| 目录 | 第1-6页 |
| 摘要 | 第6-10页 |
| ABSTRACT | 第10-13页 |
| 符号说明 | 第13-14页 |
| 第一章 前言 | 第14-26页 |
| 第二章 Tse1及Tse1-Tsi1复合物的表达,纯化和结晶 | 第26-48页 |
| ·实验材料与方法 | 第26-34页 |
| ·表达菌株、基因组和载体 | 第26-27页 |
| ·工具酶和试剂 | 第27页 |
| ·主要仪器设备 | 第27-28页 |
| ·试剂的配制 | 第28-29页 |
| ·实验方法 | 第29-34页 |
| ·实验结果 | 第34-42页 |
| ·Tse1蛋白的分离纯化 | 第34-37页 |
| ·Tsi1蛋白的分离纯化 | 第37-39页 |
| ·Tse1和Tsi1复合物的分离纯化 | 第39-41页 |
| ·Se-Met标记Tse1全长蛋白(Se-Met-Tse1)的分离纯化 | 第41-42页 |
| ·结晶条件筛选和晶体的优化 | 第42-47页 |
| ·结晶方法—悬滴气相扩散法 | 第42-43页 |
| ·蛋白的晶体生长 | 第43-47页 |
| ·本章小结 | 第47-48页 |
| 第三章 晶体结构的解析 | 第48-72页 |
| ·衍射数据的收集与处理 | 第48-52页 |
| ·晶体衍射的原理 | 第48-50页 |
| ·衍射数据的收集和处理 | 第50-52页 |
| ·数据处理的结果 | 第52-60页 |
| ·Tse1母体(Tse1 native)蛋白晶体 | 第52-55页 |
| ·Tse1硒代(Se-Met-Tse1)蛋白晶体 | 第55-57页 |
| ·Tse1蛋白晶体衍射数据最终处理结果 | 第57-58页 |
| ·Tse1-Tsi1复合物蛋白晶体 | 第58-60页 |
| ·相位问题 | 第60-62页 |
| ·电子密度图的解析与模型构建 | 第62页 |
| ·结构精修 | 第62-63页 |
| ·最终结构模型的质量评价 | 第63-71页 |
| ·本章小结 | 第71-72页 |
| 第四章 Tse1及Tse-Tsi1复合物晶体结构分析及功能研究 | 第72-108页 |
| ·实验材料 | 第72-73页 |
| ·表达菌株,表达载体 | 第72页 |
| ·主要试剂耗材和仪器 | 第72-73页 |
| ·实验方法 | 第73-78页 |
| ·定点突变 | 第73-74页 |
| ·生长曲线测定 | 第74-76页 |
| ·凝胶过滤分析(Gel-filtration assay) | 第76页 |
| ·表面等离子共振(surface plasmon resonance,SPR) | 第76-77页 |
| ·动态光散射(dynamic light scattering,DLS) | 第77页 |
| ·等温滴定量热法(Isothermal titration calorimetry,ITC) | 第77-78页 |
| ·结果 | 第78-97页 |
| ·三维结构描述 | 第78-91页 |
| ·Tse1和Tsi1亲和力分析 | 第91-95页 |
| ·生长曲线测定 | 第95-97页 |
| ·讨论 | 第97-105页 |
| ·Tse1与NlpC/P60家族 | 第97-98页 |
| ·Tsi1与木瓜蛋白酶抑制剂 | 第98页 |
| ·Tsi1抑制Tse1酰胺酶活性的机制 | 第98-99页 |
| ·Tsi1抑制Tse1酰胺酶活性的特异性 | 第99-102页 |
| ·Tsi1抑制Tse1的机制总结 | 第102-103页 |
| ·Tse1和T6SS | 第103-104页 |
| ·Tse1和靶向药物设计 | 第104-105页 |
| ·本章小结 | 第105-108页 |
| 第五章 铜绿假单胞菌T6SS效应蛋白Tsc3及其免疫蛋白Tsi3初步晶体学研究 | 第108-124页 |
| ·实验材料与方法 | 第110-111页 |
| ·构建Tse3和Tsi3亚克隆 | 第110页 |
| ·Tse3和Tsi3蛋白表达纯化策略 | 第110-111页 |
| ·蛋白分离纯化结果 | 第111-114页 |
| ·Tse3蛋白的分离纯化 | 第111-112页 |
| ·Tsi3蛋白的分离纯化 | 第112-113页 |
| ·Tse3和Tsi3复合物的分离纯化 | 第113-114页 |
| ·Se-Met标记Tse3蛋白(Se-Met-Tse3)的分离纯化 | 第114页 |
| ·晶体生长及优化结果 | 第114-117页 |
| ·Tse3母体蛋白的晶体生长 | 第115-116页 |
| ·Se-Met标记Tse3蛋白(Se-Met-Tse3)晶体生长 | 第116页 |
| ·Tse3和Tsi3复合物晶体生长 | 第116-117页 |
| ·衍射数据的收集和处理 | 第117-120页 |
| ·Tse3母体(Tsc3(1-402)native)蛋白晶体 | 第117-119页 |
| ·Sc-Mct标记Tsc3蛋白(Se-Met-Tsc3)晶体 | 第119页 |
| ·Tse3(1-402)/Tsi3复合物晶体 | 第119页 |
| ·分子置换法解析Tse3(1-402)三维结构 | 第119-120页 |
| ·讨论 | 第120-122页 |
| ·本章小结 | 第122-124页 |
| 全文总结 | 第124-128页 |
| 附录 | 第128-130页 |
| 参考文献 | 第130-138页 |
| 致谢 | 第138-140页 |
| 攻读博士学位期间发表论文 | 第140-141页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第141页 |
