| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-13页 |
| 第1章 引言 | 第13-37页 |
| ·Wnt 及其信号转导通路 | 第13-20页 |
| ·Wnt 蛋白 | 第13-14页 |
| ·Wnt 信号通路 | 第14-15页 |
| ·Wnt 信号转导通路成分及其功能 | 第15-19页 |
| ·Wnt 信号通路在肿瘤中的作用 | 第19-20页 |
| ·TGFβ及其信号转导通路 | 第20-31页 |
| ·TGF-β配体 | 第23-24页 |
| ·TGF-β受体类型、结构及功能 | 第24-27页 |
| ·Smads 蛋白的结构及功能 | 第27-29页 |
| ·Smad 蛋白的DNA 结合活性和转录调节功能 | 第29-30页 |
| ·非依赖于Smads 的TGFβ信号 | 第30-31页 |
| ·Dapper 蛋白家族的研究 | 第31-36页 |
| ·Dapper/Frodo 蛋白研究概述 | 第31-33页 |
| ·Dapper/Frodo 蛋白一级序列保守性分析 | 第33-36页 |
| ·本课题的研究目的和意义 | 第36-37页 |
| 第2章 材料与方法 | 第37-50页 |
| ·试验仪器设备及试验材料 | 第37-39页 |
| ·主要的试验仪器设备 | 第37页 |
| ·试验材料 | 第37-38页 |
| ·溶液配置 | 第38-39页 |
| ·实验方法 | 第39-50页 |
| ·质粒构建 | 第39-41页 |
| ·蛋白纯化 | 第41页 |
| ·Dapper1 和Dapper2 特异性多克隆抗体的制备 | 第41-43页 |
| ·细胞培养 | 第43-44页 |
| ·细胞转染 | 第44-45页 |
| ·免疫印迹 | 第45页 |
| ·免疫共沉淀 | 第45-46页 |
| ·报告基因检测 | 第46-47页 |
| ·免疫荧光 | 第47-48页 |
| ·基因组DNA 的提取 | 第48页 |
| ·蛋白（抗体）浓度测定 | 第48-49页 |
| ·细胞RNA 提取和RT-PCR 检测 | 第49-50页 |
| 第3章 斑马鱼Dapper2 调节TGFβ信号 | 第50-57页 |
| ·班马鱼Dapper2 抑制TGFβ信号 | 第50-51页 |
| ·班马鱼Dapper2 结合TGFβ/Nodal 受体 | 第51-52页 |
| ·班马鱼Dapper2 促进TGFβ/Nodal 受体内吞和溶酶体降解 | 第52-54页 |
| ·班马鱼Dapper2 抑制Smad2 的磷酸化 | 第54-55页 |
| ·讨论 | 第55-56页 |
| ·小结 | 第56-57页 |
| 第4章 Dapper2 调节TGFβ信号具有进化保守性 | 第57-67页 |
| ·小鼠Dapper2 抑制TGFβ信号 | 第57-59页 |
| ·过量表达Dapper2 抑制TGFβ报告基因的激活 | 第57-58页 |
| ·siRNA 抑制内源Dapper2 的表达上调TGFβ报告基因 | 第58-59页 |
| ·小鼠Dapper2 结合 TGFβI 型受体促进其溶酶体降解 | 第59-61页 |
| ·mDpr2 结合TGFβI 型受体 | 第59-60页 |
| ·mDpr2 诱导TGFβI 型受体溶酶体降解 | 第60-61页 |
| ·mDpr2 在TGFβ信号通路中功能区域的鉴定 | 第61-65页 |
| ·m Dpr2 缺失突变体的构建及表达 | 第61-62页 |
| ·m Dpr2 全长以及缺失突变体对TGFβ信号的作用 | 第62页 |
| ·m Dpr2 全长以及缺失突变体对TGFβ信号的作用 | 第62-65页 |
| ·Dapper2 抗体的制备 | 第65页 |
| ·抗原制备（详见材料与方法） | 第65页 |
| ·抗体制备及检测（详见材料与方法） | 第65页 |
| ·讨论 | 第65-66页 |
| ·小结 | 第66-67页 |
| 第5章 Dapper1 调控Wnt 信号转导 | 第67-86页 |
| ·Dapper1 全长表达载体的构建 | 第67-68页 |
| ·人Dapper1 编码区全长序列的克隆 | 第67页 |
| ·小鼠Dapper1 编码区全长序列的克隆 | 第67-68页 |
| ·Dapper1 抗体的制备 | 第68页 |
| ·抗原制备（详见材料与方法） | 第68页 |
| ·抗体制备及检测（详见材料与方法） | 第68页 |
| ·初步鉴定Dapper1 和Dapper2 全长在TGFβ/Wnt 信号中的作用 | 第68-71页 |
| ·Dapper1 和Dapper2 在TGFβ信号中的不同作用 | 第68-69页 |
| ·Dapper1 和Dapper2 在Wnt 信号中的不同作用 | 第69-71页 |
| ·Dapper1 和Dapper2 全长在其他信号通路中的作用 | 第71页 |
| ·Dapper1 抑制Wnt1 和Dvl2 激活的经典Wnt 信号 | 第71-75页 |
| ·过表达Dapper1 抑制Wnt1 和Dvl2 对Wnt 报告基因的激活 | 第71-73页 |
| ·Dapper1 siRNA 和Dvl2 的表达回复Dapper1 对Wnt 信号的抑制 | 第73-75页 |
| ·Dapper1 与Dvl2 的蛋白－蛋白相互作用 | 第75-81页 |
| ·内源Dapper1 与Dvl2 的结合 | 第75页 |
| ·内源Dapper1 的定位以及与Dvl2 的共定位 | 第75-77页 |
| ·Dapper1 和Dvl2 相互作用区段的检测 | 第77-81页 |
| ·Dapper1 诱导Dvl2 蛋白的溶酶体降解 | 第81-83页 |
| ·Dapper1 结合Wnt 下游GSK3β、β-catenin、LEF-1 等关键因子 | 第83页 |
| ·Dapper1 结合Dapper2 | 第83-84页 |
| ·讨论 | 第84-85页 |
| ·小结 | 第85-86页 |
| 第6章 酵母双杂交筛选与Dapper1 和Dapper2 相互作用的蛋白 | 第86-97页 |
| ·Dapper1 和Dapper2 的结构区域与功能 | 第86-90页 |
| ·Dapper1 和Dapper2 在缺失突变体的构建 | 第86-88页 |
| ·Dapper1 和Dapper2 缺失突变体的功能 | 第88-90页 |
| ·Dapper1 和Dapper2 作用小结 | 第90页 |
| ·Dapper1 和Dapper2 的深入研究策略 | 第90页 |
| ·Dapper1 和Dapper2 酵母双杂交的开展 | 第90-95页 |
| ·酵母双杂交的原理以及概述 | 第90-91页 |
| ·经典的酵母双杂交成果的概述 | 第91-93页 |
| ·Dapper 诱饵蛋白的构建表达以及酵母双杂交策略的选择 | 第93-95页 |
| ·Dapper1 和Dapper2 酵母双杂交结果以及分析 | 第95-96页 |
| ·讨论 | 第96页 |
| ·小结 | 第96-97页 |
| 结论 | 第97-98页 |
| 参考文献 | 第98-111页 |
| 致谢 | 第111-112页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第112-113页 |
