| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-11页 |
| 1 引言 | 第11-25页 |
| ·乳糖酶 | 第11-20页 |
| ·乳糖酶来源 | 第11页 |
| ·β-半乳糖苷酶的应用 | 第11-14页 |
| ·真核基因表达系统 | 第14-20页 |
| ·重组酵母菌的高密度发酵表达 | 第20-22页 |
| ·pH 值的控制 | 第20-21页 |
| ·温度对发酵的影响 | 第21页 |
| ·溶氧对发酵的影响 | 第21-22页 |
| ·膜工程 | 第22-24页 |
| ·膜材料 | 第22页 |
| ·膜分离技术的分类 | 第22-23页 |
| ·膜组件结构 | 第23页 |
| ·膜分离技术的应用 | 第23页 |
| ·膜的污染与清洗 | 第23-24页 |
| ·本课题研究意义 | 第24-25页 |
| 2 实验一 乳糖酶基因真核重组表达载体的构建 | 第25-36页 |
| ·材料与方法 | 第25-31页 |
| ·材料 | 第25-26页 |
| ·方法 | 第26-31页 |
| ·结果与分析 | 第31-33页 |
| ·载体构建图 | 第31-32页 |
| ·载体和片段的制备结果 | 第32页 |
| ·重组质粒pPIC9-cDNA 酶切鉴定结果 | 第32-33页 |
| ·重组酵母转化子的筛选 | 第33页 |
| ·讨论 | 第33-35页 |
| ·甲醇营养型酵母表达系统的优点 | 第33-35页 |
| ·重组质粒pPIC9-cDNA 线性化的原因 | 第35页 |
| ·巴斯德毕赤酵母的转化方法的选择 | 第35页 |
| ·毕赤酵母发酵培养基的选择 | 第35页 |
| ·小结 | 第35-36页 |
| 3 实验二 重组毕赤酵母阳性转化子的分子检测 | 第36-48页 |
| ·材料与方法 | 第36-43页 |
| ·材料 | 第36-37页 |
| ·方法 | 第37-43页 |
| ·结果分析 | 第43-46页 |
| ·重组酵母中乳糖酶基因 PCR 鉴定 | 第43页 |
| ·重组酵母转化子的 Southern blotting 分析 | 第43-46页 |
| ·讨论 | 第46-47页 |
| ·PCR 和Southern 鉴定的选择 | 第46页 |
| ·膜的选择 | 第46-47页 |
| ·转移方法的选择 | 第47页 |
| ·小结 | 第47-48页 |
| 4 实验三 乳糖酶发酵工艺的摸索 | 第48-57页 |
| ·材料与方法 | 第48-51页 |
| ·材料 | 第48-49页 |
| ·实验方法 | 第49-51页 |
| ·结果分析 | 第51-54页 |
| ·发酵罐接种量对发酵的影响 | 第51-52页 |
| ·最佳补糖时间的确定 | 第52页 |
| ·菌体浓度的测定结果 | 第52-53页 |
| ·菌体湿重的测定结果 | 第53页 |
| ·乳糖酶活性的检测 | 第53-54页 |
| ·发酵上清 SDS-PAGE | 第54页 |
| ·发酵讨论 | 第54-56页 |
| ·毕赤酵母培养基碳源确定 | 第54-55页 |
| ·种子扩增 | 第55页 |
| ·发酵条件对产酶的影响 | 第55页 |
| ·甲醇的诱导方式 | 第55-56页 |
| ·小结 | 第56-57页 |
| 5 实验四 发酵液后处理 | 第57-63页 |
| ·材料与方法 | 第57-59页 |
| ·材料 | 第57页 |
| ·实验方法 | 第57-59页 |
| ·0.2μm 和20kD 中空纤维组件清洗步骤 | 第59页 |
| ·结果分析 | 第59-61页 |
| ·0.2μm 中空纤维组件膜通量随过滤时间的变化 | 第59页 |
| ·20kD 中空纤维组件处理乳糖酶发酵过程中适宜浓缩倍数的确定 | 第59-60页 |
| ·两种膜清洗结果 | 第60-61页 |
| ·讨论 | 第61-62页 |
| ·中空纤维组件的选择 | 第61-62页 |
| ·0.2μm 膜的选择 | 第62页 |
| ·20kD 膜的选择 | 第62页 |
| ·小结 | 第62-63页 |
| 6 结论 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-71页 |
| 作者简介 | 第71页 |