| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-24页 |
| ·引言 | 第12页 |
| ·GAPDH 蛋白研究进展 | 第12-17页 |
| ·GAPDH 简介 | 第12-13页 |
| ·GAPDH 的功能多样性 | 第13-16页 |
| ·GAPDH 的抗旱功能 | 第16-17页 |
| ·蛋白质研究方法 | 第17-19页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第17页 |
| ·二维凝胶电泳 | 第17-18页 |
| ·二维荧光差异凝胶电泳 | 第18页 |
| ·Western Blot 技术 | 第18-19页 |
| ·蛋白质芯片技术 | 第19页 |
| ·植物启动子研究进展 | 第19-21页 |
| ·植物启动子简介 | 第19-20页 |
| ·GAPDH 启动子的研究价值 | 第20-21页 |
| ·启动子功能分析方法 | 第21-23页 |
| ·启动子的缺失分析 | 第21-22页 |
| ·点突变分析 | 第22页 |
| ·启动子与转录因子结合的分析方法 | 第22-23页 |
| ·本工作的目的和意义 | 第23-24页 |
| 第二章 GAPDH 基因的原核表达及镍柱纯化 | 第24-39页 |
| ·试验材料、试剂及设备 | 第24-26页 |
| ·菌株以及载体 | 第24页 |
| ·内切酶、试剂盒、引物合成及测序 | 第24页 |
| ·试剂的配制 | 第24-26页 |
| ·仪器以及设备 | 第26页 |
| ·试验步骤 | 第26-32页 |
| ·菌种的活化以及质粒的提取 | 第26-27页 |
| ·通过 PCR 引物扩增序列并引入酶切位点 | 第27-28页 |
| ·载体的构建 | 第28页 |
| ·感受态的制备和检验 | 第28-29页 |
| ·转化 | 第29页 |
| ·阳性筛选以及测序 | 第29-30页 |
| ·表达菌的转化 | 第30页 |
| ·目的蛋白的诱导表达 | 第30-31页 |
| ·菌体的破碎与目的蛋白的纯化 | 第31-32页 |
| ·试验结果 | 第32-38页 |
| ·转化子的阳性筛选结果 | 第32-34页 |
| ·目的蛋白的 IPTG 诱导结果 | 第34页 |
| ·表达条件的优化试验结果 | 第34-36页 |
| ·超声裂解液的选择结果 | 第36页 |
| ·目的蛋白的可溶性分析 | 第36-37页 |
| ·目的蛋白的镍柱纯化结果 | 第37-38页 |
| ·讨论 | 第38-39页 |
| ·IPTG 浓度、温度和可溶性的关系 | 第38页 |
| ·超声破碎条件对目的蛋白产量的影响 | 第38-39页 |
| 第三章 GAPDH 的 Western Blot 分析 | 第39-44页 |
| ·试验材料、试剂及设备 | 第39-40页 |
| ·试剂 | 第39页 |
| ·试剂的配制 | 第39页 |
| ·试验仪器 | 第39-40页 |
| ·试验步骤 | 第40-41页 |
| ·材料的处理 | 第40页 |
| ·小麦幼芽总蛋白的提取 | 第40页 |
| ·SDS-PAGE 电泳 | 第40页 |
| ·转膜、杂交与显色 | 第40-41页 |
| ·Western Blot 试验结果与分析 | 第41-42页 |
| ·讨论 | 第42-44页 |
| ·PEG-6000 的胁迫 | 第42页 |
| ·Western Blot 试验的注意事项 | 第42-44页 |
| 第四章 GAPDH 基因上游序列的启动子活性验证 | 第44-53页 |
| ·试验材料、试剂及设备 | 第44-45页 |
| ·菌株以及载体 | 第44页 |
| ·内切酶、试剂盒、引物合成及测序 | 第44页 |
| ·试剂的配制 | 第44-45页 |
| ·仪器以及设备 | 第45页 |
| ·试验步骤 | 第45-48页 |
| ·含 GAPDH 基因上游片段的 pEASY-T1 的获得 | 第45-46页 |
| ·植物表达载体 pBI121 的获得 | 第46页 |
| ·启动子验证载体的构建 | 第46-47页 |
| ·转化以及验证 | 第47页 |
| ·pBI121 质粒的大量提取以及纯化 | 第47-48页 |
| ·拟南芥叶肉原生质体的制备 | 第48页 |
| ·原生质体的转化及孵育 | 第48页 |
| ·GUS 基因的表达检测 | 第48页 |
| ·试验结果 | 第48-51页 |
| ·菌落 PCR 结果 | 第48-49页 |
| ·质粒的大量提取以及双酶切结果 | 第49-50页 |
| ·拟南芥原生质体的制备结果 | 第50页 |
| ·GUS 组织化学分析结果 | 第50-51页 |
| ·讨论 | 第51-53页 |
| ·原生质瞬时表达系统的优点 | 第51页 |
| ·原生质体法验证启动子活性的难点 | 第51页 |
| ·GUS 染色的创新点 | 第51-53页 |
| 第五章 结论与展望 | 第53-55页 |
| ·结论 | 第53页 |
| ·展望 | 第53-55页 |
| 参考文献 | 第55-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 作者简介 | 第64页 |