| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-7页 |
| 第一章 绪论 | 第7-13页 |
| ·脂肪酶研究概况 | 第7-8页 |
| ·脂肪酶简介 | 第7页 |
| ·脂肪酶的结构 | 第7-8页 |
| ·脂肪酶的性质 | 第8页 |
| ·脂肪酶的底物特异性 | 第8页 |
| ·脂肪酶的来源 | 第8-9页 |
| ·动物脂肪酶 | 第8-9页 |
| ·植物脂肪酶 | 第9页 |
| ·微生物脂肪酶 | 第9页 |
| ·脂肪酶的应用 | 第9-11页 |
| ·脂肪酶在食品工业中的应用 | 第9-10页 |
| ·脂肪酶在洗涤剂工业中的应用 | 第10页 |
| ·脂肪酶在生物柴油中的应用 | 第10-11页 |
| ·脂肪酶在手性化合物合成中的应用 | 第11页 |
| ·粘质沙雷氏菌脂肪酶 | 第11-12页 |
| ·立题意义 | 第12-13页 |
| 第二章 材料与方法 | 第13-23页 |
| ·实验材料 | 第13-15页 |
| ·实验仪器 | 第13页 |
| ·菌株与质粒 | 第13页 |
| ·工具酶与试剂 | 第13-14页 |
| ·培养基及培养条件 | 第14-15页 |
| ·实验方法 | 第15-23页 |
| ·产脂肪酶微生物的筛选与鉴定 | 第15-16页 |
| ·粘质沙雷氏菌脂肪酶基因（lipA）在大肠杆菌中的克隆表达 | 第16-18页 |
| ·粘质沙雷氏菌脂肪酶基因（lipA）在枯草芽孢杆菌中的克隆表达 | 第18-19页 |
| ·重组酶的 Ni-NTA 的纯化 | 第19页 |
| ·重组酶的酶学性质研究 | 第19-20页 |
| ·酶学性质指导下重组菌 B. subtilis 168/pMA5- lipA 的发酵优化 | 第20-21页 |
| ·粘质沙雷氏菌脂肪酶基因（lipA）在毕赤酵母中的克隆表达 | 第21-23页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第23-46页 |
| ·菌株的筛选与鉴定 | 第23-26页 |
| ·菌株的筛选 | 第23页 |
| ·菌株的鉴定 | 第23-25页 |
| ·菌株 JNS3-9 产脂肪酶的初步发酵实验 | 第25-26页 |
| ·粘质沙雷氏菌 JNS3-9 脂肪酶基因在大肠杆菌中的克隆表达 | 第26-28页 |
| ·粘质沙雷氏菌 JNS3-9 脂肪酶基因的克隆 | 第26-27页 |
| ·重组大肠杆菌的 SDS-PAGE 验证和酶活测定 | 第27-28页 |
| ·粘质沙雷氏菌 JNS3-9 脂肪酶基因在枯草芽孢杆菌中的克隆表达 | 第28-30页 |
| ·重组质粒 pMA5-lipA 的构建 | 第28-29页 |
| ·重组枯草芽孢杆菌 B.subtilis168/pMA5-lipA 的构建 | 第29页 |
| ·重组枯草芽孢杆菌 B.subtilis168/pMA5-lipA 的 SDS-PAGE 及酶活测定 | 第29-30页 |
| ·重组脂肪酶的纯化 | 第30-32页 |
| ·重组脂肪酶的酶学性质研究 | 第32-36页 |
| ·最适 pH 和 pH 稳定性 | 第32-33页 |
| ·最适温度和温度稳定性 | 第33-34页 |
| ·金属离子对酶的影响 | 第34-35页 |
| ·对不同有机溶剂的耐受性 | 第35-36页 |
| ·重组枯草芽孢杆菌 B.subtilis168/pMA5-lipA 的发酵优化 | 第36-44页 |
| ·种子生长曲线和最佳种龄的确定 | 第36页 |
| ·碳源对枯草芽孢杆菌 B. subtilis 168/pMA5-lipA 产脂肪酶的影响 | 第36-38页 |
| ·氮源对枯草芽孢杆菌 B. subtilis 168/pMA5-lipA 产脂肪酶的影响 | 第38-40页 |
| ·无机盐对枯草芽孢杆菌 B. subtilis 168/pMA5-lipA 产脂肪酶的影响 | 第40-41页 |
| ·正交实验优化培养基成分 | 第41-42页 |
| ·初始 pH 对菌体量及脂肪酶产量的影响 | 第42-43页 |
| ·最佳接种量的选择 | 第43页 |
| ·重组菌在最优发酵条件下的发酵曲线 | 第43-44页 |
| ·粘质沙雷氏菌 JNS3-9 脂肪酶基因在毕赤酵母中的克隆表达 | 第44-46页 |
| ·重组质粒 pPIC9K-lipA 的构建 | 第44页 |
| ·重组菌 P. pastoris GS115/ pPIC9K-lipA 的高拷贝转化子筛选 | 第44-45页 |
| ·重组菌 P. pastoris GS115/ pPIC9K-lipA 的 SDS-PAGE 鉴定及酶活测定 | 第45-46页 |
| 主要结论与展望 | 第46-48页 |
| 致谢 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-52页 |
| 附录 1: 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第52-53页 |
| 附录 2: 粘质沙雷氏菌脂肪酶基因（lipA）序列 | 第53页 |
