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对氧磷酶1的表达纯化及其活性与功能的初步研究

摘要第1-5页
Abstract第5-6页
缩略语第6-7页
目录第7-10页
第一章 引言第10-19页
   ·PON1 的概述第10-15页
     ·PON1 的性质及其研究背景第11-12页
     ·PON1 的多态性现象第12-13页
     ·PON1 与疾病的关系第13-15页
   ·杆状病毒表达系统概述第15-19页
     ·杆状病毒第15页
     ·昆虫杆状病毒表达系统第15-16页
     ·杆状病毒表达系统与其他表达系统的比较第16-17页
     ·BmNPV 表达系统与 AcMNPV 表达系统相比较的优势第17页
     ·Bac-to-Bac 杆状病毒表达系统系统第17-19页
第二章 实验方案设计第19-21页
   ·研究的目的和意义第19页
   ·研究内容第19-20页
   ·实验流程图第20-21页
第三章 PON1 基因的生物信息学分析第21-23页
   ·生物信息学分析工具第21页
   ·生物信息学分析结果第21-22页
     ·PON1 基因的同源性分析第21页
     ·疏水性分析第21-22页
     ·信号肽分析第22页
   ·讨论第22-23页
第四章 大肠杆菌中 PON1 的表达与纯化第23-35页
   ·材料与试剂第23-24页
   ·实验内容与方法第24-30页
     ·pET-32a-PON1 重组表达载体的构建第24-25页
     ·pET-32a-PON1 重组质粒的鉴定第25-27页
     ·pET-32a-PON1重组质粒的转化与鉴定第27页
     ·重组蛋白PON1在大肠杆菌中的表达及其分析第27页
     ·重组蛋白PON1的 Western bloting 鉴定第27-28页
     ·重组蛋白PON1的大量表达及纯化第28-30页
   ·实验结果第30-34页
     ·pET-32a-PON1的构建第30-31页
     ·重组蛋白PON1的诱导表达及 Western blotting 鉴定第31-32页
     ·重组蛋白PON1的纯化第32-34页
   ·讨论第34-35页
第五章 多克隆抗体的制备及纯化第35-42页
   ·材料与试剂第35-36页
   ·实验内容与方法第36-39页
     ·多克隆抗体的制备第36页
     ·ELISA 检测多克隆抗体效价第36-37页
     ·PON1多克隆抗体的纯化第37-39页
   ·结果第39-41页
     ·PON1多克隆抗体的特异性检测第39-40页
     ·PON1多克隆抗体的效价第40页
     ·PON1多克隆抗体的纯化第40-41页
   ·讨论第41-42页
第六章 PON1在家蚕杆状病毒表达系统中的表达与鉴定第42-60页
   ·材料与试剂第42页
   ·实验内容与方法第42-50页
     ·重组转移载体 pFastBacHTA-PON1的构建第42-43页
     ·重组转移载体 pFastBacHTA-PON1的序列测定第43页
     ·重组质粒 Bacmid-PON1的构建第43页
     ·重组 Bacmid-PON1的提取与鉴定第43-45页
     ·家蚕卵巢细胞(BmN)的复苏、培养与冻存第45-46页
     ·重组病毒 vBmPON1的构建第46-47页
     ·PON1在家蚕生物反应器中的表达第47-48页
     ·家蚕血淋巴中表达的 PON1的纯化第48-49页
     ·家蚕血淋巴中 PON1含量的 ELISA 检测第49-50页
   ·结果第50-59页
     ·重组质粒 pFastBacHTA-PON1的鉴定第50-51页
     ·重组质粒 Bacmid-PON1 的 PCR 鉴定第51页
     ·重组病毒 vBmPON1 的鉴定第51-53页
     ·PON1 在家蚕生物反应器中的表达第53-55页
     ·家蚕幼虫血淋巴表达的 PON1 的纯化第55-57页
     ·质谱分析结果第57-58页
     ·蚕血淋巴中 PON1 含量的 ELISA 检测第58-59页
   ·讨论第59-60页
第七章 重组表达 PON1 活性及功能的初步研究第60-67页
   ·材料与试剂第60页
   ·实验内容及方法第60-63页
     ·重组表达 PON1 与天然 PON1 的活性检测及比较第60-62页
     ·PON1 对于敌敌畏染毒小鼠的解毒效果的研究第62-63页
   ·结果第63-65页
     ·重组表达的 PON1 活性检测结果第63-65页
     ·PON1 对敌敌畏的解毒效果第65页
   ·讨论第65-67页
结论第67-68页
参考文献第68-72页
致谢第72页

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