| 学位论文数据集 | 第1-5页 |
| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 目录 | 第7-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-23页 |
| ·PQQ 的发现 | 第15页 |
| ·PQQ 的物理性质 | 第15-16页 |
| ·自然界 PQQ 的分布 | 第16页 |
| ·PQQ 在生物体中功能 | 第16-17页 |
| ·PQQ 参呼吸链电子传递 | 第16页 |
| ·PQQ 是刺激机体的生长因子 | 第16-17页 |
| ·修复受损神经细胞 | 第17页 |
| ·其他生理作用 | 第17页 |
| ·对 PQQ 的生物合成途经的研究 | 第17-18页 |
| ·PQQ 的合成基因 | 第18-21页 |
| ·pqqA | 第19-20页 |
| ·pqqB | 第20页 |
| ·pqqC 与 pqqD | 第20页 |
| ·pqqE 基因 | 第20页 |
| ·pqqF 和 pqqG | 第20-21页 |
| ·PQQ 基因产物的结构图 | 第21页 |
| ·PQQ 的生物合成调控 | 第21-22页 |
| ·本课题的立项意义 | 第22-23页 |
| 第二章 不同启动子的 PQQ 工程菌构建 | 第23-39页 |
| ·引言 | 第23页 |
| ·实验材料 | 第23-24页 |
| ·菌株与质粒 | 第23页 |
| ·试剂与仪器 | 第23页 |
| ·培养基 | 第23-24页 |
| ·实验方法 | 第24-33页 |
| ·肺炎克雷伯氏杆菌基因组的提取 | 第24-25页 |
| ·聚合酶链式反应（PCR）扩增 pqq 5.5kb 片段 | 第25页 |
| ·聚合酶链式反应扩增不同启动子片段 | 第25-26页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳鉴定并回收启动子片段与目的基因 pqq 5.5K 片段 | 第26页 |
| ·提取 pET-28a 质粒 | 第26-27页 |
| ·不同启动子质粒的构建 | 第27-28页 |
| ·重组质粒转化大肠杆菌 | 第28页 |
| ·利用菌落 PCR 进行阳性克隆筛选 | 第28-29页 |
| ·启动子质粒双酶切鉴定 | 第29-30页 |
| ·不同启动子的 PQQ 重组质粒构建 | 第30页 |
| ·重组质粒转化大肠杆菌 | 第30-31页 |
| ·利用菌落 PCR 进行阳性克隆筛选 | 第31-32页 |
| ·转化肺炎克雷伯氏菌 k.p 1st | 第32-33页 |
| ·结果与讨论 | 第33-37页 |
| ·TK. pneumoniae subsp. PneumoniaeT基因组提取产物鉴定 | 第33页 |
| ·5.5KPQQ 基因簇 PCR 扩增 | 第33-34页 |
| ·pET28a 质粒 | 第34页 |
| ·目的启动子的鉴定 | 第34-35页 |
| ·启动子片段菌落 PCR | 第35页 |
| ·构建重组菌后进行菌落 PCR | 第35-37页 |
| ·本章小结 | 第37-39页 |
| 第三章 重组工程菌表达 PQQ 的研究 | 第39-49页 |
| ·引言 | 第39-40页 |
| ·利用非酶系统测定样品中的 PQQ 含量 | 第39页 |
| ·不同启动子的工程菌 PQQ 产量的检测 | 第39-40页 |
| ·实验材料 | 第40-42页 |
| ·菌株与质粒 | 第40页 |
| ·试剂与仪器 | 第40页 |
| ·培养基 | 第40-41页 |
| ·培养条件 | 第41-42页 |
| ·PQQ 产量检测 | 第42页 |
| ·结果与讨论 | 第42-47页 |
| ·本章小结 | 第47-49页 |
| 第四章 土壤中筛选 PQQ 生产菌方法的建立 | 第49-53页 |
| ·引言 | 第49页 |
| ·实验材料 | 第49-50页 |
| ·试剂与仪器 | 第49页 |
| ·培养基 | 第49-50页 |
| ·培养条件 | 第50页 |
| ·PQQ 产量检测 | 第50页 |
| ·结果与讨论 | 第50-52页 |
| ·土样采集 | 第50-51页 |
| ·菌株初筛 | 第51页 |
| ·菌株复筛 | 第51页 |
| ·PQQ 产量检测 | 第51-52页 |
| ·菌株鉴定 | 第52页 |
| ·本章小结 | 第52-53页 |
| 第五章 构建大肠杆菌葡萄糖脱氢酶基因工程质粒 | 第53-59页 |
| ·引言 | 第53页 |
| ·实验材料 | 第53页 |
| ·菌株与质粒 | 第53页 |
| ·试剂与仪器 | 第53页 |
| ·培养基 | 第53页 |
| ·实验方法 | 第53-56页 |
| ·大肠杆菌（TEscherichia coliT）BL21 基因组 DNA 的提取 | 第53-54页 |
| ·扩增葡萄糖脱氢酶基因 | 第54-55页 |
| ·DNA 电泳鉴定目的基因 gcd 片段并回收 | 第55页 |
| ·pET-22b 质粒载体的提取 | 第55页 |
| ·酶切并且连接 | 第55页 |
| ·转化 | 第55页 |
| ·菌落 PCR 确定阳性克隆 | 第55-56页 |
| ·pET22b-gcd 的酶切鉴定 | 第56页 |
| ·结果与讨论 | 第56-58页 |
| ·TEscherichia coliTBL21 基因组 DNA 的提取 | 第56页 |
| ·gcd 基因片段 PCR 扩增 | 第56-57页 |
| ·pET22b 质粒提取 | 第57页 |
| ·酶切，连接和转化 | 第57页 |
| ·菌落 PCR | 第57-58页 |
| ·质粒单酶切与双酶切鉴定 | 第58页 |
| ·本章小结 | 第58-59页 |
| 第六章 重组质粒的工程菌表达葡萄糖脱氢酶的研究 | 第59-62页 |
| ·引言 | 第59页 |
| ·实验材料 | 第59-60页 |
| ·菌株与质粒 | 第59页 |
| ·试剂与仪器 | 第59页 |
| ·培养基 | 第59-60页 |
| ·实验方法 | 第60页 |
| ·SDS-PAGE 鉴定重组蛋白 | 第60页 |
| ·pET28a-gcd 工程菌的表达条件优化 | 第60页 |
| ·结果与讨论 | 第60-61页 |
| ·SDS-PAGE 检测分析 PQQGDH | 第60-61页 |
| ·小结 | 第61-62页 |
| 第七章 实验总结与建议 | 第62-64页 |
| ·主要结论 | 第62页 |
| ·本文创新点 | 第62-63页 |
| ·问题与建议 | 第63-64页 |
| 第八章 干扰素缺陷型细胞系构建（第四年联合培养实验） | 第64-71页 |
| ·引言 | 第64-65页 |
| ·实验材料 | 第65-66页 |
| ·实验方法 | 第66-67页 |
| ·实验结果及讨论 | 第67-71页 |
| 参考文献 | 第71-77页 |
| 附录1 试剂 | 第77-79页 |
| 附录2 仪器设备 | 第79-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第81-82页 |
| 作者和导师简介 | 第82页 |
