| 摘要 | 第1-3页 |
| Abstract | 第3-5页 |
| 中文文摘 | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-10页 |
| 绪论 | 第10-36页 |
| 第一节 微生物脂肪酶的研究进展 | 第10-17页 |
| ·微生物脂肪酶的来源 | 第10-11页 |
| ·微生物脂肪酶的酶学特性 | 第11-13页 |
| ·脂肪酶固定化研究进展 | 第13-16页 |
| ·脂肪酶的应用价值 | 第16-17页 |
| 第二节 定向进化在脂肪酶改造中的应用 | 第17-21页 |
| ·定向进化概述 | 第17-19页 |
| ·定点突变 | 第19-20页 |
| ·定向进化 | 第20-21页 |
| 第三节 高通量筛选方法在定向进化中的应用 | 第21-32页 |
| ·酶定向进化中常用的高通量筛选方法 | 第22-30页 |
| ·几种高通量筛选方法的比较 | 第30-31页 |
| ·高通量筛选方法存在的问题以及发展前景 | 第31-32页 |
| 第四节 本论文的研究思路及主要内容 | 第32-36页 |
| 第一章 扩展青霉TS414脂肪酶的克隆与原核表达 | 第36-50页 |
| 第一节 前言 | 第36-37页 |
| 第二节 材料和方法 | 第37-38页 |
| ·菌种和质粒 | 第37页 |
| ·试剂及仪器设备 | 第37-38页 |
| ·培养基 | 第38页 |
| ·引物 | 第38页 |
| 第三节 实验方法 | 第38-43页 |
| ·扩展青霉TS414RNA的提取 | 第38-39页 |
| ·反转录以及脂肪酶cDNA的扩增 | 第39-40页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第40页 |
| ·感受态大肠杆菌的制备以及转化 | 第40-41页 |
| ·大肠杆菌阳性克隆子的筛选与鉴定 | 第41-42页 |
| ·大肠杆菌的诱导表达 | 第42页 |
| ·脂肪酶活力的测定方法 | 第42-43页 |
| 第四节 结果与讨论 | 第43-48页 |
| ·表达载体pGEX-4T-1-PEL的构建 | 第43-46页 |
| ·脂肪酶的原核表达 | 第46-47页 |
| ·脂肪酶蛋白的提取 | 第47-48页 |
| 第五节 小结 | 第48-50页 |
| 第二章 高通量筛选方法的建立及扩展青霉脂肪酶的定向进化 | 第50-62页 |
| 第一节 前言 | 第50-52页 |
| 第二节 材料和方法 | 第52-53页 |
| ·菌种和质粒 | 第52页 |
| ·试剂及仪器设备 | 第52-53页 |
| ·培养基 | 第53页 |
| ·引物 | 第53页 |
| 第三节 实验方法 | 第53-55页 |
| ·扩展青霉脂肪酶随机突变体文库的构建 | 第53-54页 |
| ·突变体文库的筛选 | 第54-55页 |
| 第四节 结果与讨论 | 第55-60页 |
| ·高通量筛选方法的建立 | 第55-57页 |
| ·扩展青霉脂肪酶突变体库的构建 | 第57-58页 |
| ·突变体文库的筛选 | 第58-60页 |
| 第五节 小结 | 第60-62页 |
| 第三章 突变体E-V72A脂肪酶在毕赤酵母GS115中的表达 | 第62-78页 |
| 第一节 前言 | 第62页 |
| 第二节 材料和方法 | 第62-64页 |
| ·菌种和质粒 | 第62页 |
| ·试剂及仪器设备 | 第62-63页 |
| ·培养基 | 第63-64页 |
| 第三节 实验方法 | 第64-67页 |
| ·酵母表达载体pPIC3.5k-PEL(E-V72A)的构建 | 第64-65页 |
| ·毕赤酵母GS115感受态的制备及转化 | 第65-66页 |
| ·酵母阳性克隆子的筛选与鉴定 | 第66页 |
| ·酵母的诱导表达 | 第66-67页 |
| 第四节 结果与讨论 | 第67-76页 |
| ·酵母表达载体pPIC3.5k-PEL(E-V72A)的构建 | 第67-68页 |
| ·转化甲醇型酵母GS115 | 第68-69页 |
| ·阳性克隆的筛选与鉴定 | 第69页 |
| ·脂肪酶的诱导表达 | 第69-71页 |
| ·重组脂肪酶性质的鉴定 | 第71-76页 |
| 第五节 小结 | 第76-78页 |
| 第四章 总结与展望 | 第78-80页 |
| ·创新点 | 第78页 |
| ·总结 | 第78-79页 |
| ·展望 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-88页 |
| 致谢 | 第88-90页 |
| 个人简历 | 第90-91页 |
