| 目录 | 第1-8页 |
| 摘要 | 第8-13页 |
| Abstract | 第13-20页 |
| 第一章 研究背景 | 第20-38页 |
| ·纤维素资源的开发利用 | 第20-21页 |
| ·纤维素的结构 | 第21-22页 |
| ·纤维素的微生物降解 | 第22-29页 |
| ·纤维素降解微生物 | 第22-24页 |
| ·纤维素降解策略 | 第24-27页 |
| ·纤维素吸附 | 第27-29页 |
| ·滑动 | 第29-32页 |
| ·Mvxococcus xanthus | 第30页 |
| ·Flavobacterium johnsoniae | 第30-32页 |
| ·Cytophaga hutchinsonii研究背景 | 第32-36页 |
| ·Cytophaga hutchinsonii的特征与分类学地位 | 第32-34页 |
| ·C.hutchinsonii的研究进展 | 第34-36页 |
| ·论文的立题和工作思路 | 第36-38页 |
| 第二章 Himar的插入突变和回补技术的建立 | 第38-57页 |
| ·材料和方法 | 第38-47页 |
| ·菌种 | 第38页 |
| ·培养基 | 第38-39页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第39-40页 |
| ·实验中用到的质粒与引物 | 第40-41页 |
| ·接合转化 | 第41页 |
| ·E.coli感受态制备及热激转化 | 第41-42页 |
| ·C.hutchinsonii的感受态的制备及电击转化 | 第42-43页 |
| ·分子生物学常用操作及常用反应体系 | 第43-44页 |
| ·反向PCR | 第44页 |
| ·Southern blot | 第44-47页 |
| ·结果 | 第47-55页 |
| ·C.hutchinsonii的接合转化 | 第47-48页 |
| ·HimarEm3对C.hutchinsonii的转座插入及插入情况分析 | 第48-50页 |
| ·抗生素抗性基因cfxA、tetQ、cat在C.hutchinsonii中表达 | 第50-55页 |
| ·讨论 | 第55-57页 |
| 第三章 CHU 0134基因功能研究 | 第57-79页 |
| ·材料和方法 | 第57-66页 |
| ·菌种 | 第57页 |
| ·培养基与缓冲液 | 第57-58页 |
| ·试剂与仪器 | 第58-59页 |
| ·实验中用到的质粒与引物 | 第59页 |
| ·SDS-PAGE | 第59-60页 |
| ·蛋白浓度测定-考马斯亮蓝法 | 第60-61页 |
| ·接合转化与纤维素吸附突变株的筛选 | 第61页 |
| ·Southern blot与反向PCR | 第61页 |
| ·C.hutchinsonii生长曲线测定 | 第61页 |
| ·菌体对纤维素的吸附率的测定 | 第61-62页 |
| ·C.hutchinsonii菌落在软、硬琼脂表面的扩散 | 第62页 |
| ·显微观察C.hutchinsonii菌落扩散 | 第62-63页 |
| ·纤维素酶酶活测定及菌体各组分样品的制备 | 第63-64页 |
| ·胞外分泌蛋白的SDS-PAGE | 第64页 |
| ·外膜蛋白的提取、纤维素吸附外膜蛋白的SDS-PAGE及质谱鉴定 | 第64-65页 |
| ·蛋白质谱鉴定 | 第65-66页 |
| ·蛋白序列分析软件 | 第66页 |
| ·结果 | 第66-77页 |
| ·转座子HimarEm3的插入突变及纤维素吸附突变株的筛选 | 第66页 |
| ·纤维素吸附突变株A-4的表型测定 | 第66-70页 |
| ·纤维素吸附外膜蛋白 | 第70-72页 |
| ·胞外分泌蛋白 | 第72-73页 |
| ·突变株A-4中HimarEm3的插入基因及临近基因分析 | 第73-75页 |
| ·突变株A-4的基因回补 | 第75-76页 |
| ·CHU_0134蛋白序列分析 | 第76-77页 |
| ·讨论 | 第77-79页 |
| 第四章 CHU 1277基因功能研究 | 第79-100页 |
| ·材料和方法 | 第79-83页 |
| ·菌种 | 第79页 |
| ·培养基、缓冲液、试剂、仪器 | 第79-80页 |
| ·实验中用到的质粒与引物 | 第80页 |
| ·基因插入失活 | 第80-81页 |
| ·总RNA的提取与反转求 | 第81页 |
| ·表面蛋白的提取 | 第81页 |
| ·外膜蛋白的提取、纤维素吸附外膜蛋白的SDS-PAGE及质谱分析 | 第81-82页 |
| ·生长曲线、滤纸降解、琼脂表面菌落扩散、纤维素酶活测定 | 第82页 |
| ·再生无定形纤维素(RAC)的制备 | 第82页 |
| ·C.hutchinsonii对纤维素类底物的利用 | 第82页 |
| ·C.hutchinsonii纤维二糖培养基中的糖分变化分析 | 第82-83页 |
| ·C.hutchinsonii菌体及外膜蛋白的纤维二糖水解分析 | 第83页 |
| ·C hutchinsonii菌体及外膜蛋白的纤维素水解产物分析 | 第83页 |
| ·结果 | 第83-96页 |
| ·CHU 1277基因插入失活 | 第83-86页 |
| ·CHU 1277插入失活突变株(A1277)的表型 | 第86-90页 |
| ·△1277对纤维素类底物的利用 | 第90页 |
| ·纤维二糖的利用 | 第90-94页 |
| ·纤维素的水解 | 第94-96页 |
| ·讨论 | 第96-100页 |
| 第五章 CHU 1797基因功能研究 | 第100-115页 |
| ·材料和方法 | 第100-103页 |
| ·菌种 | 第100页 |
| ·培养基、缓冲液、试剂、仪器 | 第100-101页 |
| ·实验中用到的质粒与引物 | 第101页 |
| ·转座子HimarEm3插入突变及菌落扩散突变株的筛选 | 第101页 |
| ·Southern blot与反向PCR | 第101页 |
| ·生长曲线、纤维素吸附、降解及琼脂表面菌落扩散 | 第101-102页 |
| ·显微观察C.hutchinsonii在玻璃表面的滑动 | 第102页 |
| ·突变株Cgly-2的CHU_1797基因回补 | 第102页 |
| ·C.hutchinsonii在软琼脂表面的趋糖扩散 | 第102-103页 |
| ·纤维素水解圈实验 | 第103页 |
| ·软琼脂表面滤纸降解实验 | 第103页 |
| ·扫描电镜观察C.hutchinsonii在纤维素纤维上的排列 | 第103页 |
| ·结果 | 第103-112页 |
| ·菌落扩散缺陷突变株Cgly-2的筛选及菌落扩散表型 | 第103-105页 |
| ·突变株Cgly-2插入基因分析 | 第105-107页 |
| ·突变株Cgly-2的基因回补 | 第107页 |
| ·突变株Cgly-2其它表型分析 | 第107-109页 |
| ·菌落扩散能力缺陷的影响 | 第109-110页 |
| ·菌落扩散能力不影响纤维素降解 | 第110-112页 |
| ·讨论 | 第112-115页 |
| 全文总结及展望 | 第115-118页 |
| 参考文献 | 第118-128页 |
| 在读期间论文发表及专利申请情况 | 第128-129页 |
| 致谢 | 第129-130页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第130页 |
