| 目录 | 第1-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 英文缩略语对照表 | 第11-13页 |
| 前言 | 第13-18页 |
| 第一部分:人Fcα/μR在毕赤酵母中的表达及纯化 | 第18-63页 |
| 一、材料 | 第18-24页 |
| 1.主要化学试剂 | 第18-19页 |
| 2.抗体 | 第19页 |
| 3.菌株 | 第19页 |
| 4.质粒 | 第19-21页 |
| 5.引物 | 第21页 |
| 6.Pichia pastoris用培养基 | 第21-22页 |
| 7.工具酶、分子量标准及试剂盒 | 第22-23页 |
| 8.主要仪器设备 | 第23页 |
| 9.常用分析软件 | 第23-24页 |
| 二、方法 | 第24-45页 |
| 1.表达质粒构建 | 第24-31页 |
| 2.电转 | 第31-33页 |
| 3.目的蛋白的诱导表达及检测 | 第33-40页 |
| 4.诱导条件的优化 | 第40页 |
| 5.目的蛋白的纯化 | 第40-45页 |
| 三、结果 | 第45-59页 |
| 1.Fcα/μR-EC23的表达 | 第45-47页 |
| 2.Fcα/μR-EC23的诱导条件的优化 | 第47-48页 |
| 3.酵母表达的Fcα/μR-EC23用抗体柱亲和纯化 | 第48-50页 |
| 4.配体柱亲和提纯Fcα/μR-EC23 | 第50-51页 |
| 5.CM-Sepharose提纯Fcα/μR-EC23 | 第51-53页 |
| 6.DEAE-Sepharose提纯Fcα/μR-EC23 | 第53-54页 |
| 7.Fcα/μR-EC123-MycHis_6的表达 | 第54-55页 |
| 8.Fcα/μR-EC123-MycHis_6诱导条件的优化 | 第55-56页 |
| 9.Fcα/μR-EC123-MycHis_6的纯化和鉴定 | 第56-59页 |
| 四、讨论 | 第59-63页 |
| 1.Fcα/μR-EC23的表达及纯化 | 第59-60页 |
| 2.Fcα/μR-EC123-MycHis_6的表达、纯化及鉴定 | 第60页 |
| 3.外源蛋白在酵母中的降解问题 | 第60-63页 |
| 第二部分:人Fcα/μR在CHO细胞中的表达及胞内定位 | 第63-85页 |
| 一、材料 | 第63-65页 |
| 1.主要化学试剂 | 第63页 |
| 2.抗体 | 第63页 |
| 3.质粒 | 第63-64页 |
| 4.细胞株 | 第64-65页 |
| 5.引物 | 第65页 |
| 6.仪器设备 | 第65页 |
| 二、方法 | 第65-75页 |
| 1.抗体标记 | 第65-66页 |
| 2.细胞的培养、冻存和复苏 | 第66-67页 |
| 3.CHO细胞的转染 | 第67-69页 |
| 4.Western Blot检测人Fcα/μR在CHO细胞中的表达 | 第69页 |
| 5.细胞组织化学染色检测人Fcα/μR在CHO细胞中的表达 | 第69-70页 |
| 6.共聚焦荧光显微镜检测人Fcα/μR在CHO细胞的定位 | 第70-71页 |
| 7.人Fcα/μR在CHO细胞中的稳定株筛选 | 第71-72页 |
| 8.RT-PCR | 第72-73页 |
| 9.流式细胞术检测CHO细胞表达的Fcα/μR的功能 | 第73-75页 |
| 三、结果 | 第75-82页 |
| 1.真核转染用载体的构建 | 第75-76页 |
| 2.Western Blot检测人Fcα/μR在CHO细胞中的表达 | 第76-77页 |
| 3.细胞组织化学检测人Fcα/μR在CHO细胞中的表达 | 第77页 |
| 4.共聚焦荧光显微镜检测人Fcα/μR在CHO细胞的定位 | 第77-78页 |
| 5.CHO-Fcα/μR的鉴定 | 第78-80页 |
| 6.流式细胞术检测CHO细胞表达的Fcα/μR的功能 | 第80-82页 |
| 四、讨论 | 第82-85页 |
| 1.为什么人Fcα/μR不表达于细胞表面? | 第82页 |
| 2.人Fcα/μR是不是IgA和IgM的受体? | 第82-84页 |
| 3.CHO-Fcα/μR稳定株的构建 | 第84-85页 |
| 第三部分:人Fcα/μR和pIgR在人乳腺细胞MCF-7中的表达 | 第85-102页 |
| 一、材料 | 第85-87页 |
| 1.主要化学试剂 | 第85页 |
| 2.抗体 | 第85页 |
| 3.细胞株 | 第85页 |
| 4.质粒 | 第85-86页 |
| 5.引物 | 第86-87页 |
| 二、方法 | 第87-91页 |
| 1.pET-Fcα/μR-EC12和pET-pIgR-D1表达载体的构建 | 第87页 |
| 2.Fcα/μR的EC12和pIgR的D1结构域在E.coli中的表达及纯化 | 第87-88页 |
| 3.兔多克隆抗体的制备 | 第88-89页 |
| 4.兔多抗血清的鉴定 | 第89页 |
| 5.抗原柱吸收交叉和纯化多抗 | 第89-90页 |
| 6.免疫荧光检测人Fcα/μR和pIgR在MCF-7上的表达 | 第90-91页 |
| 三、结果 | 第91-98页 |
| 1.RT-PCR检测人Fcα/μR和pIgR在MCF-7上的表达 | 第91页 |
| 2.FACS检测人Fcα/μR在MCF-7上的表达 | 第91页 |
| 3.细胞免疫组化检测人Fcα/μR在MCF-7上的表达 | 第91-92页 |
| 4.兔抗人Fcα/μR和pIgR多克隆抗体的制备和纯化 | 第92-95页 |
| 5.免疫荧光检测人Fcα/μR和pIgR在MCF-7上的表达 | 第95-96页 |
| 6.FACS检测MCF-7细胞与人IgA和IgM的结合 | 第96-98页 |
| 四、讨论 | 第98-102页 |
| 1.Fcα/μR和pIgR在MCF-7上的表达 | 第99-100页 |
| 2.MCF-7特异性结合IgA和IgM | 第100页 |
| 3.兔抗Fcα/μR和pIgR多克隆抗体的制备 | 第100-102页 |
| 小结 | 第102-103页 |
| 参考文献 | 第103-106页 |
| 综述:滤泡树突状细胞(FDCs)上免疫复合物的功能 | 第106-112页 |
| FDCs的特点 | 第106-108页 |
| FDCs的来源和发育 | 第108-109页 |
| FDCs上的免疫复合物的作用 | 第109-112页 |
| 1.对生发中心发育的作用 | 第109-111页 |
| 2.对记忆B细胞的的作用 | 第111页 |
| 3.对亲和力成熟的作用 | 第111-112页 |
| 展望 | 第112-121页 |
| 附录1:重组质粒测序结果 | 第121-128页 |
| 附录2:论文发表情况 | 第128-129页 |
| 致谢 | 第129页 |
