复性得率 | 第63页 |
| ·酶活力及比活力测定 | 第63页 |
| ·抑制剂IC_(50)的测定 | 第63-64页 |
| ·实验结果 | 第64-67页 |
| ·蛋白质SDS-PAGE电泳分析 | 第64页 |
| ·TS复性得率测定 | 第64-65页 |
| ·TS酶活力U及比活力sp的测定 | 第65页 |
| ·雷替曲塞(Tomudex)和培美曲塞(LY231514)IC_(50)的测定 | 第65-66页 |
| ·系列中间体化合物的IC_(50)的测定 | 第66-67页 |
| ·实验小结 | 第67-68页 |
| 全文总结 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-72页 |
| 附录 | 第72-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第76-77页 |
