| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 缩略语 | 第7-8页 |
| 目录 | 第8-11页 |
| 第一章 引言 | 第11-19页 |
| ·膜蛋白的研究 | 第11-12页 |
| ·膜蛋白的研究进展 | 第11-12页 |
| ·研究膜蛋白面临的重大困难 | 第12页 |
| ·家蚕杆状病毒表达系统的研究 | 第12-13页 |
| ·家蚕杆状病毒表达系统的研究进展 | 第12页 |
| ·Bac-to-Bac 表达系统 | 第12-13页 |
| ·研究蛋白之间相互作用的方法 | 第13-15页 |
| ·MMgT基因家族的研究进展 | 第15-16页 |
| ·实验方案设计 | 第16-19页 |
| ·实验目的和意义 | 第16-17页 |
| ·实验的主要内容 | 第17-18页 |
| ·实验流程 | 第18-19页 |
| 第二章 生物信息学分析 | 第19-27页 |
| ·生物信息学分析工具 | 第19页 |
| ·分 析方法与结果 | 第19-25页 |
| ·家蚕 BmMMgT 基因序列 | 第19-20页 |
| ·保守结构域的预测 | 第20页 |
| ·二级结构的预测 | 第20-21页 |
| ·与其他物种的氨基酸进行同源性分析 | 第21-22页 |
| ·疏水性分析 | 第22-23页 |
| ·跨膜区预测 | 第23-24页 |
| ·信号肽预测 | 第24页 |
| ·蛋白定位预测的分析 | 第24-25页 |
| ·高级结构预测 | 第25页 |
| ·讨论 | 第25-27页 |
| 第三章 膜蛋白 BmMMgT 基因的克隆、表达及其纯化 | 第27-45页 |
| ·材料和试剂 | 第27-29页 |
| ·材料和试剂 | 第27页 |
| ·主要试剂的配制 | 第27-29页 |
| ·方法 | 第29-36页 |
| ·家蚕蛹 cDNA 的合成和原核表达重组载体 pET-32a-BmMMgT 的构建 | 第29-32页 |
| ·构建重组表达载体 pET-32a-BmMMgT | 第32-33页 |
| ·重组表达载体在大肠杆菌中的表达 | 第33页 |
| ·表达的融合蛋白 pET-32a-BmMMgT 进行 SDS-PAGE 分析 | 第33页 |
| ·融合蛋白 pET-32a-BmMMgT 表达的 Western blotting 鉴定 | 第33-34页 |
| ·镍离子亲和层析柱的制备 | 第34页 |
| ·阴离子交换层析 | 第34-35页 |
| ·融合蛋白 pET-32a-BmMMgT 通过镍离子亲和层析柱和阴离子交换柱来纯化 | 第35页 |
| ·蛋白定量（BCA 法） | 第35页 |
| ·融合蛋白 pET-32a-BmMMgT 的质谱鉴定 | 第35页 |
| ·融合蛋白 pET-32a-BmMMgT 的 THROMBIN 酶切分析 | 第35-36页 |
| ·利用镍离子亲和层析纯化无标签的蛋白 | 第36页 |
| ·结果 | 第36-44页 |
| ·基因 BmMMgT 的 PCR 扩增和表达载体 pET32a-BmMMgT 的构建 | 第36-37页 |
| ·pET-32a-BmMMgT 的原核表达 | 第37-38页 |
| ·融合蛋白 pET-32a-BmMMgT 的 Western blotting 鉴定 | 第38-39页 |
| ·镍离子亲和层析柱纯化融合蛋白 | 第39-41页 |
| ·阴离子交换柱纯化融合蛋白 | 第41-42页 |
| ·融合蛋白 pET32a-MMgT 的质谱鉴定 | 第42页 |
| ·融合蛋白 pET32a-BmMMgT 的凝血酶酶切分析 | 第42-44页 |
| ·讨论 | 第44-45页 |
| 第四章 融合蛋白 BmMMgT 结晶条件的初筛及其膜蛋白 BmMMgT 与 Mn-SOD 共结晶条件的筛选 | 第45-51页 |
| ·材料和试剂 | 第45页 |
| ·材料 | 第45页 |
| ·试剂 | 第45页 |
| ·方法 | 第45-46页 |
| ·点晶方法 | 第45-46页 |
| ·膜蛋白基因 BmMMgT 与 Mn-SOD 蛋白的融合表达 | 第46页 |
| ·结果 | 第46-49页 |
| ·融合蛋白 pET32a-BmMMgT 结晶条件初筛 | 第46页 |
| ·重组质粒 pET28a-MnSOD-BmMMgT 的构建 | 第46-47页 |
| ·重组质粒 pET28a-MnSOD-BmMMgT 的诱导表达 | 第47-48页 |
| ·融合蛋白 pET28a-MnSOD-BmMMgT 的纯化 | 第48-49页 |
| ·融合蛋白 pET28a-MnSOD-BmMMgT 结晶条件的初筛 | 第49页 |
| ·讨论 | 第49-51页 |
| 第五章 融合蛋白 pET32a-BmMMgT 多克隆抗体的制备 | 第51-57页 |
| ·材料和试剂 | 第51-52页 |
| ·材料 | 第51页 |
| ·试剂 | 第51-52页 |
| ·方法 | 第52-54页 |
| ·抗原的制备方法 | 第52页 |
| ·新西兰大白兔的免疫方法与多克隆抗体的制备 | 第52页 |
| ·抗体纯化（抗原亲和层析柱的制备方法） | 第52-53页 |
| ·间接 ELISA 法测定抗体效价 | 第53-54页 |
| ·抗体特异性的 Western blotting 鉴定 | 第54页 |
| ·结果 | 第54-56页 |
| ·抗体效价测定 | 第54页 |
| ·抗体特异性检测 | 第54-55页 |
| ·抗体纯化 | 第55-56页 |
| ·讨论 | 第56-57页 |
| 第六章 膜蛋白 BmMMgT 的 His-tag pull down 的分析 | 第57-67页 |
| ·材料和试剂 | 第57-58页 |
| ·材料和仪器 | 第57页 |
| ·主要试剂的配置 | 第57-58页 |
| ·方法 | 第58-59页 |
| ·蚕蛹全蛋白的制备方法 | 第58页 |
| ·细胞全蛋白的制备方法 | 第58页 |
| ·His-tag pull down 的方法 | 第58-59页 |
| ·银染的方法 | 第59页 |
| ·结果 | 第59-65页 |
| ·硫氧环蛋白的诱导表达 | 第59-60页 |
| ·纯化后的硫氧环蛋白 | 第60页 |
| ·膜蛋白 BmMMgT 与蚕蛹全蛋白的相互作用的分析 | 第60-62页 |
| ·质谱鉴定结果 | 第62-63页 |
| ·未知条带三级结构的预测 | 第63页 |
| ·膜蛋白 BmMMgT 与 BmN 细胞中的全蛋白相互作用的分析 | 第63-65页 |
| ·讨论 | 第65-67页 |
| 第七章 膜蛋白 BmMMgT 在家蚕细胞中的表达及其功能的初探 | 第67-81页 |
| ·材料和试剂 | 第67-68页 |
| ·材料和试剂 | 第67页 |
| ·主要试剂的配置 | 第67-68页 |
| ·荧光定量 PCR 引物的设计 | 第68页 |
| ·方法 | 第68-73页 |
| ·重组质粒 pFastBacHTA-BmMMgT 的构建 | 第68-69页 |
| ·重组病毒基因组 Bacmid-BmMMgT 的构建 | 第69-71页 |
| ·家蚕细胞的复苏、培养、冻存 | 第71页 |
| ·重组病毒基因组 Bacmid DNA 转染家蚕细胞 BmN | 第71页 |
| ·膜蛋白 BmMMgT 在真核中的表达鉴定（Western blotting） | 第71-72页 |
| ·体外 Mg~(2+)对基因 BmMMgT 在家蚕细胞中 mRNA 水平的影响 | 第72-73页 |
| ·荧光定量 PCR 数据分析 | 第73页 |
| ·结果 | 第73-80页 |
| ·pFastBacHTA-BmMMgT 的构建 | 第73-74页 |
| ·重组 Bacmid DNA 的 PCR 鉴定 | 第74-75页 |
| ·重组病毒基因组在细胞中的鉴定 | 第75页 |
| ·膜蛋白 BmMMgT 在真核中的表达及其鉴定 | 第75-76页 |
| ·家蚕细胞总 RNA 的提取 | 第76-77页 |
| ·家蚕各处理细胞中内参和 BmMMgT 的 RT-PCR 曲线分析 | 第77-79页 |
| ·家蚕各组处理细胞中 BmMMgT 转录水平的分析 | 第79-80页 |
| ·讨论 | 第80-81页 |
| 结论 | 第81-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-86页 |
