| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-11页 |
| 符号说明 | 第11-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-37页 |
| 1 植物中的黄酮 | 第16-28页 |
| ·黄酮的种类和结构 | 第16-17页 |
| ·植物中黄酮的作用 | 第17-19页 |
| ·控制花和果实色素的形成 | 第17页 |
| ·参与植物有性繁殖 | 第17-18页 |
| ·调节种子的萌发 | 第18页 |
| ·与生物因素的互作 | 第18-19页 |
| ·参与植物抗逆 | 第19页 |
| ·动物中黄酮的生物学功能 | 第19-21页 |
| ·抗氧化作用 | 第20页 |
| ·预防和治疗癌症 | 第20-21页 |
| ·防护心血管作用 | 第21页 |
| ·其它作用 | 第21页 |
| ·植物黄酮的合成代谢 | 第21-27页 |
| ·苯丙烷类代谢途径 | 第22-23页 |
| ·黄酮醇和花青素合成的共同途径 | 第23-25页 |
| ·黄酮醇合成支路 | 第25-26页 |
| ·花青素合成支路 | 第26页 |
| ·黄酮的糖基化和转运 | 第26-27页 |
| ·黄酮合成相关酶基因的代谢工程 | 第27-28页 |
| 2 苦荞简介 | 第28-34页 |
| ·荞麦的种类和分布 | 第28-29页 |
| ·苦荞的形态和栽培历史 | 第29-30页 |
| ·苦荞的分布和进化 | 第30-31页 |
| ·苦荞的育种 | 第31页 |
| ·苦荞的营养成分 | 第31-32页 |
| ·苦荞中的黄酮 | 第32-33页 |
| ·苦荞黄酮代谢研究进展 | 第33-34页 |
| 3 本研究的目的和内容 | 第34-37页 |
| ·立项依据 | 第34-35页 |
| ·目的意义 | 第35-36页 |
| ·技术路线 | 第36-37页 |
| 第二章 苦荞黄酮合成相关酶基因的克隆 | 第37-62页 |
| 1 引言 | 第37页 |
| 2 材料和方法 | 第37-46页 |
| ·材料 | 第37-39页 |
| ·植物材料和菌株 | 第37-38页 |
| ·主要试剂和药品 | 第38页 |
| ·溶液 | 第38页 |
| ·培养基 | 第38-39页 |
| ·主要仪器 | 第39页 |
| ·方法 | 第39-46页 |
| ·RNA实验环境的清洁 | 第39页 |
| ·苦荞花RNA的提取 | 第39-40页 |
| ·总RNA浓度和纯度检测 | 第40-41页 |
| ·第一链cDNA的制备 | 第41-42页 |
| ·苦荞黄酮合成相关酶基因的克隆 | 第42-46页 |
| ·序列分析 | 第46页 |
| 3 结果与分析 | 第46-59页 |
| ·苦荞花总RNA的提取 | 第46页 |
| ·苦荞FtF3'H、FtC4H、Ft4CL和FtGST ORF的克隆 | 第46-50页 |
| ·FtF3'H的克隆 | 第46-47页 |
| ·FtC4H的克隆 | 第47-48页 |
| ·Ft4CL的克隆 | 第48-49页 |
| ·FtGST的克隆 | 第49-50页 |
| ·苦荞3GT片段的克隆 | 第50页 |
| ·苦荞FtPAL等7个基因ORF的克隆 | 第50-54页 |
| ·FtPAL ORF的克隆 | 第50-51页 |
| ·FtCHS ORF的克隆 | 第51页 |
| ·FtCHI ORF的克隆 | 第51-52页 |
| ·FtF3H ORF的克隆 | 第52页 |
| ·FtFLS ORF的克隆 | 第52-53页 |
| ·FtDFR ORF的克隆 | 第53页 |
| ·FtANS ORF的克隆 | 第53-54页 |
| ·苦荞黄酮合成相关酶基因的序列分析 | 第54-57页 |
| ·苦荞黄酮合成相关酶进化树的构建 | 第57-59页 |
| 4 讨论 | 第59-62页 |
| ·苦荞黄酮合成相关酶基因的同源克隆 | 第59页 |
| ·苦荞黄酮合成相关酶基因的序列分析 | 第59-60页 |
| ·苦荞黄酮合成相关酶蛋白进化树的构建 | 第60-62页 |
| 第三章 芽期苦荞黄酮合成相关酶基因对UV-B、寒冷和干旱胁迫的响应 | 第62-89页 |
| 1. 引言 | 第62页 |
| 2 材料和方法 | 第62-67页 |
| ·材料 | 第62-63页 |
| ·植物材料 | 第62页 |
| ·主要试剂和药品 | 第62-63页 |
| ·溶液 | 第63页 |
| ·主要仪器 | 第63页 |
| ·方法 | 第63-66页 |
| ·苦荞的萌发 | 第63页 |
| ·胁迫条件的选择 | 第63-64页 |
| ·苦荞子叶和胚轴RNA的检测 | 第64页 |
| ·苦荞子叶和胚轴RNA的提取和cDNA第一链的制备 | 第64页 |
| ·半定量RT-PCR | 第64-65页 |
| ·苦荞总黄酮的提取和测定 | 第65-66页 |
| ·数据的分析和处理 | 第66-67页 |
| 3 结果与分析 | 第67-83页 |
| ·苦荞子叶和胚轴总RNA的提取 | 第67页 |
| ·总RNA的浓度测定 | 第67-68页 |
| ·苦荞黄酮合成相关酶基因表达量分析 | 第68-79页 |
| ·FtPAL表达量分析 | 第68-70页 |
| ·FtCHS表达量分析 | 第70-71页 |
| ·FtCHI表达量分析 | 第71-73页 |
| ·FtF3H表达量分析 | 第73-74页 |
| ·FtFLS表达量分析 | 第74-75页 |
| ·FtDFR表达量分析 | 第75-77页 |
| ·FtANS表达量分析 | 第77-78页 |
| ·3GT表达量分析 | 第78-79页 |
| ·逆境胁迫后苦荞芽形态变化 | 第79页 |
| ·芦丁标准曲线的建立 | 第79-80页 |
| ·苦荞子叶和胚轴中总黄酮的测定 | 第80-81页 |
| ·不同胁迫条件处理前后子叶和胚轴总黄酮与黄酮合成相关酶基因表达相关性分析 | 第81-82页 |
| ·不同胁迫条件处理过程中子叶和胚轴总黄酮与黄酮合成相关酶基因表达相关性分析 | 第82-83页 |
| 4 讨论 | 第83-87页 |
| ·半定量RT-PCR调查对象的选择 | 第83-84页 |
| ·逆境胁迫下苦荞子叶和胚轴中的总黄酮 | 第84-85页 |
| ·胁迫过程中总黄酮含量变化趋势 | 第85-86页 |
| ·逆境胁迫下黄酮合成相关酶基因的表达 | 第86-87页 |
| 5 黄酮合成相关酶基因的表达与黄酮含量相关性分析 | 第87-89页 |
| 第四章 苦荞黄酮合成关键酶基因FTPAL和FTFLS的分子鉴定和功能验证 | 第89-114页 |
| 1 引言 | 第89页 |
| 2 材料和方法 | 第89-98页 |
| ·材料 | 第89-91页 |
| ·材料和菌株 | 第90页 |
| ·主要试剂和药品 | 第90页 |
| ·溶液 | 第90-91页 |
| ·主要仪器 | 第91页 |
| ·方法 | 第91-98页 |
| ·FtPAL和FtFLS的分子鉴定 | 第91页 |
| ·Southern blot探针的制备 | 第91-92页 |
| ·FtPAL和FtFLS的Southern blot | 第92-93页 |
| ·pET表达载体的构建 | 第93-94页 |
| ·FtPAL和FtFLS的原核表达 | 第94-95页 |
| ·FtFLS的亲和层析 | 第95页 |
| ·重组蛋白的SDS-PAGE | 第95-96页 |
| ·考马斯亮蓝G-250法测定蛋白含量 | 第96页 |
| ·重组蛋白的酶活测定 | 第96-97页 |
| ·重组蛋白的酶活的定性鉴定(TLC法) | 第97-98页 |
| 3 结果与分析 | 第98-111页 |
| ·FtPAL和FtFLS氨基酸序列的多重序列比对 | 第98-100页 |
| ·FtPAL和FtFLS三维结构分析 | 第100-102页 |
| ·FtPAL和FtFLS进化树的构建 | 第102-104页 |
| ·FtPAL和FtFLS拷贝数分析 | 第104-105页 |
| ·重组FtPAL的活性鉴定 | 第105-107页 |
| ·pET-30b(+)-FtPAL非融合表达载体的构建 | 第105-106页 |
| ·FtPAL的诱导表达 | 第106页 |
| ·FtPAL的活性鉴定 | 第106-107页 |
| ·重组FtFLS的活性鉴定 | 第107-111页 |
| ·pET-30b(+)-FtFLS融合表达载体的构建 | 第107-108页 |
| ·FtFLS的诱导表达 | 第108-109页 |
| ·FtFLS活性的定性鉴定 | 第109-110页 |
| ·槲皮素和山奈酚标准曲线的建立 | 第110页 |
| ·FtFLS的纯化和活性测定 | 第110-111页 |
| 4 讨论 | 第111-114页 |
| ·PAL的结构和功能 | 第111-112页 |
| ·FLS的结构和功能 | 第112-114页 |
| 结论与创新点 | 第114-116页 |
| 1. 论文取得的结果 | 第114-115页 |
| 2. 本研究的创新点 | 第115-116页 |
| 参考文献 | 第116-127页 |
| 致谢 | 第127-128页 |
| 攻读学位期间发表文章 | 第128页 |
