| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-21页 |
| ·空气污染与能源危机 | 第11页 |
| ·纤维素与纤维素酶的简介 | 第11-12页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的简介 | 第12-13页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的研究 | 第13-14页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的分子催化以及合成反应机制 | 第14-15页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的应用 | 第15-16页 |
| ·β-葡萄糖苷酶在食品上的应用 | 第15页 |
| ·β-葡萄糖苷酶在大豆异黄酮制备中的应用 | 第15页 |
| ·β-葡萄糖苷酶在制造白藜芦醇的应用 | 第15-16页 |
| ·基因组文库的构建 | 第16-17页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的反馈抑制 | 第17页 |
| ·酶的分子改造 | 第17-19页 |
| ·酶的定向进化 | 第18页 |
| ·酶的定点突变 | 第18页 |
| ·酶分子改造的应用 | 第18-19页 |
| ·本论文研究的意义以及工作 | 第19-20页 |
| ·技术路线 | 第20-21页 |
| 第二章 材料与方法 | 第21-40页 |
| ·实验材料 | 第21-25页 |
| ·菌株以及质粒 | 第21页 |
| ·酶与主要使用试剂 | 第21页 |
| ·培养基与溶液的配制 | 第21-25页 |
| ·方法与步骤 | 第25-40页 |
| ·P.cookii GX-4的培养 | 第25页 |
| ·P.cookii GX-4的基因组DNA的提取 | 第25页 |
| ·基因组文库的构建 | 第25-27页 |
| ·P.cookii GX-4基因组文库的筛选 | 第27页 |
| ·碱裂解法提取质粒法 | 第27-28页 |
| ·感受态细胞制备与转化 | 第28页 |
| ·重组fosmid的亚克隆及序列分析 | 第28-29页 |
| ·含β-葡萄糖苷酶基因的亚克隆序列分析 | 第29页 |
| ·β-葡萄糖苷酶基因Pbgl的克隆 | 第29-30页 |
| ·PCR产物与表达载体的酶切 | 第30-31页 |
| ·PCR产物与载体的连接 | 第31页 |
| ·连接产物的转化以及酶切验证 | 第31页 |
| ·重组菌株的诱导表达 | 第31页 |
| ·重组酶的纯化 | 第31-32页 |
| ·纯化蛋白的SDS-PAGE及酶谱分析 | 第32页 |
| ·蛋白质标准曲线的绘制及蛋白质定量分析 | 第32-33页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的酶学性质的测定 | 第33-36页 |
| ·Pbgl的分子改造 | 第36-40页 |
| 第三章 结果与分析 | 第40-76页 |
| ·P.cookii GX-4的fosmid基因组文库的构建 | 第40-41页 |
| ·基因组文库的质量评估 | 第41页 |
| ·含β-葡萄糖苷酶基因克隆的筛选 | 第41-42页 |
| ·重组fosmid的亚克隆 | 第42-43页 |
| ·P.cookii GX-4 β-葡萄糖苷酶基因的序列分析 | 第43-46页 |
| ·β-葡萄糖苷酶基因Pbgl的PCR扩增 | 第46页 |
| ·重组质粒pSE-Pbgl的构建 | 第46-49页 |
| ·pSE-Pbgl重组质粒的构建 | 第46-47页 |
| ·pSE-Pbgl重组质粒的验证 | 第47-49页 |
| ·镍亲和层析纯化蛋白的SDS-PAGE和酶谱分析 | 第49-50页 |
| ·标准曲线的绘制 | 第50-52页 |
| ·蛋白质标准曲线的绘制 | 第50-51页 |
| ·pNP标准曲线的绘制 | 第51-52页 |
| ·纯化重组酶pSE-Pbgl的酶学性质的研究 | 第52-65页 |
| ·Pbgl的最适温度的测定 | 第52页 |
| ·Pbgl的最适pH的测定 | 第52-53页 |
| ·Pbgl的Km和Vmax值的测定 | 第53-54页 |
| ·Pbgl的热稳定性的分析 | 第54页 |
| ·Pbgl的pH稳定性的测定 | 第54-55页 |
| ·金属离子对Pbgl酶活力的影响的测定 | 第55-56页 |
| ·化学试剂对Pbgl酶活力的影响的测定 | 第56页 |
| ·EDTA对Pbgl酶活力的影响的测定 | 第56-57页 |
| ·糖对Pbgl酶活力的影响的测定 | 第57-58页 |
| ·Pbgl的底物特异性的测定 | 第58-59页 |
| ·Pbgl的水解产物分析 | 第59-64页 |
| ·Pbgl对葡萄糖的耐受性研究 | 第64-65页 |
| ·β-葡萄糖苷酶基因Pbgl的分子改造 | 第65-76页 |
| ·β-葡萄糖苷酶基因Pbgl的随机突变 | 第65-66页 |
| ·β-葡萄糖苷酶基因Pbgl的定点突变 | 第66-68页 |
| ·定点突变体的获得 | 第68页 |
| ·突变体序列分析 | 第68-69页 |
| ·突变体的SDS-PAGE分析 | 第69页 |
| ·野生酶与突变体的酶学性质比较分析 | 第69-76页 |
| 第四章 讨论 | 第76-82页 |
| ·fosmid文库的构建以及文库的筛选效率 | 第76页 |
| ·Pbgl是一个碱性β-葡萄糖苷酶 | 第76-77页 |
| ·Pbgl的底物特异性 | 第77-78页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的葡萄糖耐受性研究 | 第78-82页 |
| 第五章 结论与展望 | 第82-85页 |
| ·结论 | 第82-83页 |
| ·问题与展望 | 第83-85页 |
| 附录 | 第85-90页 |
| 参考文献 | 第90-98页 |
| 致谢 | 第98-99页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文与专利 | 第99页 |