| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 第一章 、文献综述 | 第11-41页 |
| 第一节、铜污染对环境造成的影响及治理方法 | 第11-17页 |
| 1. 铜污染现状及危害 | 第11-12页 |
| 2. 铜污染的治理方法 | 第12-17页 |
| ·工程化学法 | 第13-14页 |
| ·农业化学调控法 | 第14-15页 |
| ·生物修复 | 第15-17页 |
| ·动物修复 | 第15页 |
| ·微生物修复 | 第15-16页 |
| ·植物修复 | 第16-17页 |
| ·植物-微生物联合修复 | 第17页 |
| 第二节、影响植物提取修复效率的因素 | 第17-25页 |
| 1. 修复植物的选择 | 第17-19页 |
| ·超级累植物和转基因植物 | 第17-18页 |
| ·能源作物 | 第18-19页 |
| 2. 根际环境因素及重金属形态 | 第19-21页 |
| ·植物对重金属的抗性 | 第20-21页 |
| ·强化抗氧化系统 | 第20页 |
| ·螯合多余的重金属 | 第20页 |
| ·重金属离子的胞外沉淀和胞内区域化 | 第20-21页 |
| ·产生其它抗逆性物质 | 第21页 |
| 第三节、微生物在植物-微生物联合修复中的作用 | 第21-25页 |
| 1. 微生物对重金属活性的影响 | 第21-23页 |
| ·吸附和富集 | 第21-22页 |
| ·溶解作用 | 第22-23页 |
| ·对重金属-有机络合物的生物降解 | 第23页 |
| ·生物转化作用 | 第23页 |
| 2. 微生物对植物生长的影响 | 第23-25页 |
| ·促进植物对营养元素的吸收 | 第23-24页 |
| ·固氮、溶磷和解钾作用 | 第23页 |
| ·产生铁载体 | 第23-24页 |
| ·促进植物对其它元素吸收 | 第24页 |
| ·促进植物生长 | 第24-25页 |
| ·产生植物激素 | 第24页 |
| ·产生ACC脱氨酶 | 第24-25页 |
| ·提高植物抗病能力 | 第25页 |
| 第四节、植物中的一氧化氮(NO) | 第25-35页 |
| 1. 植物产生NO的机制 | 第25-27页 |
| ·酶促反应产生NO | 第25-26页 |
| ·一氧化氮合酶途径 | 第25-26页 |
| ·硝酸还原酶途径 | 第26页 |
| ·其它可能催化NO产生的酶 | 第26页 |
| ·非酶促反应合成NO | 第26-27页 |
| 2. NO对植物生长发育的调节作用 | 第27-28页 |
| ·NO与种子的萌发 | 第27页 |
| ·NO与种子的生长 | 第27-28页 |
| ·NO与植物的衰老 | 第28页 |
| 3. NO与植物抗逆境及胁迫 | 第28-31页 |
| ·非生物胁迫 | 第28-30页 |
| ·干旱胁迫 | 第28-29页 |
| ·盐胁迫 | 第29-30页 |
| ·极端温度 | 第30页 |
| ·紫外线辐射 | 第30页 |
| ·生物胁迫 | 第30-31页 |
| 4. NO和植物激素之间的关系 | 第31-35页 |
| ·NO与生长素之间的关系 | 第31-32页 |
| ·NO与细胞分裂素之间的关系 | 第32页 |
| ·NO与赤霉素之间的关系 | 第32-33页 |
| ·NO与乙烯之间的关系 | 第33-34页 |
| ·NO与脱落酸之间的关系 | 第34-35页 |
| 第五节、细菌中NO的产生 | 第35-36页 |
| 第六节、细菌的铜抗性机制 | 第36-39页 |
| 1. 大肠杆菌(Escherichia.coli)的cut和pco系统 | 第36-37页 |
| 2. 海氏肠球菌(Enterococcus hirae)的cop系统 | 第37页 |
| 3. 丁香假单胞菌(Pseudonomas syringe)的cop系统 | 第37-39页 |
| 第七节、立题依据及研究意义 | 第39-41页 |
| 第二章 、菌株的分离筛选及待构建的出发菌株的确定 | 第41-53页 |
| 1. 材料 | 第41页 |
| ·菌株及来源 | 第41页 |
| ·培养基和试剂 | 第41页 |
| 2. 方法 | 第41-45页 |
| ·菌株的分离 | 第41-42页 |
| ·象草根、茎内生细菌的分离 | 第41-42页 |
| ·象草根周围土壤细菌的分离 | 第42页 |
| ·菌株鉴定 | 第42-43页 |
| ·细菌基因组总DNA的提取 | 第42页 |
| ·16S rDNA基因的PCR扩增 | 第42-43页 |
| ·菌株产NO能力的检测 | 第43-44页 |
| ·菌株对铜的抗性的测定 | 第44页 |
| ·质粒提取 | 第44页 |
| ·质粒消除 | 第44-45页 |
| ·菌株对抗生素的抗性测定 | 第45页 |
| 3. 结果与分析 | 第45-50页 |
| ·菌株的分离与筛选 | 第45页 |
| ·菌株鉴定 | 第45页 |
| ·菌株产NO能力的检测 | 第45页 |
| ·菌株对铜的抗性的测定 | 第45-47页 |
| ·菌株自身携带质粒的检测 | 第47页 |
| ·菌株自身携带质粒的消除 | 第47-49页 |
| ·菌株的抗生素抗性 | 第49-50页 |
| ·实验室保存的部分假单胞菌的铜及庆大霉素抗性 | 第50页 |
| 4. 讨论 | 第50-52页 |
| ·出发菌株的选择 | 第50-51页 |
| ·构建基因工程菌株所用的基因元件的选择 | 第51-52页 |
| 5. 本章小结 | 第52-53页 |
| 第三章 、基因工程菌株的构建及生物学特性研究 | 第53-72页 |
| 1. 材料 | 第53-54页 |
| ·菌株与质粒 | 第53页 |
| ·培养基和试剂 | 第53-54页 |
| 2. 方法 | 第54-59页 |
| ·基因工程菌株的构建 | 第54-57页 |
| ·亚硝酸还原酶K(NirK)基因的克隆 | 第54页 |
| ·绿色荧光蛋白(GFP)基因的克隆 | 第54-55页 |
| ·铜诱导型启动子的克隆 | 第55页 |
| ·铜诱导型启动子分别与亚硝酸还原酶基因及绿色荧光蛋白基因的融合 | 第55-56页 |
| ·丁香假单胞菌Pseudomonas syringae pv. Tomato pPT23D铜抗性操纵子的克隆 | 第56页 |
| ·丁香假单胞菌铜抗性操纵子-铜诱导型启动子-亚硝酸还原酶(或绿色荧光蛋白)克隆载体的构建 | 第56页 |
| ·丁香假单胞菌铜抗性操纵子-铜诱导型启动子-亚硝酸还原酶(或绿色荧光蛋白)表达载体的构建 | 第56页 |
| ·假单胞菌铜抗性操纵子-铜诱导型启动子-亚硝酸还原酶(或绿色荧光蛋白)表达载体向假单胞菌中的转化 | 第56-57页 |
| ·基因工程菌株及出发菌株的生物学特性研究 | 第57-59页 |
| ·供试菌株产铁载体能力测定 | 第57-58页 |
| ·供试菌株产吲哚乙酸(IAA)能力测定 | 第58页 |
| ·供试菌株在不同pH和盐(NaCl)浓度中生长的能力测定 | 第58页 |
| ·菌株的其它生物学特性研究 | 第58-59页 |
| 3. 结果与分析 | 第59-70页 |
| ·基因工程菌株的构建 | 第59-66页 |
| ·亚硝酸还原酶K(NirK)基因的克隆 | 第59-60页 |
| ·绿色荧光蛋白(GFP)基因的克隆 | 第60页 |
| ·铜诱导型启动子的克隆 | 第60页 |
| ·铜诱导型启动子分别与亚硝酸还原酶基因及绿色荧光蛋白基因的融合 | 第60-61页 |
| ·丁香假单胞菌Pseudomonas syringae pv.Tomato pPT23D铜抗性操纵子的克隆 | 第61-62页 |
| ·丁香假单胞菌铜抗性操纵子-铜诱导型启动子-亚硝酸还原酶(或绿色荧光蛋白)克隆载体的构建 | 第62页 |
| ·丁香假单胞菌铜抗性操纵子-铜诱导型启动子-亚硝酸还原酶(或绿色荧光蛋白)表达载体的构建 | 第62-64页 |
| ·假单胞菌铜抗性操纵子-铜诱导型启动子-亚硝酸还原酶(或绿色荧光蛋白)表达载体向假单胞菌中的转化及验证 | 第64-66页 |
| ·出发菌株及基因工程菌株的生物学特性研究 | 第66-70页 |
| ·供试菌株产铁载体能力测定 | 第66页 |
| ·供试菌株产吲哚乙酸(IAA)能力测定 | 第66-68页 |
| ·供试菌株产ACC脱氨酶的能力测定 | 第68页 |
| ·供试菌株在不同pH、Cu浓度和盐(NaCl)浓度中生长的能力测定 | 第68-69页 |
| ·菌株的其它生物学特性 | 第69-70页 |
| 4. 讨论 | 第70-71页 |
| ·nir基因的克隆 | 第70页 |
| ·copABCDRS的克隆 | 第70-71页 |
| 5. 本章小结 | 第71-72页 |
| 第四章 、基因工程菌株中gfp的表达及其植物促生特性的研究 | 第72-91页 |
| 1. 材料 | 第72页 |
| ·供试菌株 | 第72页 |
| ·供试植物 | 第72页 |
| ·培养基和试剂 | 第72页 |
| 2. 方法 | 第72-89页 |
| ·菌株中表达的绿色荧光蛋白(GFP)的检测 | 第72-73页 |
| ·荧光显微镜检测菌株中表达的GFP | 第72页 |
| ·酶标仪检测菌株中表达的GFP | 第72-73页 |
| ·杂交狼尾草砂培试验 | 第73-74页 |
| ·杂交狼尾草种子的表面消毒及催芽 | 第73页 |
| ·石英砂的处理 | 第73页 |
| ·杂交狼尾草幼芽的种植、接菌和铜胁迫处理 | 第73页 |
| ·杂交狼尾草生物量的测定 | 第73页 |
| ·杂交狼尾草植株中元素含量的测定 | 第73-74页 |
| ·叶绿素含量的测定 | 第74页 |
| ·燃烧热的测定 | 第74页 |
| 3. 结果与分析 | 第74-85页 |
| ·不同铜浓度下P-GFP融合子的表达 | 第74-76页 |
| ·人工气候条件下(光照培养箱中)基因工程菌株S3-BCPN对杂交狼尾草生长的影响 | 第76-77页 |
| ·不同铜浓度下接菌和施加SNP处理对杂交狼尾草生物量的影响 | 第77-79页 |
| ·不同铜浓度下接菌和施加SNP处理对杂交狼尾草积累元素的影响 | 第79-85页 |
| ·半人工气候条件下(牌楼温室中)基因工程菌株E2e-BCPN对杂交狼尾草生长的影响 | 第85-89页 |
| ·不同铜浓度下接菌和施加SNP处理对杂交狼尾草生物量的影响 | 第85页 |
| ·不同铜浓度下接菌和施加SNP处理对杂交狼尾草叶片中叶绿素含量的影响 | 第85-89页 |
| ·不同铜浓度下接菌和施加SNP处理对杂交狼尾草地上部燃烧热的影响 | 第89页 |
| 4. 讨论 | 第89-90页 |
| 5. 本章小结 | 第90-91页 |
| 全文总结 | 第91-92页 |
| 研究展望 | 第92-93页 |
| 本文的创新之处 | 第93-94页 |
| 主要参考文献 | 第94-101页 |
| 附录 | 第101-107页 |
| 致谢 | 第107页 |
